Construction of Model Lipid Membranes Incorporating G-protein Coupled Receptors (GPCRs)

Ahmed Elbaradei; Lucia Caterina Dalle Ore; Noah Malmstadt

doi:10.3791/62830

JoVE Journal
Bioengineering
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JoVE Journal Bioengineering

Construction of Model Lipid Membranes Incorporating G-protein Coupled Receptors (GPCRs)

构建含有G蛋白偶联受体（GPCR）的脂质膜模型

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09:45 min

February 5, 2022

DOI: 10.3791/62830-v

Ahmed Elbaradei*¹, Lucia Caterina Dalle Ore*¹, Noah Malmstadt¹

¹Mork Family Department of Chemical Engineering and Materials Science,University of Southern California

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Summary

该协议利用琼脂糖肿胀作为一种强大且可推广的技术，用于将整体膜蛋白（IMP）掺入巨型单层脂质囊泡（GUV）中，如本文所述，用于重建人1A 5-羟色胺受体蛋白（_5-HT1AR），这是药理学上重要的G蛋白偶联受体之一。

Transcript

由于质膜的复杂性，研究天然环境中的整体膜蛋白一直是一个挑战。巨型单层脂质囊泡或GUV是研究生物膜特性的最突出平台之一，它们可以被设计成模仿各种生理条件。该协议描述了一种基于水凝胶溶胀后自发掺入的GUV来制造蛋白质掺入GUV的方法。制造GUV的传统方法不能推广为整体膜蛋白掺入。这些方法通常产量低，方法复杂且临时，不适用于广泛的蛋白质类别。另一方面，该协议代表了一种灵活，稳健和简单的方法，以结合GUV中的功能性整体膜蛋白.我们通过制备含有蛋白质的水凝胶支架并在其上沉积一层薄薄的脂质来实现这一点。在这里给出的例子中，我们在GUV中掺入了G蛋白偶联受体或GPCR.在整个系统重新水合后，GUV从水凝胶表面萌芽，膜含有正确取向的GPCR.允许所有试剂达到室温。在此期间，通过将盖子放入甲醇中并在40下超声处理30分钟来清洁盖子。