评估农药对孤独蜜蜂幼虫的影响

本议定书解释了一种将受农药污染的食品喂给孤独蜜蜂 Osmia excavata的方法。该程序检查杀虫剂对孤独蜜蜂幼虫的生态毒性。

该协议可用于预测和减轻农药对孤独蜜蜂的不利影响。该技术的主要优点是模拟幼虫以残留农药为食。这种方法的视觉演示至关重要，因为与群居蜜蜂相比，Osmia excavata的生物学特征是独特的，并且对O.excavata，特别是幼虫的研究很少。

为了准备进料管，使用电动绕组铁将一个直径为0.3毫米的孔打入两毫升离心管的盖子中。为了制备农药，将工业级农药溶解在丙酮中以获得每毫升10毫克的储备溶液，然后将溶液进行梯度稀释至五个浓度以上。接下来，从大规模饲养计划中获取含有供应品和新孵化的Osmia excavata幼虫的塑料蜂管。

使用软刷，轻轻地将幼虫与幼虫分开，根据幼虫的大小和巢内的细胞位置选择雌性幼虫，然后将与所选雌性幼虫一起均匀大小的幼虫放置在直径为60毫米的培养皿中，并将它们放在一边使用。在进行农药处理之前，请权衡规定。要用农药处理规定，首先要测量农药溶液的体积。

然后将所选均匀大小的铼剂浸泡在稀释的农药溶液中10秒钟。用农药处理规定后，再次测量农药溶液的体积。在无菌工作台上对规定进行空气干燥后，将它们添加到准备好的带孔的离心管中。

接下来，称量60只雌性幼虫并使用软刷，将幼虫转移到自然干燥的准备物的表面，每管添加一个幼虫。将幼虫在25升或负2摄氏度，相对湿度为65%至75%的黑暗中将幼虫饲养在生长室中。对于急性致死毒性试验，测量幼虫在放置到治疗和对照规定48小时后的死亡率。

接下来，称取昆虫饲养48小时后剩余的配料量，确定每只幼虫消耗的配料量，然后利用该公式，根据供给量的百分比和每只讧中农药含量，计算出每只幼虫在每种浓度下消耗的农药剂量。对于亚致死毒性试验，在黑光灯下茧化期间，每天观察O.excavata，以测量幼虫发育的持续时间。然后在治疗14天后称量幼虫，以确定幼虫体重增加。

接下来，称量喂食14天后剩余的食物，以计算摄入食物的消耗量和转化效率。当对照蜜蜂长成成虫时，用小剪刀狙击茧，检查茧的次数。急性致死毒性试验表明，挖掘蜱幼虫毒死蜱的LD50值为每只蜜蜂0.001 μg。

在亚致死毒性试验中，随着剂量的增加，幼虫体重增加、消耗量和摄入食物转化效率的指标值在治疗中降低，相对于对照值的最低值在每只蜜蜂0.013微克毒死蜱中观察到。相反，与对照处理相比，每只蜜蜂0.016微克毒死蜱观察到最延长的幼虫发育持续时间。对毒死蜱对eclosion速率的影响的评价表明，摄入剂量的毒死蜱与O.excavata的eclosion速率之间存在显着的负线性关系。

当摄入的剂量超过每只蜜蜂0.02微克时，eclosion率比对照治疗中的剂量低得多。在该协议中，筛选出具有统一尺寸的规定对于最大限度地减少测试误差至关重要。该技术有助于探索农药对独居蜜蜂成虫飞行和繁殖力的影响，从而解决回收率低和种群数量下降的问题。