Name: 体外 人体牙浆干细胞向胰腺血统的诱导 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-09-25T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 32 s
Description: 了解体外诱导人牙髓干细胞分化为胰岛素分泌细胞的方法，比较整合型与非整合型诱导方案的效率差异。该技术为糖尿病再生医学治疗提供了新的细胞来源。

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SK、WR 和 QDL 得到朱拉隆功大学拉差达披色颂蓬基金兽医干细胞与生物工程研究单元的支持。TO 和 PP 得到朱拉隆功大学学术提升计划的支持。nd 世纪项目。CS 受泰国朱拉隆功大学兽医学院研究支持基金资助，该基金用于推动朱拉隆功大学迈向卓越发展。nd 世纪项目、兽医干细胞与生物工程研究组、朱拉隆功大学拉差达披色颂波基金及政府研究基金。

本研究遵循赫尔辛基宣言的规定，并经朱拉隆功大学牙科学院人类研究伦理委员会批准（批准号：HREC-DCU 2018/054）。人牙髓干细胞（hDPSCs）分离自因智齿问题拔除的前磨牙和磨牙中的人牙髓组织。所有患者均在经批准的方案下签署了知情同意书。
1. 整合诱导方案
<ol>
	<li>携带PDX1的慢病毒载体的制备
	<ol>
		<li>使用人胚胎肾（HEK）293FT细胞进行病毒包装。将这些细胞培养并维持在添加了10%胎牛血清（FBS）、1% L-谷氨酰胺和1%抗生素-抗真菌剂的杜尔贝科改良伊格尔培养基（DMEM）中。</li>
		<li>通过磷酸钙转染系统，将包装质粒和包膜质粒各10 µg以及靶基因质粒20 µg共转染至HEK293FT细胞中，以生成PDX1-慢病毒载体，例如psPAX2、pMD2.G和人源pWPT-PDX111。确保细胞在感染时融合度达到80%-90%。</li>
		<li>在转染后48小时和72小时收集含有慢病毒颗粒的培养基。</li>
		<li>使用0.45 µm滤器过滤收集的培养基；使用截留分子量为100 kDa的超滤离心浓缩器对病毒进行浓缩。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>PDX1过表达
	<ol>
		<li>使用传代3-5代、融合度为70-80%的人牙髓干细胞（hDPSC）。用胰蛋白酶消化并使用细胞计数器计数细胞。将1 × 106个hDPSC接种至60 mm组织培养处理过的培养皿中，过夜孵育。</li>
		<li>24小时后，将步骤1.1.4中获得的新鲜病毒颗粒加入已预先用polybrene处理的细胞中（4 µg/mL polybrene，37 °C、5% CO2条件下孵育30分钟），以达到所需的感染复数（MOI）。例如，本实验中使用的MOI为20。将细胞在37 °C、5% CO2的细胞培养孵箱中继续培养24小时。</li>
		<li>24小时感染期结束后，弃去含有病毒颗粒的培养基。加入新鲜培养基，继续培养细胞48小时。所有培养均在37 °C、5% CO2条件下维持。</li>
		<li>在进入诱导步骤前，观察转染细胞的聚集形态。PDX1的转导通过基因表达分析进行验证（补充图1）。 
		注意：在进行下一步操作前，应在显微镜下检查细胞形态。</li>
		<li>收集细胞，并进入三步诱导方案（步骤1.3），作为微环境诱导策略。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>三步诱导方案 
	注意：该三步诱导方案利用无血清培养基（SFM）-A、SFM-B和SFM-C，依次将hDPSC诱导分化为定型内胚层、胰腺内胚层/内分泌前体以及胰腺β细胞/胰岛样细胞簇（IPCs）。
	<ol>
		<li>弃去培养基，然后用1×磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤转导后的hDPSC。</li>
		<li>向细胞中加入0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，在37 °C、5% CO2条件下孵育1分钟。</li>
		<li>加入培养基以终止胰蛋白酶活性，并轻轻吹打使细胞脱落，获得单细胞悬液。计数细胞，并将1 × 106个细胞分装至每个收集管中。</li>
		<li>将细胞悬液在468 × g（相对离心力：RCF）、4 °C条件下离心5分钟。弃去上清液，保留细胞沉淀。</li>
		<li>将沉淀重悬于3 mL第一阶段胰腺诱导培养基，即无血清培养基（SFM）-A中。将细胞接种至低吸附培养板（60 mm）中。在37 °C、5% CO2条件下培养3天。 
		注意：在进入下一步前，应在倒置显微镜下观察细胞形态。</li>
		<li>移除SFM-A，加入3 mL第二阶段诱导培养基，即SFM-B。在37 °C、5% CO2条件下继续培养2天。 
		注意：在进入下一步前，应在倒置显微镜下观察细胞形态。</li>
		<li>移除SFM-B，加入3 mL第三阶段诱导培养基，即SFM-C。在37 °C、5% CO2的细胞培养孵箱中继续培养5天。每48小时更换一次培养基。5天后观察其形态。 
		注意：各阶段诱导培养基中添加的试剂如下：SFM-A：1%牛血清白蛋白（BSA）、1×胰岛素-转铁蛋白-硒（ITS）、4 nM激活素A、1 nM丁酸钠和50 µM β-巯基乙醇；SFM-B：1% BSA、1× ITS和0.3 mM牛磺酸；SFM-C：1.5% BSA、1× ITS、3 mM牛磺酸、100 nM胰高血糖素样肽（GLP）-1、1 mM烟酰胺和1×非必需氨基酸（NEAAs）。</li>
		<li>确保在每一步后均在倒置显微镜下检查细胞形态。细胞将逐渐形成更明显的聚集体，并以细胞团形式悬浮生长。</li>
		<li>收集细胞团用于进一步分析。检查细胞团的形态和大小。进行胰腺相关基因标志物表达分析及功能分析（葡萄糖刺激的C肽分泌实验）。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. 非整合诱导方案
注意：非整合方案是通过三步诱导过程以微环境诱导法递送诱导性多能干细胞（IPCs）的核心方案8,9。
<ol>
	<li>使用第3-5代、融合度为70%-80%的人牙髓干细胞（hDPSCs）。</li>
	<li>弃去培养基，用1×PBS洗涤hDPSCs。</li>
	<li>加入0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，于37 °C、5% CO2条件下孵育1分钟。</li>
	<li>加入培养基以终止胰蛋白酶活性，轻轻吹打细胞获得单细胞悬液。计数细胞，并将1 × 106个细胞分装至每个收集管中。
	<ol>
		<li>将细胞悬液在468 × g（RCF）、4 °C条件下离心5分钟，弃去上清液。</li>
		<li>将沉淀重悬于SFM-A培养基中，接种至低吸附培养板（60 mm）中。于37 °C、5% CO2条件下培养3天，使用倒置显微镜观察细胞形态。</li>
		<li>去除SFM-A，加入SFM-B（第3天），随后在37 °C、5% CO2条件下继续培养2天。</li>
		<li>去除SFM-B，加入SFM-C（第5天），随后在37 °C、5% CO2条件下继续培养5天。SFM-C每48小时更换一次。 
		注意：每种诱导培养基均添加不同试剂，具体如下：SFM-A：1% BSA、1×ITS、4 nM activin A、1 nM丁酸钠和50 µM β-巯基乙醇；SFM-B：1% BSA、1×ITS和0.3 mM牛磺酸；SFM-C：1.5% BSA、1×ITS、3 mM牛磺酸、100 nM GLP-1、1 mM烟酰胺和1×NEAAs。</li>
		<li>确保在每一步操作后以及第10天使用倒置显微镜检查细胞形态。 
		注意：细胞将逐渐形成更明显的聚集体，并以细胞团形式悬浮生长。</li>
		<li>收集细胞团用于进一步分析。检查细胞团的形态和大小，进行胰腺基因标志物表达分析及功能分析（葡萄糖刺激的C肽分泌实验）。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

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<li>Grimm, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+engineering+under+microgravity+conditions-use+of+stem+cells+and+specialized+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+and+Development%22%5BJournal%5D)">Tissue engineering under microgravity conditions-use of stem cells and specialized cells.</a> Stem Cells and Development. 27 (12), 787-804 (2018).</li>
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</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

从间充质干细胞（MSCs）中获得更高产量的胰岛样细胞团（IPCs）在糖尿病治疗中具有重要作用。整合型方案的关键步骤依赖于用于转导的细胞质量以及转导后细胞的质量。为确保转导成功，需检查若干细胞相关指标，包括细胞的健康状态、细胞库管理以及细胞是否处于有丝分裂活跃状态。此外，对转导后细胞的活力进行监测也至关重要。细胞刺激后活力较差是导致转导效率低下的主要原因12。对于非整合型方案，应观察到特定的形态学特征和漂浮的细胞集落，因为这些特征与胰腺分化成熟过程密切相关9。
关于整合性诱导方案的技术改进与问题排查，使用第3至第5代、融合度为70%–80%的细胞可获得健康且高质量的细胞；同时，在进入下一步操作前，应通过常规检测刺激后细胞的质量来监控转导细胞的质量。该发现与先前一项研究结果一致，该研究指出，影响转导效率的多个因素依赖于细胞状态、细胞融合度以及传代次数13。在本研究中，采用三步诱导过程的非整合性方案仍存在局限性，主要体现在克隆大小和克隆形成数量方...

糖尿病是一种持续存在的全球性健康问题。国际糖尿病联合会（IDF）的一份报告估计，全球糖尿病患病人数将从2000年的1.51亿增加到2015年的4.15亿1,2。最新的基于流行病学的研究预测，全球糖尿病患病人数将从2017年的4.51亿上升至2045年的6.93亿1。2000年，采用埃德蒙顿方案进行胰岛移植的成功首次得到证实，该方案可维持I型糖尿病患者的内源性胰岛素分泌，并稳定其正常血糖状态3。然而，埃德蒙顿方案的应用仍面临瓶颈问题。主要问题是尸体胰腺供体数量有限，因为每位I型糖尿病患者至少需要2至4名胰岛供体。此外，长期使用免疫抑制剂可能引发危及生命的副作用4,5。为解决这些问题，过去十年中糖尿病潜在疗法的研发主要集中在从多种来源的干细胞生成具有功能的胰岛素产生细胞（IPCs）6。
干细胞已成为多种疾病（包括因β细胞丢失导致的1型糖尿病）的一种替代治疗方法。移植胰岛样细胞簇（IPCs）是控制这些患者血糖水平的一种有前景的新方法7。本文介绍了生成IPCs的两种诱导方案：整合性与非整合性诱导方法。该诱导方案模拟了胰腺自然发育过程，以获得成熟且具有功能的IPCs8,9。
本研究中，通过流式细胞术对hDPSCs进行间充质干细胞表面标志物检测和多向分化潜能分析，并采用RT-qPCR检测其干性相关基因和增殖相关基因的表达水平（数据未显示）8,9,10。hDPSCs分别被诱导为定型内胚层、胰腺内胚层、胰腺内分泌细胞以及胰腺β细胞或胰岛样细胞（IPCs）（图1）7。细胞诱导采用三步诱导法作为基础方案，该方案称为非整合性方案。在整合性方案中，首先在hDPSCs中过表达关键的胰腺转录因子PDX1，随后对&#160;过表达PDX1的hDPSCs应用三步分化方案进行诱导。整合性方案与非整合性方案的区别在于前者在hDPSCs中过表达PDX1，而后者不进行过表达。本研究比较了整合性与非整合性方案在胰腺分化过程中的效果。

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;细胞培养&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>抗生素-抗真菌剂</td><td>Thermo Fisher Scientific Corporation, USA</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>Corning&amp;reg; 60 mm 经组织培养处理的培养皿</td><td>Corning&amp;reg;</td><td>430166</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&amp;rsquo;s 改良 Eagle 培养基（DMEM）</td><td>Thermo Fisher Scientific Corporation</td><td>12800017</td><td></td></tr><tr><td>胎牛血清（FBS）</td><td>Thermo Fisher Scientific Corporation</td><td>10270106</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMAX&amp;trade;</td><td>Thermo Fisher Scientific Corporation</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>磷酸盐缓冲液（PBS）粉末，pH 7.4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3813-10PAK</td><td>每包用于配制 1 L PBS 溶液，使用无菌去离子水（DDI）</td></tr><tr><td>胰蛋白酶-EDTA（0.25%）</td><td>Thermo Fisher Scientific Corporation</td><td>25200072</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;携带 PDX1 的慢病毒载体的制备&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Amicon&amp;reg; Ultra-15 离心过滤器</td><td>Merck Millipore, USA</td><td>UFC910024</td><td></td></tr><tr><td>人 &lt;em&gt;pWPT-PDX1&lt;/em&gt; 质粒</td><td>Addgene</td><td>12256</td><td>由 Didier Trono 惠赠；http://n2t.net/addgene:12256；RRID: Addgene_12256</td></tr><tr><td>Millex-HV 注射器滤器组件，0.45&amp;nbsp;&amp;micro;m</td><td>Merck Millipore</td><td>SLHV033RB</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;pMD2.G&lt;/em&gt; 质粒</td><td>Addgene</td><td>12259</td><td>由 Didier Trono 惠赠；http://n2t.net/addgene:12259；RRID: Addgene_12259</td></tr><tr><td>Polybrene 感染/转染试剂</td><td>Merck Millipore</td><td>TR-1003-G</td><td></td></tr><tr><td>&lt;em&gt;psPAX2&lt;/em&gt; 质粒</td><td>Addgene</td><td>12260</td><td>由 Didier Trono 惠赠；http://n2t.net/addgene:12260；RRID: Addgene_12260</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;三步诱导方案&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>重组人 Activin A 蛋白</td><td>Merck Millipore</td><td>GF300</td><td></td></tr><tr><td>β-巯基乙醇</td><td>Thermo Fisher Scientific Corporation</td><td>21985-023</td><td></td></tr><tr><td>牛血清白蛋白（BSA，Cohn V 组分，无脂肪酸）</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A6003</td><td></td></tr><tr><td>胰高血糖素样肽（GLP）-1</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G3265</td><td></td></tr><tr><td>胰岛素-转铁蛋白-硒（ITS）</td><td>Invitrogen</td><td>41400-045</td><td></td></tr><tr><td>烟酰胺</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N0636</td><td></td></tr><tr><td>非必需氨基酸（NEAAs）</td><td>Thermo Fisher Scientific Corporation</td><td>11140-050</td><td></td></tr><tr><td>未经处理的细胞培养皿，60 mm</td><td>Eppendorf</td><td>30701011</td><td></td></tr><tr><td>丁酸钠</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B5887</td><td></td></tr><tr><td>牛磺酸</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T0625</td><td></td></tr></tbody></table>

体外诱导人牙髓干细胞向胰腺谱系分化

In vitro Induction of Human Dental Pulp Stem Cells Toward Pancreatic Lineages

截至2000年，采用埃德蒙顿方案进行胰岛移植治疗1型糖尿病虽已取得一定成功，但仍面临一些障碍，包括尸体胰腺供体数量有限以及需长期使用免疫抑制剂。间充质干细胞（MSCs）被认为是一种潜在的替代来源，可用于生成类胰岛样细胞。我们此前的研究已成功建立了诱导人牙髓干细胞（hDPSCs）分化为胰岛素生成细胞（IPCs）的方案。然而，诱导效率存在较大差异。本文展示了通过整合式（微环境与遗传操作结合）与非整合式（仅微环境操作）诱导方案对hDPSCs进行胰腺定向诱导效率的比较，以获得由hDPSCs衍生的胰岛素生成细胞（hDPSC-IPCs）。结果表明，两种诱导方法在三维集落结构、细胞产量、胰腺特异性mRNA标志物表达以及多剂量葡萄糖刺激下的功能特性方面均表现出显著不同的诱导效率。这些发现将有助于未来建立具有临床应用前景的胰岛素生成细胞及胰腺谱系细胞生产平台。

本文比较了两种诱导方案的结果。图2A、C展示了两种诱导方案的示意图。在两种方案中，均在光学显微镜下进行观察，并使用ImageJ分析图像。人牙髓干细胞（hDPSCs）在两种诱导方案中均于诱导第一天开始形成类集落结构。集落形态呈圆形且致密，且在整个诱导期间所有集落均悬浮于培养容器中（图2B、D）。同时测定了两种方案的集落总数，结果显示，相较于非整合诱导方案，整合诱导方案的总集落数略高（图2E），但差异无统计学意义。此外，还评估了两种诱导方案中集落的大小分布（图2F）。根据我们的结果，整合诱导主要形成小至中等尺寸的集落，这对于减少集落内部的坏死核心具有重要意义。
根据我们近期发表的研究10，采用RT-qPCR方法进行胰腺基因标志物分析。本...

本方案比较了两种不同诱导方案在将人牙髓干细胞（hDPSCs）向胰腺谱系分化中的应用 体外整合性方案与非整合性方案。整合性方案可生成更多的胰岛素生成细胞（IPCs）。

截至2000年，采用埃德蒙顿方案进行胰岛移植治疗Ⅰ型糖尿病的临床应用仍面临一些障碍。

本视频展示了人牙髓干细胞向胰腺谱系的体外诱导过程。干细胞为多种疾病提供了替代治疗方法，包括导致β细胞生物学衰老的1型糖尿病。移植能够产生胰岛素的细胞将成为实现终身治疗的新希望方法。本视频介绍了两种生成胰岛素产生细胞的方法，包括整合性与非整合性诱导方案。本部分内容详细阐述了从人牙髓干细胞诱导生成胰岛素产生细胞的整合性诱导方案。该诱导方案旨在模拟天然胰腺发育过程中的关键步骤。为了获得具有天然功能的胰岛素生成细胞，通常采用多步诱导方案，将间充质干细胞（如牙髓干细胞）分化为胰岛素生成细胞。间充质干细胞依次被诱导为定型内胚层、胰腺内胚层、胰腺内分泌细胞，最终分别形成胰腺β细胞或胰岛素生成细胞。为了诱导细胞，采用三步诱导法作为基础方案。该整合性方案利用人牙髓干细胞过表达关键的胰腺转录因子PDX-1。随后，将对过表达PDX-1的干细胞进一步实施三步分化诱导方案。通过整合性方案的胰腺分化潜能将与非整合性方案进行比较，如动画所示。该研究在获得朱拉隆功大学牙科学院人类研究伦理委员会批准的方案下实施，并已取得患者的知情同意。该方案始于PDX-1的过表达。使用第2至第5代、融合度为70-80%的人牙髓干细胞进行转导。细胞经胰蛋白酶消化并计数后，将一百万个细胞接种至转染容器中，过夜培养。24小时后，根据所需的感染复数，向培养容器中加入新配制的携带PDX-1基因的抗病毒制剂。转染后的细胞在培养箱中继续培养24小时。随后更换新鲜培养基，并再维持培养48小时。在用于后续诱导步骤之前，需检查转染细胞的形态。将PDX-1过表达的人牙髓干细胞用胰蛋白酶消化后，悬浮于第一阶段胰腺诱导培养基（即A培养基）中。此步骤使用低吸附培养容器。观察A培养基诱导第3天时PDX-1过表达人牙髓干细胞的形态。将选用形态良好的细胞进行后续诱导步骤。下一步，向培养容器中加入第二种诱导培养基，即所谓的培养基B。观察培养基诱导后第2天PDX-1过表达的人牙髓干细胞的形态。将选用形态良好的细胞进行后续诱导步骤。下一步，向培养容器中加入第三阶段诱导培养基，即所谓的C培养基。5天后观察细胞形态。收集细胞克隆用于进一步分析，包括克隆形态和大小、胰腺基因标志物表达，以及葡萄糖刺激的C肽分泌功能或GSCS检测。对于非整合诱导方法，采用前述的三步诱导方案。将一百万个细胞重新悬浮于培养基A中，并接种至低吸附培养容器中，随后培养三天。待观察细胞形态后，分别于第3天和第5天依次向培养容器中加入一系列诱导培养基，包括培养基B和培养基C。在第10天观察细胞形态。收集细胞集落进行进一步分析，包括集落形态和大小、胰腺基因标志物表达，以及葡萄糖刺激的C肽分泌（GSCS）功能检测。在两种诱导方案中均对结果进行比较。人牙髓干细胞自诱导的第一天起即可形成类似集落的结构。集落呈圆形且致密。在整个诱导期间，所有集落均悬浮于培养容器中。整合诱导方案的总菌落计数略高

in-vitro-induction-human-dental-pulp-stem-cells-toward-pancreatic

Research

科研

JoVE Journal

Bioengineering

生物工程

体外 人体牙浆干细胞向胰腺血统的诱导

本研究描述了一种诱导人类胚胎干细胞向胰腺分化的定向分化方法。具有重要意义的发现是，内皮细胞共培养可介导由人类胚胎干细胞衍生的胰腺前体细胞成熟为表达胰岛素的细胞。...

内皮细胞共培养在定向分化策略中促进人胚胎干细胞向胰岛素生成胰腺细胞的成熟

所述方法通过使用以下任一方式分离和表征人牙髓干细胞（hDPSCs） 牙髓组织的酶解离（DPSC-ED） 或 牙髓组织外植体中干细胞的直接迁出（DPSC-OG）。随后 体外...

利用两种不同方法分离、鉴定及比较源自恒牙的人牙髓干细胞的分化特性

本文介绍一种用于纯化已定向分化为定型内胚层的人胚胎干细胞的方法，旨在提升后续应用及进一步分化的效率。...

一种快速高效地纯化由人胚胎干细胞分化而来的内胚层细胞的方法

在此，我们描述了一种四阶段方案，用于将人类胚胎干细胞分化为NKX6-1阳性细胞。+ 胰腺前体细胞 体外...

高效地将多能干细胞分化为NKX6-1+胰腺前体细胞

本文介绍了一种详细的实验方案，通过解离的单细胞非克隆型单层培养方法，将人多能干细胞（hPSCs）分化为胰腺/十二指肠同源框蛋白1+（PDX1+）细胞，以生成胰腺谱系细胞。该方法适用于制备均一的hPSC来源细胞，并可用于基因操作与筛选。...

高效生成人多能干细胞在贴壁培养中分化为胰腺/十二指肠同源框蛋白1+ 后前肠/胰腺前体细胞

本文介绍了一种人牙髓干细胞的分离与扩增方案，旨在评估朊蛋白在神经元分化过程中的表达情况。...

人牙髓干细胞的分离、扩增及神经元分化过程中朊蛋白表达

本方案描述了一种改进的方法，可提高人多能干细胞（hPSCs）在平面单层培养中衍生的胰腺前体细胞共表达PDX1和NKX6.1转录因子的效率。该方法通过更换新鲜基质、调控细胞密度以及解离内胚层细胞来实现。...

人多能干细胞在二维培养系统中向胰腺β细胞前体的分化

本文提供了利用组织块培养法建立牙髓干细胞原代培养的逐步操作指南，并依据ICSCRT指南对这些细胞进行表征。通过本方案分离获得的细胞可被视为间充质干细胞，用于后续应用。...

牙髓干细胞的原代培养

本文介绍了一种定向分化及功能分析类β细胞的方法。我们描述了在生成胰岛素分泌型胰腺细胞前，人多能干细胞所需的最佳培养条件和传代方法。该六阶段分化过程从定型内胚层形成开始，最终获得能够响应葡萄糖刺激而分泌胰岛素的功能性类β细胞。...

从人多能干细胞生成功能性胰岛素分泌胰腺细胞的优化方案

本方案重点介绍通过酶消化法从牙髓中分离、培养和保存多能干细胞的方法。此外，还展示了这些细胞向成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞分化的潜能，强调了操作过程中精确性和一致性的关键作用。...

从人类乳牙和恒牙中分离、培养及鉴定牙髓干细胞

了解体外诱导人牙髓干细胞分化为胰岛素分泌细胞的方法，比较整合型与非整合型诱导方案的效率差异。该技术为糖尿病再生医学治疗提供了新的细胞来源。

体外诱导人牙髓干细胞向胰腺谱系分化

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