Name: 使用生物发光成像对小鼠尿路感染及其治疗的纵向随访 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-06-14T13:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 39 s
Description: 了解生物发光成像技术在小鼠尿路感染纵向研究中的应用。该方法利用lux操纵子标记的致病菌实现实时监测，显著减少实验动物数量，为感染动态和病理机制研究提供可靠工具。

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本工作获得了佛兰德研究基金会（FWO Vlaanderen；G0A6113N）、鲁汶大学研究委员会（C1-TRPLe；T.V. 和 W.E.）以及VIB（授予T.V.）的资助。W.E. 是佛兰德研究基金会（FWO Vlaanderen）的高级临床研究员。菌株UTI89-lux 由Seed教授实验室慷慨惠赠13。

所有动物实验均按照欧盟共同体指南进行，并已获得鲁汶大学动物伦理委员会（P158/2018）的批准。
1. 细菌培养（改编自7,13,14）
<ol>
	<li>准备
	<ol>
		<li>选择一种最符合实验需求的发光性尿路致病性大肠杆菌（UPEC）菌株。 
		&#8203;注意：此处选用临床膀胱炎分离株UTI89（E. coli），因其在人类和啮齿类动物中均具有尿路致病能力，并且在小鼠尿路感染模型中被广泛使用5,7,15。携带完整lux操纵子（luxCDABE）的生物发光同源菌株简称为UTI89-lux。该操纵子还携带硫酸卡那霉素（Km）抗性基因，因此可使用卡那霉素筛选生物发光菌落13。</li>
		<li>为所选细菌菌株建立菌落形成单位（CFU）与600纳米波长下的光密度（OD 600 nm）之间的相关曲线7。
		<ol>
			<li>为此，按照以下方案培养细菌，并在磷酸盐缓冲液（PBS）中制备8种不同稀释度的菌液。测定各稀释度在600 nm处的光密度值，并将其接种于Luria-Bertani（LB）平板上以确定CFU数量。</li>
			<li>绘制OD 600 nm值与CFU值的关系图，确定相关性并获得标准曲线。 
			注意：在后续实验中，可通过测量600 nm处的光密度值并利用该标准曲线快速估算细菌溶液中的CFU数量。 
			&#8203;警告：UPEC为致病菌，操作时应确保实验室具备适当防护条件，并穿戴个人防护装备。</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>灌注前3天
	<ol>
		<li>使用接种环将细菌甘油保存液在添加了50 µg/mL Km的LB平板上划线，获得单菌落，并于37 °C过夜培养。用石蜡膜密封平板，可在4 °C保存最多1周。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>灌注前2天
	<ol>
		<li>取一支无菌的14 mL聚苯乙烯圆底试管（带双位卡扣盖），加入5 mL含50 µg/mL Km的LB液体培养基。用接种环挑取单个细菌菌落加入LB培养基中，涡旋振荡10秒以确保充分混匀。</li>
		<li>将卡扣盖置于打开位置，静置培养过夜，37 °C。 
		&#8203;注意：E. coli的静置培养可促进I型菌毛的表达，而I型菌毛对尿路上皮细胞的黏附和侵袭至关重要。</li>
		<li>准备一个无菌的锥形瓶或培养瓶。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>灌注前1天
	<ol>
		<li>培养结束后，涡旋振荡试管10秒以确保菌液充分均质化。取25 µL菌悬液加入盛有25 mL新鲜LB培养基（不含抗生素）的锥形瓶中进行传代培养。</li>
		<li>盖紧锥形瓶，于37 °C静置过夜培养。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>灌注当天
	<ol>
		<li>将锥形瓶涡旋振荡10秒以确保充分混匀。</li>
		<li>将培养物从锥形瓶倒入50 mL离心管中，在3,000 x g、4 °C条件下离心5分钟。弃去上清液，将菌体沉淀重悬于10 mL无菌PBS中，再次涡旋振荡10秒。</li>
		<li>根据实验设计选择接种物浓度（CFU），并利用步骤1.1.2中获得的标准曲线确定对应的OD 600 nm值。</li>
		<li>将1 mL重悬的菌液加入9 mL无菌PBS中，测定600 nm处的光密度值。根据需要添加无菌PBS或浓缩菌液进一步调整，直至达到目标OD 600 nm值7。 
		注意：例如，对于UTI89-lux，可通过添加PBS调节菌液至OD 600 nm为0.45，相当于每50 µL含2 × 107 CFU。为验证活菌数量，进行10倍系列稀释，取第五和第六次稀释液各50 µL，三份重复接种于LB平板上，使菌落数少于300个。在37 °C过夜培养后次日计数菌落。OD 600 nm可提供即时读数，但应以CFU作为质量控制依据。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. 动物接种（改编自7,16）
<ol>
	<li>动物准备
	<ol>
		<li>根据研究问题、基因敲除品系的可获得性、实验细节以及尿路感染（UTI）易感性的差异，选择合适的小鼠品系5,17。需注意，雌性小鼠更易于进行经尿道插管。避免使用小于8周龄的动物，因其免疫系统尚未发育成熟。本实验中使用12周龄的雌性C57Bl/6J小鼠。</li>
		<li>应提前订购动物，并使其适应环境，理想情况下适应7天。将动物群养于独立通风的笼具中，维持标准的12小时光照/12小时黑暗循环条件。</li>
		<li>剃除动物腹部区域的毛发，以减少信号损失。切勿使用脱毛膏，因其可能迅速灼伤动物皮肤。剃毛时，用非惯用手牢固抓住动物颈背部皮肤及后肢以固定动物，同时用惯用手操作剃毛工具。也可在异氟烷麻醉下进行剃毛。 
		NOTE: 考虑到动物会进一步舔舐剃毛区域，本实验在成像前2天进行剃毛。</li>
		<li>在整个实验过程中自由供应水和标准饲料ad libitum。但在灌注前2小时停止供水，以尽量减少灌注期间膀胱内的残余体积。</li>
		<li>将无菌24 G套管针头安装至100 µL注射器上，并用步骤1.5.3中制备的细菌悬液填充注射器。 
		&#8203;NOTE: 为确定背景发光信号，应在灌注前获取基线图像（见下文步骤3）。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>动物灌注
	<ol>
		<li>将动物置于诱导室中，使用异氟烷与纯氧作为载气进行吸入麻醉（诱导浓度3%，维持浓度1.5%）。</li>
		<li>将一只动物仰卧位放置于操作台面，在灌注过程中通过鼻罩维持稳定的异氟烷麻醉。涂抹眼膏以防止角膜干燥。</li>
		<li>通过轻柔按压并以环形动作按摩耻骨上区域，排出残余尿液。在灌注前用70%乙醇清洁下腹部。</li>
		<li>用生理盐水润滑导管尖端。将非惯用手的食指置于腹部并轻轻向上推动。以90°角（垂直方向）开始插入尿道，当遇到阻力时，将导管转为水平方向后再继续插入（约0.5 cm）。 
		NOTE: 切勿强行推进导管，以免损伤尿道。轻柔旋转动作可能有助于导管插入。相反，若无明显阻力，通常提示导管误入阴道。</li>
		<li>缓慢灌注50 µL细菌接种液（2 × 107 CFU），速度控制在5 µL/s。 
		NOTE: 灌注体积过大或速度过快可能导致尿液反流至肾脏。在技术练习过程中，可使用蓝色墨水评估是否存在反流。</li>
		<li>灌注完成后，保持注射器和导管原位数秒，然后缓慢撤出，以防泄漏。记录任何异常情况，如大量泄漏或尿道口出血，并在必要时剔除该动物。</li>
		<li>将动物以仰卧位置于成像舱的鼻罩处，并对所有剩余动物重复上述步骤2.1.1–2.1.6。每个实验组使用一根独立的导管。确保麻醉持续进行，并尽量缩短第一只与最后一只动物之间的操作时间间隔。</li>
		<li>如有需要，可在成像前或成像后（步骤3）给予抗生素或实验性药物。例如，为给予恩诺沙星，将40 µL恩诺沙星溶液（100 mg/mL）加入3.96 mL生理盐水中，配制成1/100稀释液。每日两次皮下注射，每次100 µL/10 g体重（上午9点和下午5点），相当于每日两次给予10 mg/kg剂量，连续给药3天。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. 生物发光成像
<ol>
	<li>成像参数的准备与选择
	<ol>
		<li>打开生物发光成像（BLI）采集软件（参见材料表），并在成像设备（参见材料表）上点击“初始化”以测试相机和载物台控制系统，并将CCD相机冷却至-90 °C。 
		&#8203;注意：在此过程中，舱门将被锁定，初始化进度可在控制面板上查看。绿灯表示已达到-90 °C的温度。若在初始化完成前尝试成像，系统将发出警告。</li>
		<li>确保数据自动保存：点击采集界面中的自动保存至，并选择正确的文件夹。</li>
		<li>选择发光成像和拍照模式。检查默认的发光设置：将激发滤光片设为阻断，发射滤光片设为开放。</li>
		<li>首次成像时将曝光时间设为自动，特别是在预期信号较弱时，以确保获得足够的光子计数。对于体内测量和强信号样本，将曝光时间设为约30秒。若图像饱和，系统将发出警告；此时应降低曝光时间。</li>
		<li>选择中等 binning 、F/stop为1，并选择正确的视场（FOV）（D档适用于5只动物）。</li>
		<li>对小鼠成像时，将样本高度设为1 cm。</li>
		<li>在采集控制面板中点击添加三次，以获取三张图像序列作为技术重复。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>成像操作
	<ol>
		<li>将小鼠仰卧置于成像舱内，并使用多通道鼻罩在整个实验过程中维持麻醉（异氟烷浓度为1.5%）。可同时对最多5只小鼠进行成像，并使用遮光挡板分隔动物，防止光线反射。</li>
		<li>关闭舱门，点击采集以启动成像序列。</li>
		<li>填写有关实验的详细信息（如野生型与基因敲除动物、处理方式、成像日期等）。成像参数（如曝光时间）将自动保存。</li>
		<li>成像结束后将小鼠从成像舱中取出并放回笼具，观察其从麻醉中完全恢复的情况。数分钟内，动物应完全清醒并恢复探索行为。无需给予镇痛药物，因其可能干扰尿路感染（UTI）病程18。</li>
		<li>将笼具放回通风架，等待下一次成像周期。实验结束后，通过CO2窒息或颈椎脱位法对动物实施安乐死。操作应在异氟烷麻醉尚未完全恢复前进行，以最大程度减少动物痛苦。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>图像分析
	<ol>
		<li>启动成像软件，点击浏览加载实验文件。</li>
		<li>使用工具面板调整图像的颜色标尺。为统一结果的视觉呈现，所有图像应采用相同的设置，即使用对数标尺，范围从最小104至最大107光子数。此类调整仅影响图像的图形化显示，不改变原始数据。</li>
		<li>使用ROI工具在图像上绘制感兴趣区域（ROI）。确保ROI足够大以覆盖完整区域，并对所有图像使用相同的尺寸。本实验中，在下腹部上方放置一个3.5 cm × 4.5 cm的方形ROI。</li>
		<li>点击ROI测量以量化光强度（计数或总光子通量）。导出这些数据，并取技术重复的平均值。 
		注意：计数代表相机检测到的光子数量，仅用于图像质量控制。报告数据时应使用总光子通量。总光子通量更具生理相关性，因其反映的是表面发射的光，且为经校准的单位，已根据曝光时间（每秒）进行校正。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

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</ol>

作者声明无利益冲突。

与CFU计数相比，生物发光成像（BLI）的优势 
纵向数据 
采用菌落形成单位（CFU）计数来量化微生物负荷的传统方法存在一个主要缺点，即需要制备动物的死后器官匀浆，因而每只动物仅能获得一个横断面数据点。相比之下，BLI可实现对感染动物的无创性纵向追踪。动物每天可被成像2至3次，从而提供关于感染动力学的详细信息。此外，对同一只动物进行重复测量可显著减少为达到足够统计效能实验所需的动物数量。同时，研究人员能够关注个体间的差异，并可在使用新型药物处理或检测动物之前，根据实时数据选择具有预设细菌负荷的动物。另一方面，利用实验的曲线下面积（AUC）可使研究人员关注整体细菌负荷，而非单一的横断面数值。在尿路感染（UTI）研究背景下，纵向和实时数据所带来的附加价值不可估量。
感染播散的鉴定 
生物发光成像（BLI）所获得图像的空间分辨率足以识别由携带lux-或FLuc-标记的病原体定植的其他部位19。对于尿路感染（UTI），病原体...

尿路感染（UTI）是人类最常见的细菌感染之一。几乎一半的女性在一生中都会经历一次有症状的尿路感染。1局限于膀胱的感染可引起尿频、尿急、血尿、尿失禁和疼痛等泌尿系统症状。当感染上行至 upper urinary tract 时，患者可发展为肾盂肾炎，出现全身不适、发热、寒战和腰痛。此外，高达 20% 的 UTI 患者会经历反复感染，导致抗生素敏感性显著下降2,3,4近年来，人们对治疗和预防复发性尿路感染（UTI）的新疗法日益关注。尽管对下尿路的先天性和适应性免疫机制以及细菌侵袭和定植所必需的毒力因子有了更深入的理解，但这些进展尚未转化为泌尿科日常实践中的根本性治疗改变。2为了研究尿路感染的发病机制和易感性 在体内一种可重复且无创的检测方法是必不可少的。
已报道的多种动物尿路感染模型涵盖从线虫到灵长类动物的范围，但目前主要使用小鼠模型5,6。该模型通过经尿道插管（雌性）小鼠，并将细菌悬液直接注入膀胱腔内建立，最常用的病原菌为尿路致病性Escherichia coli（UPEC）7。接种后，传统上通过测定菌落形成单位（CFU）来定量细菌载量。该方法需处死动物以获取死后器官匀浆并进行系列稀释，限制了数据产出和可重复性。此外，该技术无法对单个动物的细菌载量进行纵向追踪观察。
1995年，Contag 等人. 建议使用生物发光标记的病原体来监测活体动物中的疾病进程8,9自那时起，生物发光成像（BLI）已被应用于多种感染模型，如脑膜炎、心内膜炎、骨髓炎、皮肤及软组织感染等。10,11,12在小鼠尿路感染模型中，一种具有完整 lux 操纵子luxCDABE）来自 Photorhabdus luminescens 可用于13细菌荧光素酶催化一种酶促反应，该反应依赖于长链醛在氧气存在下与还原型黄素单核苷酸发生氧化反应，生成氧化型黄素、长链脂肪酸和光12。该 lux 操纵子编码荧光素酶及其他合成底物所需的酶。因此，所有代谢活跃的细菌将持续发出蓝绿色（490 nm）光，无需外源底物的加入。12. 光子由 lux-标记的细菌可使用高灵敏度冷却电荷耦合器件（CCD）相机进行捕获。
在尿路感染（UTI）模型中使用生物发光细菌，可实现对细菌负荷的纵向、无创定量，从而无需在随访期间的固定时间点通过菌落形成单位（CFU）测定而处死动物。尽管该生物发光成像（BLI）技术在其他领域已展现出广泛的应用前景，并积累了证明其稳健性的证据，且相较于传统的UTI模型具有诸多优势，但其在UTI研究中的应用尚未普及。本文提供的方案详细阐述了操作步骤，突出了BLI技术的优势，可为今后所有UTI研究提供参考。

<table><tbody><tr><td>96 孔黑色平底聚苯乙烯板</td><td>Corning</td><td>3925</td><td>用于 &lt;em&gt;体外&lt;/em&gt; 成像</td></tr><tr><td>Aesculap ISIS</td><td>Aesculap</td><td>GT421</td><td>毛发修剪器，配 GT608 型帽</td></tr><tr><td>麻醉蒸发器</td><td>Harvard Apparatus Limited</td><td>N/A</td><td>https://www.harvardapparatus.com/harvard-apparatus-anesthetic-vaporizers.html</td></tr><tr><td>Baytril 100 mg/mL</td><td>Bayer</td><td>N/A</td><td>恩诺沙星</td></tr><tr><td>BD Insyte Autoguard 24 GA</td><td>BD</td><td>382912</td><td>黄色静脉导管，用于滴注时使用无菌塑料针头</td></tr><tr><td>C57Bl/6J 小鼠</td><td>Janvier</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge 5804R 离心机</td><td>Eppendorf</td><td>EP022628146</td><td></td></tr><tr><td>Dropsense 16</td><td>Unchained Labs</td><td>Trinean</td><td>用于测量 OD 600nm</td></tr><tr><td>Dulbecco 磷酸盐缓冲液，Gibco</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>货号 14040-083</td><td></td></tr><tr><td>70% 变性乙醇，5L</td><td>VWR International</td><td>85825360</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 14 mL 圆底聚苯乙烯管，带 snap-cap 盖</td><td>Corning</td><td>352057</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 50 mL cellstart</td><td>Greiner</td><td>227285</td><td></td></tr><tr><td>Hamilton GASTIGHT 注射器，PTFE 鲁尔锁，100 &amp;micro;L</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>26203</td><td>确保以 50 &amp;micro;L 缓慢接种细菌</td></tr><tr><td>接种环</td><td>Roth</td><td>6174.1</td><td>支架：货号 6189.1</td></tr><tr><td>Iso-Vet 1000 mg/g</td><td>Dechra Veterinary Products</td><td>N/A</td><td>异氟烷</td></tr><tr><td>IVIS Spectrum 活体成像系统</td><td>PerkinElmer</td><td>货号 124262</td><td>成像设备</td></tr><tr><td>卡那霉素溶液 50 mg/mL</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>CAS 25389-94-0</td><td></td></tr><tr><td>Living Imaging 软件</td><td>PerkinElmer</td><td>N/A</td><td>生物发光成像采集软件，版本 4.7.3</td></tr><tr><td>LB 肉汤培养基</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>货号 L3022</td><td>也可自行配制</td></tr><tr><td>含琼脂的 LB 肉汤培养基</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>货号 L2897</td><td>也可自行配制</td></tr><tr><td>Sterilin 培养皿，90 mm</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>101VR20</td><td>用于盛装添加 Km 的 LB 琼脂</td></tr><tr><td>Pyrex 细胞培养瓶，250 mL</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>SLW1141/08-20EA</td><td></td></tr><tr><td>Trinean Slide 200</td><td>Unchained Labs</td><td>701-2007</td><td>用于测量 OD 600nm</td></tr><tr><td>UTI89-lux</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>由 Seed 教授慷慨惠赠</td></tr><tr><td>涡旋振荡器</td><td>VWR International</td><td>444-1372</td><td></td></tr></tbody></table>

利用生物发光成像对小鼠尿路感染及其治疗进行纵向随访

Longitudinal Follow-Up of Urinary Tract Infections and Their Treatment in Mice using Bioluminescence Imaging

尿路感染（UTI）是人类最常见的细菌感染之一，通常采用经验性抗生素治疗。然而，由于微生物耐药性日益增加，最常用抗生素的疗效已有所下降。为了寻找替代治疗方案，迫切需要更深入地了解尿路感染的发病机制以及决定其易感性的相关机制。为了在动物模型中开展相关研究，建立一种可重复且非侵入性的检测方法以观察尿路感染的病程至关重要。
多年来，细菌载量计数的金标准一直是测定特定样本体积中的菌落形成单位（CFU）。该技术需要进行死后器官匀浆及系列稀释，限制了数据产出和可重复性。作为一种替代方法，生物发光成像（BLI）正逐渐被用于测定细菌载量。通过将病原体标记含有lux操纵子的基因，可实现灵敏、无创的检测与定量，从而支持纵向追踪观察。然而至今，BLI在尿路感染（UTI）研究中的应用仍然有限。
本文描述了生物发光成像（BLI）在小鼠尿路感染模型中的实际应用。文中提供了细菌培养、膀胱内灌注及成像的逐步操作指南。 体内 通过比较未经治疗的感染动物与抗生素治疗动物的细菌载量，检验其与CFU的相关性，并提供概念验证。此外，还探讨了在实施BLI时特有的优势、局限性和注意事项 体内 讨论了尿路感染模型。生物发光成像技术在尿路感染研究领域的应用将极大促进对尿路感染发病机制的研究，并推动预防和治疗尿路感染新方法的发现。

在体 BLI 与接种时接种物的 CFU 相关。 
评估BLI的检测限 体内 以及与接种物CFU的相关性，用不同浓度的UTI89感染小鼠lux 以及 PBS 作为阴性对照。灌注前，对未感染动物进行扫描以确定背景发光值。随后的图像在灌注后立即获取（图1A）。在灌注UTI89-后lux，生物发光信号在2 x 10以上可被强烈检测到4 菌落形成单位（CFU），并建立了接种物的CFU与生物发光之间的线性相关性（图1B）。相比之下，用PBS灌注的动物以及在最低细菌浓度（2 x 10）下，总光子通量与背景信号相当3 菌落形成单位
生物发光成像作为治疗过程中纵向随访的工具 
为了确定是否可以通过纵向生物发光成像（BLI）来展示已验证抗生素治疗的疗效，研究...

本论文描述了通过膀胱内给予携带lux操纵子的尿路致病菌以在小鼠中诱导尿路感染，并利用生物发光成像对细菌载量进行后续的纵向体内分析。

尿路感染（UTI）是人类最常见的细菌感染之一，通常采用经验性抗生素治疗。然而，……

菌落形成单位的计数限制了尿路感染（UTI）领域研究的可重复性。生物发光成像将推动针对膀胱生理学、UTI发病机制及易感性的体内UTI研究。生物发光成像能够实现纵向随访，并实时洞察感染的动态演变过程。此外，它显著减少了所需动物的数量。生物发光成像有助于开展针对人类常见复发性或慢性感染的研究。此外，研究人员可利用生物发光成像识别上行性感染或病原体向血液的播散。用接种环将含有硫酸卡那霉素的LB平板上的细菌甘油保种液划线，获得单菌落，并在37摄氏度下培养过夜。取一支无菌的14毫升聚苯乙烯圆底试管（带双位置 snap cap 盖），加入5毫升添加了硫酸卡那霉素的LB液体培养基。用接种环挑取一个单菌落，接种至LB液体培养基中。涡旋10秒以确保充分混匀。将旋盖置于打开位置，在37摄氏度下静置培养过夜。孵育结束后，再次涡旋试管10秒，以确保细菌培养物充分均一化。取25微升细菌悬液加入25毫升不含抗生素的新鲜LB培养基中，在锥形瓶中进行转接培养。盖紧锥形瓶，静置过夜培养。在接种当天，将培养物从锥形瓶倒入50毫升培养管中，离心。弃去上清液，将细菌沉淀重悬于10毫升无菌PBS中。再次涡旋振荡试管10秒。选择实验所需的接种物浓度，并利用标准曲线测定其在600纳米处对应的OD值。将1毫升重悬的细菌培养物加入9毫升无菌PBS中，并调节至所需的OD 600纳米值。在100微升注射器上安装无菌的24号套管针头，用制备好的细菌溶液填充注射器。将一只动物仰卧置于操作台面上，在安装过程中通过鼻罩维持稳定的异氟烷麻醉。涂抹眼膏。通过轻柔按压并以环形动作按摩耻骨上区域排出残余尿液，然后用70%乙醇清洁下腹部。用生理盐水润滑导管尖端。将非优势手的食指放在腹部，轻轻向上推动。以90度角垂直开始尿道插管。当遇到阻力时，先将其水平倾斜，再继续插入。缓慢注入50 µL的细菌接种物。注射完成后，将注射器和导管保持原位数秒，然后缓慢撤出，以防止泄漏。每个实验组使用一根导管。将动物置于仰卧位并放入鼻罩中，以准备成像，并使用每实验组一根导管的方式进行成像前准备。如有必要，根据文稿中所述给予抗生素或实验性药物。打开BLI采集软件，点击成像设备中的“初始化”以测试相机和载物台控制器系统，并将电荷耦合器件相机冷却至零下90摄氏度。点击“采集”，选择自动保存至“生物发光”和“拍照”。通过将激发滤光片设置为“阻断”、发射滤光片设置为“打开”，检查默认的生物发光设置。拍摄第一张图像时，将曝光时间设为自动。对于活体测量和强信号情况，将曝光时间设置为约30秒。如果因图像饱和而出现警告，则应缩短曝光时间。选择中等像素合并模式，光圈设为一，并选择正确的视场。对小鼠成像时，将样本高度设置为一厘米。可同时对最远五英里范围内的动物进行成像，并使用挡光板将动物分隔开，以防止反射。关闭舱门并点击“Acquire”以开始成像序列，然后填写有关实验的详

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科研

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学与感染

使用生物发光成像对小鼠尿路感染及其治疗的纵向随访

本视频将演示经尿道诱导小鼠尿路感染的方法，并量化由此产生的感染程度。...

经尿道诱导小鼠尿路感染

本文描述了在活体动物中进行细菌感染生物发光成像的方法。通过改造病原体使其表达荧光素酶，从而实现对活体动物体内感染的光学整体成像。可利用表达荧光素酶的病原体感染动物模型，并通过生物发光成像实时观察疾病的发展过程。...

利用荧光素酶对小鼠细菌感染进行成像

本文介绍了将携带lux标记的细菌给予小鼠，并随后使用IVIS生物发光成像进行活体分析的方法。...

活体生物发光细菌成像 In Vivo

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利用生物发光技术追踪小鼠体内细菌感染动态

来源：de Vries, C. R., et al., 一种迟发接种的慢性Pseudomonas aeruginosa伤口感染模型。J. Vis. Exp. (2020)。本视频展示了一种生物发光成像技术，用于监测活体小鼠模型中细菌感染的进展。携带 luxABCDE...

小鼠细菌感染的生物发光成像

来源： Valentine, M. E. 等人，框内基因缺失突变体的构建 铜绿假单胞菌 并在简单的感染小鼠模型中检测毒力减弱情况。 J. Vis. Exp.

利用生物发光技术在小鼠模型中对细菌感染进行实时成像

来源：Luyts, N., et al. 利用生物发光成像对小鼠尿路感染及其治疗进行纵向随访。J. Vis. Exp. (2021)。本视频展示了利用生物发光的E.

利用生物发光技术在小鼠模型中可视化尿路感染

来源：Hunt, A. M. A., 等. 走向光明的一侧：在糖尿病无毛小鼠模型中对慢性伤口内 Pseudomonas aeruginosa 生物膜感染进行活体监测。J. Vis.

利用生物发光成像追踪小鼠模型中的细菌感染与伤口愈合

在本视频中，我们介绍了通过膀胱内灌注尿路致病菌在小鼠中建立尿路感染模型的技术。该模型可用于研究尿路致病菌在泌尿系统内的传播过程，以及决定尿路感染易感性的相关机制。...

建立尿路感染模型：一种向小鼠施用尿路致病菌以建立尿路感染模型的技术

关键词：尿路感染，尿路致病性大肠杆菌，动物模型，小鼠，膀胱感染，肾盂肾炎，UTI模型，细菌感染，泌尿系统，实验方法

多模态成像是研究小动物模型中细菌定植的一种有价值的方法。本方案概述了用生物发光的鼠柠檬酸杆菌（Citrobacter rodentium）感染小鼠，并利用融合三维漫射光成像断层扫描与μCT成像技术对细菌定植进行长期监测，从而生成鼠柠檬酸杆菌（C.

4D 多模态成像 鼠伤寒柠檬酸杆菌 小鼠感染

已建立的小鼠经尿道插管模型可用于研究膀胱病理状态，包括尿路感染，但该模型仅适用于雌性小鼠。本文介绍一种新的雄性小鼠经尿道灌注模型，将有助于推动在临床上和流行病学上存在显著性别差异的领域的研究。...

小型动物模型中的尿路感染：雄性和雌性小鼠的经尿道导管插入术

了解生物发光成像技术在小鼠尿路感染纵向研究中的应用。该方法利用lux操纵子标记的致病菌实现实时监测，显著减少实验动物数量，为感染动态和病理机制研究提供可靠工具。

利用生物发光成像对小鼠尿路感染及其治疗进行纵向随访

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