使用基底板和预先锚定物镜的微型镜进行小鼠钙瞬变研究

该微型镜可以减少底板过程中牙科水泥的收缩问题，并提高两种长度配置的荧光信号微型镜记录的成功率。如果在基底接种过程中无法观察到荧光瞬变，请检查钙指示剂的表达和继电器透镜在脑切片上的位置。首先将直径为 1 毫米的 20 号静脉导管的内针安装到立体定位臂上。

将导管降低到腹侧玉米氨1到目标区域。然后，以每分钟100至200微米的速度将显微注射针降低到腹角氨1中，并以每分钟25纳升的速度将200纳升病毒载体注入目标区域。让病毒扩散10分钟后，以每分钟100至200微米的速度取出显微注射针。

对中继镜片进行消毒后，将镜片浸泡在冷的无热原盐水中直至植入。使用带有热缩管的微型斗牛犬夹，握住中继透镜并以每分钟 100 至 200 微米的速度将其放置在目标区域的顶部。然后，用牙科水泥稳定晶状体。

要设置微型内窥镜，请将物镜固定在底部，然后将底板组装到微型内窥镜上。在底板外侧缠绕 10 厘米的石蜡膜。使用可重复使用的粘土，用立体定位臂探头握住微型镜。

将物镜对准中继镜头顶部，镜头之间的空间尽可能小。使用牙科水泥固定底板的位置，使水泥仅接触石蜡膜。牙科水泥干燥后，去除石蜡膜、底板和微型镜，保持牙科水泥底座中空。

用模压硅橡胶密封继电器透镜，并用一层薄薄的牙科水泥覆盖硅橡胶。将鼠标从立体定位仪器上脱离，并将鼠标放入恢复室。对于基底镀，用骨架小心地切割牙科水泥屋顶的薄层，然后去除硅橡胶。

用75%酒精清洁继电器镜头的表面。将固定螺钉固定在底板旁边，将其固定到微型内窥镜的底部。将焦点滑块调整到距主外壳约 2.7 到 3 毫米的距离。

设置完成后，将微型内窥镜连接到数据采集板，然后将微型内窥镜插入计算机上的 USB 3.0 端口。运行加州大学洛杉矶分校团队开发的数据采集软件。将曝光调整为 255，增益调整为 64x，将激发 LED 调整为 5%要将微型内窥镜连接到数据采集软件，请单击连接按钮并观看数据采集软件的直播，将中继镜头的裕量视为里程碑。

找到中继镜头后，用手将微型物镜对准中继透镜。调整微型望远镜的各种角度和距离，开始搜索荧光信号。将微型镜保持在最佳位置，将立体定位臂移向微型内窥镜，并用可重复使用的粘土将微型镜粘附在立体定位臂上。

通过稍微调整 X、Y 和 Z 臂来搜索最佳视图。通过在Z轴上转动耳杆、齿杆或可重复使用的粘土来调整物镜和中继镜表面之间的角度。当至少一个细胞在基底接种过程中置换荧光瞬变时，病毒表达和晶状体植入是成功的。

用尽可能少的牙科水泥牢固地固定底板，同时监测感兴趣的区域，以确保最佳位置不会改变。在代表性研究中，假基底板程序被证明是有利的，因为它导致底板位置的偏移比原始程序更小。底板的移动也受到牙科水泥高度的影响。

锚定在头骨上方0.5厘米的底板比固定在头骨上方1厘米的底板移动明显小于。在基底电镀过程中成功成像的一个例子中，在麻醉动物中注意到荧光瞬变和血管。基底接种后五天观察到荧光瞬变，即使小鼠在其家笼中自由行为，位置只有轻微的移动。

随后对小鼠进行钙成像。在少数情况下，在基底电镀过程中会出现问题，例如除了均匀的背景或白细胞边缘的可见性外，没有任何内容。无荧光瞬变。

重要的是用尽可能少的牙科水泥将底板牢固地固定在目标区域。通过石板技术，研究人员可以纵向观察神经活动。有了适当的许可证，此过程也可以应用于观察视野中的神经网络。