使用磁悬浮定量细胞密度和抗原特性

该技术允许分离各种细胞类型和仅基于密度进行各种过程的细胞，在短时间内几乎没有操作。这种方法的主要优点是它具有微创性，需要小体积，提供快速的结果，不依赖于经典的读数，并且不需要专业人员。该技术可用于检测多种疾病，例如贫血和败血症。

首先使用一键式采血装置刺破恒河猴因子阳性献血者的手指，并在一毫升DPBS中收集10微升血液。在一毫升恒河猴因子阳性细胞的悬浮液中加入一微升荧光染料，对质膜进行荧光染色，并在37摄氏度下孵育15分钟。通过以5，600倍G旋转15秒来沉淀细胞，并使用一毫升DPBS洗涤沉淀三次。

将沉淀重悬于一毫升HBSS中，加入钙和镁。使用一键式采血装置刺破恒河猴因子阴性献血者的手指，采集2微升血液。为了制备仅含有微珠的实验管，添加174微升HBSS与钙和镁，一微升IgG对照珠，一微升重珠，密度为每毫升1.2克，以及24微升500毫摩尔钆。

制备含IgG的实验对照管，加入172微升HBSS含钙镁、1微升IgG对照珠、1微升重珠、1微升恒河猴因子阴性血液、1微升染色恒河猴因子阳性血液悬浮液、24微升500毫摩尔钆。制备样品实验管，加入172微升HBSS含钙和镁，1微升抗RhD包被珠，1微升重珠，1微升恒河猴因子阴性血液，1微升染色恒河猴因子阳性血液悬浮液，24微升500毫摩尔钆。设置磁悬浮装置。

并将50微升的样品装入毛细管中，直到管子充满。用毛细管密封剂密封毛细管的末端，确保没有气泡。将毛细管放在顶部和底部磁铁之间的毛细管支架中，调整载物台和对焦以获得最佳观看效果。

等待大约5到20分钟，让细胞和磁珠稳定在其磁平衡位置。使用该协议，使用磁悬浮装置根据悬浮高度分离血细胞。使用低密度和高密度珠子来提供密度悬浮高度和尺寸参考。

多形核细胞悬浮在21毫摩尔钆离子浓度的红细胞上方。旧血细胞悬浮在60毫摩尔钆离子浓度下。将红细胞、多形核细胞和淋巴细胞根据其内在密度以40毫摩尔钆离子浓度分离。

使用IgG和抗RhD抗体包被的珠子在红细胞上检测恒河猴因子抗原。IgG对照样品中未产生珠红细胞复合物，但检测到恒河猴因子阳性珠子捕获的荧光染色红细胞。抗RhB与恒河猴因子阳性细胞的结合在中心以未结合的珠子和阴性红细胞的间歇密度在中心产生珠细胞复合物。

此外，通过观察发射的荧光证实了复合物的形成。涂有CR1和CD47抗体的高密度和低密度微球之间形成的B珠复合物表明存在红细胞衍生的细胞外囊泡。在不引入气泡的情况下盖上毛细血管是最具有挑战性的步骤，需要练习。

这种方法可以为血液学提供见解，特别是专注于红细胞疾病。