薄层色谱分析分枝杆菌的脂质成分

分枝杆菌脂质是属的重要特征，在宿主分枝杆菌相互作用中至关重要。速度和多功能性是此过程的主要优点。该方法可用于了解脂质的作用和分枝杆菌的致病性及其免疫刺激作用。

对于非共价连结脂质提取，在层压流罩下带有 PTFE 衬里螺丝盖的玻璃管中加入 15 毫升一至两个氯仿到甲醇溶液中。然后，从固体介质中划出200毫克的分枝杆菌，并将分枝杆菌添加到玻璃管中。用不断的搅拌在一夜之间孵育管子。

第二天，通过玻璃漏斗将有机溶剂过滤成玻璃管，该漏斗内衬过滤纸。使用氮气通量后，蒸发管中的液相，用氮气填充管子，将管子储存在摄氏四度。然后，在细胞碎屑中加入 15 毫升 2 到 1 氯仿的甲醇溶液，并通过不断搅拌在一夜之间孵育管子。

第二天早上，让混合物休息一小时，然后使用巴斯德移液器将有机溶剂转移到过滤纸衬里玻璃漏斗中，放入同一个玻璃收集管中。然后，蒸发液相，如所示，然后用氮气重新填充管中四摄氏度的储存。对于肌酸提取，在带PTFE衬里螺丝盖的密封玻璃管中加入2至5毫升的搅拌溶液和200毫克的分枝杆菌生物量，并通过涡流混合内含物。

在80摄氏度的干燥浴池中将混合物孵化过夜。第二天，当管子冷却室温时，加入两毫升N六烷，并通过漩涡混合30秒。让管子沉淀，直到出现两个清晰的相位，并将上 N 六烷相转移到新管中。

将另外两毫升N六烷与管内含物混合，并再次收集上层。然后，通过氮流蒸发管内的成分，并将覆盖在氮气中的样品储存在摄氏四度。如所示。要通过 TLC 将样品用一块滤纸覆盖 TLC 腔室的一面墙，请在腔室角添加凡士林来密封腔室，将溶剂混合物涂在过滤纸上，并将溶剂的剩余体积添加到 TLC 室的底部。

关闭 TLC 室至少 20 分钟以饱和。同时，溶解200至1000微升氯仿玻璃管中的脂质，并使用毛细管玻璃管将10微升脂质氯仿悬浮剂直接涂抹在TLC板上。允许样品干燥五分钟后，将板插入饱和 TLC 室，并允许移动相流穿过 TLC。

当溶剂到达离板的上端一厘米时，将板置于层压通量下，直到二氧化硅完全干燥。然后，在乙醇中用 15 到 20 毫升 10% 摩尔数据磷酸水合物喷洒干板，直到板为亮黄色，并在 120 摄氏度下加热板两到五分钟。在这种具有代表性的分析中，利用两种不同的脱液系统和二维TLC，通过一维TLC对从各种分枝杆菌中提取的支核酸进行了分析。

还进行了两种甲基化程序，以确认五型肌酸的存在。在这两个分化系统中，肌酸大约位于板的中间，尽管，与五型肌酸对应的点，只有在皂化后才被观察到。二维TLC还允许识别单个肌酸类型。

例如，支核酸只表示一型肌酸，肌杆菌BCG表示一型和四型，分子细菌表示一型和五型，分不分母体表示一型和二型肌酸。从各种分枝杆菌物种的总脂质提取物被分析在其极性和大小的功能。它揭示了大多数A极地脂质，如PDIM，存在于麦芽草，但不是在分温杆菌，分核酸菌布鲁马和M abcesus的光滑的太平缓型。

酚酸甘油脂只存在于BCG的分细菌中，而糖肽只在分不育的样品中观察到。与霉菌酸类似，乙酰甘油和 PDIM、PIM 也可以通过一维 TLC 或 2D TLC 分析轻松可视化。使用两种类型的污渍在一维 TLC 中显示 PIM。

在尝试此协议时，要记住的最重要的事情是在整个过程中不要使用任何塑料仪器。