Name: 大小排除色谱分析细菌外膜囊性异质性 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-03-31T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: 学习使用尺寸排阻色谱法分离Aggregatibacter actinomycetemcomitans产生的异质性细菌外膜囊泡。该方法比超速离心更快速、经济且可重复，能有效去除核酸和蛋白质，为囊泡分析提供可靠技术。

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本工作由美国国家科学基金会（1554417）和美国国立卫生研究院（DE027769）资助。

1. 缓冲液的配制
<ol>
	<li>配制 ELISA 洗涤缓冲液：将 3.94 g Tris-base、8.77 g NaCl 和 1 g 牛血清白蛋白（BSA）加入 1 L 去离子水（DI）中，再加入 500 µL 吐温-20（polysorbate-20）。用 HCl 或 NaOH 调节 pH 至 7.2。</li>
	<li>配制封闭缓冲液：将 3.94 g Tris-base、8.77 g NaCl 和 10 g BSA 加入 1 L 去离子水（DI）中，再加入 500 µL 吐温-20（polysorbate-20）。用 HCl 或 NaOH 调节 pH 至 7.2。</li>
	<li>配制洗脱缓冲液（PBS）：将 8.01 g NaCl、2.7 g KCl、1.42 g Na2HPO4 和 0.24 g KH2PO4 加入 1 L 去离子水中，用 HCl 或 NaOH 调节 pH 至 7.4。 
	​注意：可配制该缓冲液的 10 倍浓缩液，使用时根据需要以去离子水稀释。</li>
</ol>
2. 外膜囊泡样本的制备
<ol>
	<li>培养 A. actinomycetemcomitans 将细胞培养至对数生长后期（600 nm 处光密度为 0.7）。在 10,000 × g 条件下离心两次，收集细胞沉淀 x g 在 4 °C 10分钟。将上清液通过滤膜过滤 0.45 µm 过滤器</li>
	<li>使用50 kDa分子量截断滤器浓缩无菌上清液。将浓缩后的溶液在105,000 x g条件下超速离心 4 °C 30 分钟。 </li>
	<li>将沉淀重悬于PBS中，再次进行超速离心（105,000 × g，4 °C，1 h） x g 在 4 °C 孵育30分钟。将沉淀重悬于2 mL PBS中。</li>
</ol>
3. 装填 S-1000 柱
<ol>
	<li>用玻璃搅拌棒混匀凝胶过滤介质的储存瓶，倒出足够填充层析柱体积的介质，并额外多取约50%（约135 mL）。让介质珠静置至完全沉降，倾去上清液。用洗脱缓冲液重悬介质珠，使最终混合液中凝胶体积约占70%，缓冲液约占30%。在真空条件下对溶液进行脱气处理。</li>
	<li>使用铁架台将玻璃层析柱垂直固定，并加入洗脱缓冲液润湿柱管内壁。排出缓冲液，直至柱内剩余约1 cm高的缓冲液液面。</li>
	<li>避免产生气泡，小心地用移液器将介质珠缓慢加入层析柱中，直至填满柱管顶部。在此过程中持续排出多余的缓冲液。注意在向柱顶添加更多介质珠之前，不要让已加入的介质珠完全沉降。介质填充高度应距离柱上端储液部分底部约2 cm处为止。</li>
</ol>
4. 上样并收集组分
<ol>
	<li>在真空条件下对洗脱缓冲液进行脱气。用两倍柱体积（180 mL）的洗脱缓冲液清洗层析柱。</li>
	<li>让剩余缓冲液完全进入层析柱。当缓冲液流至凝胶层顶部时，小心地将含有OMV的2 mL样品（脂质浓度约为100 - 200 nmol/L）用移液器加至凝胶表面，注意不要扰动柱顶的凝胶颗粒。让样品完全进入凝胶，即液体完全沉降至凝胶层以下，无液体残留于凝胶上方。</li>
	<li>在凝胶柱顶部小心且缓慢地加入洗脱缓冲液。切勿扰动凝胶的顶层，以免导致样品稀释。</li>
	<li>在柱下放置一个50 mL收集管并打开柱阀。收集前20 mL流出液。根据需要，小心地向柱顶补充洗脱缓冲液，确保柱体始终不干燥。</li>
	<li>在柱下依次放置一系列1.5 mL离心管。打开柱阀，开始收集，每管收集1 mL流出液。在收集过程中，根据需要持续向柱顶添加洗脱缓冲液。重复此步骤直至收集完96个组分，然后关闭层析柱。 
	注意：样品若需长期保存，应储存于-20 °C；短期保存可置于4 °C，直至后续分析。</li>
	<li>清洗层析柱时，先用一倍柱体积（90 mL）的0.1 M NaOH溶液过柱，再用两倍柱体积（180 mL）的洗脱缓冲液冲洗层析柱。</li>
</ol>
5. 样品分析
<ol>
	<li>为测定各组分中的脂质浓度，将每种组分各50 µL移取至96孔板的单个孔中。向每个孔中加入2.5 µL亲脂性染料，孵育15秒。使用酶标仪在激发波长515 nm、发射波长640 nm条件下测定荧光强度。为计算各样品中各组分的脂质占比，需将所有发射荧光强度加和，再将每个单独强度除以总强度。</li>
	<li>为测定特定蛋白质的浓度，将每种组分各100 µL移取至ELISA免疫板的单个孔中，在25 °C孵育3小时。
	<ol>
		<li>倾去样品，向每个孔中加入200 µL ELISA洗涤缓冲液，倾去液体，重复此步骤四次，共洗涤五次。</li>
		<li>向每个孔中加入200 µL封闭缓冲液，在25 °C孵育1小时，然后倾去液体。</li>
		<li>将板与含一抗的100 µL封闭缓冲液（纯化抗体按1:10,000稀释；未纯化抗体按1:10稀释）在4 °C孵育过夜，然后倾去液体。</li>
		<li>向每个孔中加入200 µL ELISA洗涤缓冲液，倾去液体，重复此步骤四次，共洗涤五次。</li>
		<li>向每个孔中加入含二抗（1:30,000稀释）的100 µL ELISA洗涤缓冲液，在25 °C孵育1小时。</li>
		<li>向每个孔中加入200 µL ELISA洗涤缓冲液，倾去液体，重复此步骤四次，共洗涤五次。</li>
		<li>向每个孔中加入100 µL 3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB）单组分溶液，孵育15–30分钟，或直至出现蓝色。加入50 µL终止液以终止TMB反应。</li>
		<li>使用酶标仪在450 nm波长下测定各孔的吸光度。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>为测定总蛋白浓度，使用紫外-可见分光光度计测定各组分在280 nm波长下的吸光度（A280）。</li>
</ol>
该实验方案的示意图见图1。
<img alt="凝胶过滤层析示意图；柱子填装、OMV取样、荧光、吸光度测量。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62429/62429fig01.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="图1"> 
图1：SEC操作流程示意图。 使用脱气的凝胶过滤介质小心地填装层析柱，避免产生气泡和断层，随后用两倍柱体积的洗脱缓冲液洗涤。接着，将样品小心地用移液器加至凝胶顶部，避免扰动凝胶填装。打开层析柱，使样品完全进入凝胶。此时，在柱顶加入缓冲液，并收集前20 mL的洗脱液。随后，连续收集一系列1 mL的组分。将这些组分置于96孔板或96孔免疫板中，用于脂质和蛋白质含量的分析。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62429/62429fig01large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>

<ol><li>Kuehn, M. J., Kesty, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+outer+membrane+vesicles+and+the+host-pathogen+interaction%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+and+Development%22%5BJournal%5D)">Bacterial outer membrane vesicles and the host-pathogen interaction.</a> Genes and Development. 19, 2645-2655 (2005).</li>
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<li>Stevenson, T. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunization+with+outer+membrane+vesicles+displaying+conserved+surface+polysaccharide+antigen+elicits+broadly+antimicrobial+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Immunization with outer membrane vesicles displaying conserved surface polysaccharide antigen elicits broadly antimicrobial antibodies.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 115 (14), 3106-3115 (2018).</li>
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<li>Benedikter, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrafiltration+combined+with+size+exclusion+chromatography+efficiently+isolates+extracellular+vesicles+from+cell+culture+media+for+compositional+and+functional+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Science+Reports%22%5BJournal%5D)">Ultrafiltration combined with size exclusion chromatography efficiently isolates extracellular vesicles from cell culture media for compositional and functional studies.</a> Science Reports. 7 (1), 15297(2017).</li>
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<li>Lally, E. T., Golub, E. E., Kieba, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+immunological+characterization+of+the+domain+of+Actinobacillus+actinomycetemcomitans+leukotoxin+that+determines+its+specificity+for+human+target+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Identification and immunological characterization of the domain of Actinobacillus actinomycetemcomitans leukotoxin that determines its specificity for human target cells.</a> Journal of Biological Chemistry. 269 (49), 31289-31295 (1994).</li>
<li>Chang, E. H., Giaquinto, P., Huang, J., Balashova, N. V., Brown, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epigallocatechin+gallate+inhibits+leukotoxin+release+by+Aggregatibacter+actinomycetemcomitans+by+promoting+association+with+the+bacterial+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Oral+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Epigallocatechin gallate inhibits leukotoxin release by Aggregatibacter actinomycetemcomitans by promoting association with the bacterial membrane.</a> Molecular Oral Microbiology. 35 (1), 29-39 (2020).</li>
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</ol>

作者声明无利益冲突。

本文提供了一种简单、快速且可重复的细菌外膜囊泡（OMV）亚群分离方案。尽管该技术相对直接，但某些步骤必须极为谨慎地操作，以确保在层析柱中实现有效的分离。首先，必须小心而缓慢地将凝胶装入层析柱中，以避免产生气泡。我们发现，在装柱前将凝胶于室温下放置数小时，可使凝胶充分平衡，并显著减少层析柱内气泡的形成。将凝胶通过移液枪加入层析柱时，应沿着柱壁缓慢加入，以尽量减少湍流。在整个装柱过程中，层析柱内应始终保持过量的缓冲液，防止已沉降的凝胶出现断层。若发生断层，应添加更多缓冲液，并通过上下吹打使凝胶重新悬浮。
同样，将样品上样到层析柱中是至关重要的步骤。由于样品在通过层析柱时会被稀释，因此在进行尺寸排阻层析（SEC）分离前，上样样品应具有足够的浓度。对于A. actinomycetemcomitans的外膜囊泡（OMVs），我们发现含有约100–200 nmol/L脂质的1 mL样品最为理想。将样品小心地加至层析柱顶部时，应避免扰动凝胶层，待样品完全进入凝胶柱后即开始运行层析柱。此时应停止运行，以便小心地在凝胶顶部加入一层缓冲液。建议仅加入少量缓冲液（约1 mL），以确保不...

革兰氏阴性菌在生长过程中会释放来源于其外膜的囊泡，即外膜囊泡（outer membrane vesicles, OMVs）。这些OMV通过携带多种重要的生物分子（包括DNA/RNA、蛋白质、脂质和肽聚糖），在细胞间通讯中发挥重要作用，不仅介导细菌与宿主之间的相互作用，也参与细菌细胞之间的交流1,2。特别是，由于OMV富含某些毒力因子和毒素，其在细菌致病过程中的作用已被广泛研究3,4,5,6,7,8,9,10,11。
据报道，外膜囊泡（OMVs）的大小范围为20至450 nm，具体尺寸取决于母体细菌种类及其生长阶段，且多种细菌释放的OMVs在尺寸上具有异质性8,12,13,14，这些OMVs在蛋白质组成及进入宿主细胞的机制方面也存在差异12。H. pylori释放的OMVs直径范围为20至450 nm，其中较小的OMVs比大型OMVs具有更均一的蛋白质组成。重要的是，观察到这两类OMVs通过不同的机制被宿主细胞内化12。此外，我们已证实Aggregatibacter actinomycetemcomitans会同时释放一群小型（&#60;150 nm）和一群大型（&#62;350 nm）的OMVs，且这些OMVs含有大量分泌型蛋白毒素——白细胞毒素（LtxA）15。尽管OMVs的异质性在细胞过程中所起的作用显然重要，但分离和分析不同囊泡群体的技术困难限制了相关研究的开展。
除了在细菌致病性中的重要作用外，外膜囊泡（OMVs）还被提议用于多种生物技术应用，例如作为疫苗和药物递送载体16,17,18,19,20。为了在这些应用中实现转化，需要获得纯净且单分散的囊泡制剂。因此，必须采用有效&#160;且高效的分离方法。
最常用的方法是密度梯度离心（DGC），用于将大小异质的囊泡群体与细胞碎片（包括鞭毛和分泌蛋白）分离21；该方法也被报道可用于分离大小异质的外膜囊泡（OMV）亚群12,13,14。然而，DGC 耗时较长、效率较低，且不同操作者之间的结果重复性差22，因此不适合放大生产。相比之下，尺寸排阻色谱（SEC）是一种可放大、高效且结果一致的 OMV 纯化方法21,23,24。我们发现，使用一根长（50 cm）、重力流的填充凝胶过滤介质的 SEC 柱，足以高效纯化并分离 OMV 的不同亚群。具体而言，我们采用该方法将 A. actinomycetemcomitans 的 OMV 分离为&#34;大&#34;和&#34;小&#34;亚群，同时去除蛋白质和 DNA 污染。整个纯化过程在 4 小时内完成，实现了 OMV 亚群的完全分离以及碎片的有效去除。

<table><tbody><tr><td>一步法超敏TMB-ELISA</td><td>Thermo Scientific</td><td>34028</td><td></td></tr><tr><td>Amicon 50 kDa 滤膜</td><td>Millipore Sigma</td><td>UFC905024</td><td></td></tr><tr><td>牛血清白蛋白（BSA）</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP9704-100</td><td></td></tr><tr><td>ELISA 免疫板</td><td>Thermo Scientific</td><td>442404</td><td></td></tr><tr><td>FM 4-64</td><td>Thermo Scientific</td><td>T13320</td><td>1.5 x 50 cm</td></tr><tr><td>玻璃 Econo-Column 层析柱</td><td>BioRad</td><td>7371552</td><td></td></tr><tr><td>Infinite 200 Pro 酶标仪</td><td>Tecan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>氯化钾（KCl）</td><td>Amresco (VWR)</td><td>0395-500G</td><td></td></tr><tr><td>无水磷酸二氢钾（KH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;PO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;）</td><td>Amresco (VWR)</td><td>0781-500G</td><td></td></tr><tr><td>Sephacryl S-1000 超细凝胶</td><td>GE Healthcare</td><td>17-0476-01</td><td></td></tr><tr><td>氯化钠（NaCl）</td><td>Fisher Chemical</td><td>S271-3</td><td></td></tr><tr><td>无水磷酸氢二钠（Na&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;HPO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;）</td><td>Amresco (VWR)</td><td>0404-500G</td><td></td></tr><tr><td>Tris 碱</td><td>VWR</td><td>0497-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Tween&lt;sup&gt;(R)&lt;/sup&gt; 20</td><td>Acros Organics</td><td>23336-2500</td><td></td></tr></tbody></table>

利用尺寸排阻色谱分析细菌外膜囊泡的异质性

Size Exclusion Chromatography to Analyze Bacterial Outer Membrane Vesicle Heterogeneity

革兰氏阴性菌的细胞壁由内膜（细胞质膜）和外膜（OM）组成，两者之间由一层薄的肽聚糖隔开。在生长过程中，外膜可出芽形成球形的外膜囊泡（OMVs）。这些OMVs参与多种细胞功能，包括向宿主细胞递送 cargo 以及与细菌细胞进行通讯。近年来，OMVs的治疗潜力开始受到关注，例如作为疫苗或药物递送载体的应用。尽管OMVs来源于外膜，但长期以来人们已认识到其脂质和蛋白质 cargo 与外膜本身存在差异，且差异往往显著。最近研究发现，细菌能够释放多种类型的OMVs，并有证据表明OMVs的大小会影响其被宿主细胞摄取的机制。然而，该领域的研究受限于难以高效分离不同大小的异质性OMVs。传统上采用密度梯度离心（DGC）进行此类分离，但该技术耗时较长且难以放大。相比之下，尺寸排阻色谱法（SEC）操作更为简便，并更适用于未来OMVs在治疗应用中的规模化制备。本文中，我们描述了一种SEC方法，可实现对不同大小囊泡的可重复分离，以由 伴放线聚集杆菌，直径范围从小于150 nm到大于350 nm。我们展示了分离 &#34;大&#34; (350 nm) OMVs 和 &#34;小&#34; (&#60;150 nm）的OMVs，并通过动态光散射（DLS）进行验证。由于尺寸排阻色谱（SEC）法在操作简便性、可重复性（包括不同操作者之间的一致性）以及可放大性方面具有优势，我们推荐使用基于SEC的方法而非基于密度梯度离心（DGC）的方法来分离不同大小的囊泡。

图2展示了该方法的代表性结果。A. actinomycetemcomitans JP2菌株产生的外膜囊泡（OMVs）首先通过超速离心法从培养上清液中纯化获得15。我们先前发现，该菌株可产生两种OMV群体，一种直径约为300 nm，另一种直径约为100 nm15。为分离这两种OMV群体，我们采用上述尺寸排阻色谱（SEC）方案对样品进行纯化。每个洗脱组分均使用亲脂性染料检测其脂质含量，并通过酶联免疫吸附试验（ELISA）或免疫印迹法检测其毒素（LtxA）含量。脂质和毒素浓度以百分比形式表示，“%脂质”表示每个组分中脂质含量占样品总脂质含量的百分比，“%毒素”表示每个组分中毒素含量占样品总毒素含量的百分比。
图2A展示了三次独立纯化实验（由三位不同操作者完成）的平均脂溶性染料结果及其标准差，证明了该技术的可重复性。结果显示两个明显的脂质峰，分别对应“大”型外...

细菌囊泡在致病过程中发挥重要作用，并具有广阔前景的生物技术应用价值。由于囊泡具有异质性，其分析和应用受到限制；因此，亟需一种简单且可重复的方法来分离不同大小的囊泡。本文中，我们展示了利用尺寸排阻色谱法分离由Aggregatibacter actinomycetemcomitans产生的异质性囊泡。

革兰氏阴性菌的细胞壁由内层（细胞质膜）和外膜（OM）组成，两者之间由一层薄的肽聚糖隔开。 throughout ...

尺寸排阻色谱法是一种用于分离大小不均一的细菌囊泡亚群以及去除细菌上清液中核酸和蛋白质的有效方法。与其他分离技术（包括密度梯度超速离心法）相比，尺寸排阻色谱法成本更低、速度更快且可重复性更高。我们已利用伴放线聚集杆菌（A.actinomycetemcomitans）囊泡验证了该方法的潜力，但预计该方法也可适用于其他大小不均一的细菌囊泡群体。务必对所有缓冲液和珠子溶液进行充分脱气，并缓慢移液，避免引入气泡，同时移液速度需足够快，以确保珠子均匀沉降而不会干燥。开始时，用玻璃棒混匀凝胶过滤介质的储存瓶，将足以填满层析柱体积外加约50%过量的介质倒入玻璃瓶中。静置使珠子沉降，然后倾去上清液。将珠子重悬于洗脱缓冲液中，得到终浓度约为70%凝胶和30%缓冲液的溶液，并在真空条件下脱气。将层析柱垂直固定在铁架台上，先用洗脱缓冲液充满层析柱以润湿管壁，然后排出缓冲液至仅剩约1厘米高度。随后，小心地用移液器将凝胶珠加入层析柱中，同时持续排出多余的缓冲液，防止珠子沉降，直至柱床填充至柱储液器底部下方约两厘米的高度。上样前，在真空条件下对洗脱缓冲液进行脱气处理。用约两倍柱体积的洗脱缓冲液冲洗层析柱。当缓冲液流至凝胶层顶端时，小心地将2毫升浓度为100至200纳摩尔/升的外膜囊泡样品加至凝胶层上方，避免扰动凝胶表面，并让样品进入凝胶。缓慢将洗脱缓冲液加入柱子中，注意不要扰动凝胶层，并在柱子下方放置一个50毫升的收集管。为防止柱子干燥，需同时向柱子顶部添加洗脱缓冲液。收集20毫升洗脱液后，在柱子下方放置一排1.5毫升的收集管。每管收集总共96个一毫升的组分。在收集样品的同时，持续向柱中添加洗脱缓冲液。清洗柱时，先将一个柱体积的0.1摩尔氢氧化钠溶液通过柱，随后用两个柱体积的洗脱缓冲液冲洗。为测定脂质浓度，将每种组分各50微升移入96孔板中。向每个孔中加入2.5微升亲脂性染料。15秒后，测定荧光强度。为了测定目标蛋白的浓度，将每种组分各100微升加入ELISA免疫板的各个孔中。在25摄氏度下孵育3小时后，倾去板内液体。每次用200微升ELISA洗涤缓冲液洗涤，共洗涤5次，每次洗涤后均需倾去板内液体。每孔加入 200 µL 封闭缓冲液，在 25 °C 下孵育 1 小时。孵育结束后，倾去孔内液体，每孔加入 100 µL 溶于封闭缓冲液中的一抗，于 4 °C 过夜孵育。次日，倾去孔内液体，用 ELISA 洗涤缓冲液洗涤 5 次，操作如示。最后一次洗涤后，每孔加入100 µL ELISA洗涤缓冲液中的二抗，于25°C孵育1小时。孵育结束后，按前述方法洗涤平板，每孔加入100 µL TMB溶液，室温孵育15至30分钟。当出现蓝色时，每孔加入50 µL终止液，并在450 nm处测定吸光度。在对伴放线放线杆菌（A. actinomycetemcomitans）培养上清液进行尺寸排阻层析纯化后，观察到两个明显的脂质峰，分别对应于该菌株产生的大尺寸和小尺寸外膜囊泡。对样品组分进行ELISA分析显示，毒素主要与大尺寸外膜囊泡亚群相关。免疫印迹分析结果趋势相似，但背景噪声较高，表明该方法的灵敏度低于ELISA。如所观察到的，该色谱技术能够从外膜囊泡的制备物中去除大量游离蛋白。然而需要注意的是，总蛋白浓度并不一定与特定蛋白的浓度相关。在柱子的装填和运行过程中，必须格外小心，以避免产生气泡，并防止柱子干燥。在尺寸排阻色谱分离外膜囊泡后，可进行动态光散射、粒子追踪和双显微镜分析，以确定分离得到的外膜囊泡的大小及其他特性。

size-exclusion-chromatography-to-analyze-bacterial-outer-membrane

Research

科研

JoVE Journal

Bioengineering

生物工程

大小排除色谱分析细菌外膜囊性异质性

来源：Watson, D. C., et.al. 大肠杆菌及其他细菌来源细胞外囊泡的可扩展分离与纯化. J. Vis. Exp.

细菌外膜来源的胞外囊泡的分离与富集

来源：Watson, D. C., 等. 从大肠杆菌及其他细菌中可扩展地分离与纯化细胞外囊泡. J. Vis. Exp.

使用尺寸排阻色谱法分离细菌胞外囊泡

在本视频中，我们演示一种技术——尺寸排阻色谱法，用于分离来源于细菌的异质性外膜囊泡（OMV）群体。这些囊泡为纳米级球形结构，可通过尺寸排阻色谱法根据其大小分离为大尺寸和小尺寸亚群。...

基于尺寸排阻色谱法分离细菌胞外囊泡：一种根据尺寸分离革兰氏阴性菌外膜囊泡异质群体的技术

尺寸排阻色谱法，细菌胞外囊泡，外膜囊泡，革兰氏阴性菌，囊泡分离，尺寸分离，纳米颗粒，生物分离技术

在本视频中，我们演示了一种荧光检测尺寸排阻色谱技术，用于在去垢剂溶解后筛选大肠杆菌（Escherichia...

荧光检测尺寸排阻色谱法：一种用于鉴定去垢剂溶解后荧光标记膜蛋白完整性的技术

本视频演示了利用尺寸排阻色谱法（SEC）从结核分枝杆菌（Mycobacterium...

一种用于纯化分枝杆菌胞外囊泡的尺寸排阻色谱技术

细菌会分泌携带生物活性分子的纳米级细胞外囊泡（EVs）。EV研究主要关注其生物发生机制、在微生物间及宿主-微生物相互作用和疾病中的作用，以及潜在的治疗应用。本文介绍了一种可放大的从多种细菌中分离EV的方法流程，以促进EV研究的标准化。...

可扩展的细胞外囊泡分离与纯化方法 大肠杆菌 及其他细菌

本方案详细描述了从蓝细菌培养物中分离、浓缩和表征细胞外囊泡的方法。同时讨论了从不同规模培养物中纯化囊泡的技术路径、各方法之间的权衡，以及处理野外样品时的注意事项。...

蓝细菌胞外囊泡的分离与表征

本方案表明，可利用尺寸排阻色谱法从细胞培养条件培养基中有效分离出细胞外囊泡。...

利用尺寸排阻色谱法从细胞条件培养基中分离细胞外囊泡

该方案描述了尺寸排阻色谱法，一种简便且可重复的富集技术 结核分枝杆菌 来自培养上清液的细胞外囊泡...

Mycobacterium tuberculosis 通过尺寸排阻色谱法富集细胞外囊泡

细胞外囊泡在生物医学应用中具有巨大潜力，但目前的分离方法耗时较长，且难以适用于临床。在本研究中，我们介绍了一种微流控装置，可对大量生物流体进行连续、步骤极少的细胞外囊泡直接分离。...

利用分流式A4F微流控芯片单步分离大体积样品中的细胞外囊泡

本方案描述了从小鼠骨骼肌和骨髓中分离小细胞外囊泡的方法，该方法结合酶消化和尺寸排阻色谱技术，能够从结构复杂且产量较低的组织中可重复地回收富含囊泡的组分，用于后续分子分析。...

通过尺寸排阻色谱法从小鼠骨骼肌和骨髓中分离小细胞外囊泡

学习使用尺寸排阻色谱法分离Aggregatibacter actinomycetemcomitans产生的异质性细菌外膜囊泡。该方法比超速离心更快速、经济且可重复，能有效去除核酸和蛋白质，为囊泡分析提供可靠技术。

利用尺寸排阻色谱分析细菌外膜囊泡的异质性

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