一种改良的ApoE基因敲除小鼠后肢缺血外科模型^-/- 采用微型切口的小鼠手术

今天我们介绍了一种简化的、经过改良且手术效率更高的方法，用于在ApoE小鼠中建立后肢缺血模型。该方法可在任何动物实验设施中实施。该方法的主要优势在于侵入性低，仅需小于五毫米的切口即可完成操作。

该方法存在学习曲线。因此，我们建议在用于最终分析的动物实验之前，先在显微外科模型上进行练习。本方法将由我实验室的医学博士研究生严凯旋（Kaixuan Yan）进行演示。

首先准备手术所需的设备和工具。对小鼠实施麻醉后，在其眼睛上涂抹眼膏以防止角膜干燥。然后将小鼠置于加热垫上，以维持其核心体温在约 37 摄氏度。

使用棉签和脱毛膏，仔细去除右侧后肢皮肤上的毛发。将小鼠仰卧位放置在解剖显微镜下的加热垫上。用酒精对皮肤进行消毒，并用棉签从切口的远端方向擦拭。

使用尖头镊子和手术剪，在腹股沟区域中部做一长约三至四毫米的切口。借助精细的尖头镊子小心去除皮下脂肪组织，以暴露近端股骨的神经血管束。用生理盐水润湿的棉签，小心地将股动脉从股神经和股静脉处分离。

然后使用7.0缝线的线尖小心刺破股鞘膜。接着将两条7-0可吸收缝线穿过近端股动脉，并使用弹簧剪打双重结。之后在两道结扎线之间横断股动脉。

将6-0可吸收缝线穿过切口下缘，并轻柔地将切口牵拉至后肢膝关节右侧区域，以暴露股骨远端动脉。小心移开皮下组织，暴露神经血管束。分离股动脉与股静脉及股神经，并用棉片保护神经。

然后使用7.0缝线的针尖刺破股鞘膜。将两根7-0可吸收缝线穿过远端股动脉，并使用弹簧剪刀打双重结，在两结之间横断股动脉。随后，使用6-0可吸收缝线缝合切口。

将小鼠置于清洁笼盒中的加热垫上，并持续监测其生命体征直至恢复。通过磁共振成像（MRI）在术后次日评估股动脉双侧结扎（DLFA）是否成功。在进行DLFA手术前，小鼠的体重范围为29.6至38.0克。

DLFA手术后7天，体重范围为26.5至34.1克，显著低于DLFA术前体重。右侧前肢动脉的近端和远端区域均无灌注。手术后1天，Tarlov评分显著降低。

尽管在随后的几天中逐渐升高，但直到第7天仍低于基线水平。七只小鼠缺血后肢的足爪与对侧相比无法自然伸展。此外，其中四只小鼠的足爪与对侧相比出现轻微变色。

右旋股肌的H&E染色显示，肌纤维呈现不规则的缺血性坏死，增殖的卫星细胞已取代坏死的肌纤维，并呈团块状或规则性分散分布。伴有多个核巨噬细胞炎性浸润的肌纤维已失去其正常的形态学特征，仅见极少量再生肌纤维。这些再生肌纤维的横切面呈圆形。

细胞质被染成红色，一个小型细胞核或多个细胞核位于中央。然而，在左侧骨骼肌中未观察到此类炎症模式。通过CD31抗体染色观察微血管密度，结果显示缺血侧后肢的微血管密度显著高于非缺血侧。最重要的是股动脉的解剖分离。

操作者需具备显微外科技术经验，并熟悉小鼠后肢解剖结构。原则上，该方法也可用于研究腿部的缺血-再灌注损伤。此时可在允许再灌注前，使用柔软的血管夹闭合动脉。