一种简便且灵活的接种方法，用于准确评估拟南芥及其他植物的白粉病侵染表型

白粉病是一种重要的植物病害。准确判断其病害表型需要对病原体进行均匀接种。由于现有方法效率较低，我们开发了本实验方案。

我们的孢子接种方法可轻松实现均匀接种，且操作简便、可扩展性强。因此，任何从事白粉菌研究的实验室均可轻松采用此方法。研究人员还可将网筛固定在纸板箱上，用于孢子接种。

如何将孢子震落并刷过筛网是关键步骤，因此通过视频演示可能非常有帮助。对于本实验方案，需准备一卷50 µm尼龙膜筛网或48 µm不锈钢筛网。

使用中等密度的胶合板，裁切出 24.5×10 英寸和 12×10 英寸的木板，用于制作接种箱。若要制作带网孔的可拆卸顶盖，将长条形木方裁成两组，长度分别为 26 英寸和 12.75 英寸，然后用胶水粘合并用钉子将四段木方固定在箱体四周。

取亚克力板，使用八个角夹将所有亚克力板组装成一个盒子。在盒子亚克力板的前侧切割一个7×2英寸的开口窗。为制备新鲜的白粉菌孢子作为接种物，将洁净的拟南芥免疫缺陷型pad4-1突变体植株置于22°C、相对湿度65%的生长室中培养六至八周。

在标准育苗盘中培育植株，以确定其感染表型。接种部分或全部 pad4-1 植株，以获得充足的活体白粉菌孢子。当获得来自感病植株的新鲜孢子后，将一盘植株移入接种室内的接种箱中，进行感染试验。

剪下15至20片严重感染的拟南芥叶片，如果有冷凝水，需先让其干燥。用一对长镊子将一到两片叶片倒置夹住，并用一只手握住。然后将双手穿过接种室的开口，用剪刀轻轻敲击镊子的手柄，同时缓慢地在接种箱上安装的网筛上方移动叶片。

使用精细的扇形混合刷，以不同方向将孢子刷过整个筛网表面，以最大限度地将孢子均匀分布在植株上。用刷子轻轻拍打筛网数次，使卡在筛网中的孢子脱落。待孢子沉降后，将接种后的植株连同育苗盘从接种箱中移出。

用塑料罩盖住培养盘，并将其置于22摄氏度、相对湿度65%的生长室中。接种后5天或8至12天可进行病害表型分析。通过移除纸箱的顶部和底部，用胶带固定箱角以加固，并在顶部用胶水安装一个50微米的网筛，将纸箱改造成接种箱。

将装有植物的托盘移入接种室，并将较小的接种盒放在托盘上以覆盖植物。然后震落并刷下孢子。制作一个略大于培养皿的微型接种盒。

将平板置于4°C冰箱中保存至使用。对每株待测植物，从叶柄基部切取一至两片完全展开的叶片。将离体叶片的叶柄以30度角插入琼脂培养基中。

在接种室内接种叶片，并将带盖的培养皿转移至生长室。为评估感染表型，于接种后四至五天将叶片转移至新鲜的无菌MS琼脂平板。在将叶片插入新鲜琼脂培养基前，剪去叶柄基部。

在接种后第八或第九天评估疾病表型。显微分析显示，培养皿底部载玻片上的孢子分布均匀。在低剂量接种后，六个不同位置的孢子密度计算结果显示无显著差异。

在使用孢子进行大量接种后，也获得了类似的结果。在大量接种后的第12天，检测了不同植物基因型之间的接种均匀性。与野生型植株哥伦比亚0（Columbia 0）相比，pad4-1植株表现出更强的疾病敏感性。

使用接种后约10天在感病植株上产生的足量新鲜孢子非常重要，因为新鲜孢子更容易脱落，且更易建立定殖。白粉菌仅定殖于植物表皮细胞。通过剥离表皮或激光显微切割分离受白粉菌侵染的细胞，将有助于更精准地开展宿主响应的转录组学和蛋白质组学研究。

该方法将帮助研究人员更高效地确定白粉病感染表型，从而促进对植物白粉病互作更有效的功能研究。