Name: 在自制迷你生物反应器中从诱导多能干细胞中生成脑类器官 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-12-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 16 s
Description: 了解利用自制迷你生物反应器从诱导多能干细胞生成脑类器官的方法。该技术可高效培养高质量三维脑组织模型，适用于中枢神经系统疾病建模与再生医学研究。

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本工作由俄罗斯联邦科学与高等教育部资助（项目编号 075-15-2019-1669，用于 RT-PCR 分析）以及俄罗斯科学基金会资助（项目编号 19-15-00425，用于其余所有工作）。作者还感谢 Pavel Belikov 在视频剪辑方面的帮助。稿件中的图示使用 BioRender.com 制作。

注意：除步骤 1.2 和 1.3 外，整个实验方案均需使用无菌操作技术。所有培养基和溶液在加入细胞或类器官前需预热至 37 °C。将细胞置于 37 °C、5% CO2、相对湿度 80% 的 CO2 培养箱中培养。实验流程示意图见图 1。
1. 将培养皿转化为微型生物反应器
<ol>
	<li>将无菌的 15 mL 离心管切成高度为 7–8 mm 的环状；对这些环进行高压灭菌。</li>
	<li>将低吸附性、未处理或微生物用的培养皿打碎成碎屑。将约 1 g 塑料碎屑溶于 10 mL 氯仿中，过夜溶解以制备液态塑料。 
	&#8203;注意：操作应在通风橱中进行。</li>
	<li>检查所得液态塑料是否具有足够的黏稠度以便移液；其液滴应能保持球形，且不在表面扩散。若液体过稀，则加入更多塑料碎屑；若过于黏稠，则加入氯仿稀释。</li>
	<li>在无菌的超低吸附性 6 cm 培养皿中央制作一个塑料凸起。以下两种方法均适用，具体如下：
	<ol>
		<li>将已高压灭菌的塑料环置于培养皿中央，然后将液态塑料滴加至环内。</li>
		<li>不使用塑料环，直接将液态塑料滴加在培养皿的中央。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>将培养皿在超净工作台中敞口放置 2–3 小时，直至完全干燥。随后用紫外线照射处理干燥后的培养皿 15–20 分钟。</li>
</ol>
2. 诱导iPSCs的神经元分化
<ol>
	<li>将iPSCs在含有细胞外蛋白的基质预包被的35 mm培养皿中，用多能干细胞培养基培养至75-90%融合度。</li>
	<li>制备A-SR培养基。详见表1。</li>
	<li>在分化第0天，吸除培养基，并加入2 mL A-SR培养基。</li>
	<li>制备培养基A（见表2）。</li>
	<li>从第2天至第14天，使用培养基A培养细胞两周，每隔一天更换一次培养皿中的培养基。</li>
</ol>
第14天神经上皮前体细胞形成球状体
<ol>
	<li>第14天，使用一种特殊的24孔培养板（每孔含有约1,200个微孔）将神经上皮前体细胞制成类球体（图2C）。请遵循以下步骤。 
	注意：在此分化阶段，一个35 mm的培养皿通常含有3 - 3.5 × 106个神经上皮前体细胞。因此，一个35 mm培养皿中的神经上皮前体细胞足以用于3 - 4个24孔微孔培养板的孔。</li>
	<li>准备带有微孔的24孔培养板：向每孔加入1 mL培养基A。使用配备板架的摆动转子，在1,300 × g条件下短暂离心5分钟。在显微镜下检查，确保微孔中无气泡。</li>
	<li>配制培养基B（表3）。</li>
	<li>移除含有神经上皮前体细胞的培养皿中的培养基；用2 mL DMEM/F12洗涤细胞。为使细胞脱离，加入1.5 mL用PBS配制的0.48 mM EDTA溶液。在显微镜下观察细胞脱离情况。</li>
	<li>将细胞收集至15 mL离心管中。向管中加入5 mL DMEM/F12洗涤细胞。在200 × g条件下离心5分钟。弃去上清液，并将细胞重悬于2 mL培养基B中。</li>
	<li>通过台盼蓝染色和血细胞计数板检测细胞浓度和活力。计算获得总共1 × 106个活细胞所需的悬液体积。</li>
	<li>将含有1 × 106个细胞的细胞悬液转移至24孔微孔板的每一孔中。向每孔加入培养基B至总体积达2 mL，轻轻吹打混匀数次，然后在100 × g条件下短暂离心1分钟，以使细胞落入微孔中。 
	注意：每孔细胞数量不应超过1 × 106个，否则相邻微孔中的类球体会发生融合。</li>
	<li>在显微镜下检查细胞是否均匀分布在微孔中。若分布不均，需重复吹打和离心操作。</li>
	<li>将培养板置于培养箱中过夜，使细胞聚集形成类球体。</li>
</ol>
4. 类器官的获取与培养
<ol>
	<li>次日早晨（第15天），在显微镜下检查类球体的质量。健康的类球体应透明且表面光滑（图2A、B）。小心地将每个孔中的类球体收集至15 mL离心管中，静置2–3分钟使其依靠重力沉淀，然后移除上清液。</li>
	<li>向类球体中加入2 mL在冰上同步解冻的基质胶，用移液器轻轻混匀，于室温孵育30分钟。</li>
	<li>为洗去多余的基质胶，向离心管中加入8 mL培养基B，轻轻吹打混匀，然后以100 × g离心1分钟。 
	注意：离心时间和速度不得超过上述条件，以免导致类球体发生不可逆聚集。</li>
	<li>移除上清液，向离心管中加入2&#160;mL培养基B，轻轻吹打混匀。将类球体悬液均分至两个微型生物反应器中，每个反应器中预先加入4 mL培养基B。将微型生物反应器置于15 cm培养皿中，以防止水分蒸发和污染。</li>
	<li>将装有微型生物反应器的培养皿置于摇床上，以70–75 rpm的转速培养类器官。</li>
	<li>第16天，配制培养基C（表4）。</li>
	<li>将类器官转移至15 mL离心管中，静置5分钟使其沉降至管底，吸除上清液后加入5 mL培养基C，再将类器官重新转移回微型生物反应器中。 
	注意：类球体透明且几乎不可见，操作时需小心避免丢失。</li>
	<li>在培养基C中继续培养类球体两周，每两天更换一次培养基。两周培养结束后，每个微型生物反应器中保留约100个类球体用于后续培养，其余过量的类球体用冻存液在液氮中冷冻保存。</li>
	<li>第30天，配制培养基D（表5）。</li>
	<li>更换为培养基D进行培养，该培养基为成熟培养基。每2–3天更换一次培养基，持续三周，之后使用不含BDNF和GDNF的培养基D继续培养。</li>
</ol>

<ol><li>Marchetto, M. C., Winner, B., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pluripotent+stem+cells+in+neurodegenerative+and+neurodevelopmental+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Molecular+Genetics%22%5BJournal%5D)">Pluripotent stem cells in neurodegenerative and neurodevelopmental diseases.</a> Human Molecular Genetics. 19, 71-76 (2010).</li>
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<li>Eremeev, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+organoids%E2%80%94challenges+to+establish+a+brain+prototype%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Cerebral organoids—challenges to establish a brain prototype.</a> Cells. 10 (7), 1790(2021).</li>
<li>Kadoshima, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-organization+of+axial+polarity%2C+inside-out+layer+pattern%2C+and+species-specific+progenitor+dynamics+in+human+ES+Cell-derived+neocortex%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Self-organization of axial polarity, inside-out layer pattern, and species-specific progenitor dynamics in human ES Cell-derived neocortex.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences U. S. A. 110, 20284-20289 (2013).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

所述方案包含两个关键步骤，可生成大小均一的高质量类器官。首先，类器官由细胞数量和细胞成熟度几乎相同的球状体发育而来。其次，自制的生物反应器为每个类器官提供了均一的生长环境，使类器官不会相互拥挤或粘连。
细胞质量和细胞成熟状态对于执行该方案至关重要。诱导iPSCs进行神经元分化时，应在其融合度达到75-90%时开始。如果细胞密度过低，iPSCs可能向非神经元方向分化。iPSCs的神经元诱导时间不应超过两周，因为之后神经前体细胞会变得更加脆弱。在分化过程中，应定期为细胞和类器官提供新鲜培养基，因为营养缺乏会导致类器官质量急剧下降。在动态培养中仅允许短暂的中断。
允许对该实验方案进行一些修改。可用于在迷你生物反应器中心部位制作凸起的惰性生物材料包括：氟塑料、聚乙烯、聚丙烯。如果使用微生物学用的培养皿来制备液态塑料，则所制得的迷你生物反应器应检测其对神经元的细胞毒性。不同直径的培养皿可作为生物反应器的底座，但此时必须调整旋转速度。此外，若培养基体积发生变化，也需调整旋转速度。例如，在6 cm培养皿中加入8 mL培养基时，最佳转速为70...

由人诱导多能干细胞（iPSC）衍生的模型已广泛应用于神经发育和神经退行性疾病的研究所1。在过去十年中，三维脑组织模型（即所谓的脑类器官）在很大程度上补充了传统的二维神经元培养体系2。类器官在一定程度上重现了胚胎脑的三维结构，从而实现了更精确的建模。目前已发表多种用于生成代表不同脑区类器官的实验方案，包括大脑皮层3,4,5、小脑6、中脑、前脑、下丘脑7,8,9以及海马体10。已有多个应用类器官研究人类神经系统疾病的成功范例11。此外，类器官还被应用于药物发现12，以及包括SARS-CoV-2在内的感染性疾病研究13,14。
类脑器官的直径可达数毫米。因此，类脑器官的内部区域可能因缺氧或营养不良而最终发生坏死。为此，许多实验方案中包含了特殊的生物反应器8、摇床或微流控系统15。这些设备可能需要大量昂贵的细胞培养基，且设备本身的成本通常较高。一些生物反应器由许多机械部件组成，难以进行灭菌以重复使用。
大多数实验方案都存在&#34;批次效应&#34;16，这会导致来源于相同iPSC的类器官之间出现显著的变异性。这种变异性阻碍了需要高度一致性的药物筛选或临床前研究。通过获得足够数量的类器官以筛选出大小均一的个体，可能在一定程度上解决这一问题。
时间因素也是一个重要问题。Matsui 等人（2018 年）表明，脑类器官需要至少六个月才能达到成熟17。Trujillo 等人（2019 年）也证明，类器官只有在培养六个月后才会出现电生理活动18。由于类器官成熟周期较长，研究人员往往在前一批分化尚未完成时就启动新的分化过程。多个并行的分化流程需要额外的经费、设备和实验室空间。
我们最近开发了一种微型生物反应器，主要解决了上述问题19。该自制生物反应器由一个超低黏附性或未经处理的培养皿组成，其中心带有一个塑料凸钮。该塑料凸钮可防止类器官在培养皿中心聚集和黏连，这种聚集和黏连通常由摇床旋转引起。本文描述了这种廉价且简单的自制微型生物反应器如何实现高质量脑类器官的大规模制备。

<table><tbody><tr><td>Advanced DMEM/F-12</td><td>Gibco</td><td>12634010</td><td>DMEM/F-12</td></tr><tr><td>AggreWell400</td><td>STEMCELL Technologies Inc</td><td>34425</td><td>含微孔的24孔培养板</td></tr><tr><td>B-27 Supplement</td><td>Gibco</td><td>17504044</td><td>神经元补充剂B</td></tr><tr><td>GlutaMAX Supplement</td><td>Gibco</td><td>35050061</td><td>200 mM L-丙氨酰-L-谷氨酰胺</td></tr><tr><td>Human BDNF</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-096-285</td><td></td></tr><tr><td>Human FGF-2</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-839</td><td></td></tr><tr><td>Human GDNF</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-096-290</td><td></td></tr><tr><td>KnockOut Serum Replacement</td><td>Gibco</td><td>10828028</td><td>血清替代物</td></tr><tr><td>mTESR1</td><td>STEMCELL Technologies Inc</td><td>85850</td><td>多能干细胞培养基</td></tr><tr><td>N2 Supplement</td><td>Gibco</td><td>17502001</td><td></td></tr><tr><td>Neurobasal Medium</td><td>Gibco</td><td>21103049</td><td>神经细胞维持用基础培养基</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin Solution</td><td>Gibco</td><td>15140130</td><td></td></tr><tr><td>Plasmocin</td><td>InvivoGen</td><td>ant-mpt-1</td><td>抗微生物剂</td></tr><tr><td>Purmorphamine</td><td>EMD Millipore</td><td>540220</td><td></td></tr><tr><td>StemMACS Y27632</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-106-538</td><td>Y27632</td></tr><tr><td>StemMACS Dorsomorphin</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-104-466</td><td>Dorsomorphin</td></tr><tr><td>StemMACS LDN-193189</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-106-540</td><td>LDN-193189</td></tr><tr><td>StemMACS SB431542</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-106-543</td><td>SB431542</td></tr><tr><td>Trypan Blue Solution</td><td>Gibco</td><td>15250061</td><td></td></tr><tr><td>Versen solution</td><td>Gibco</td><td>15040066</td><td>含0.48 mM EDTA的PBS</td></tr><tr><td>&amp;beta;-mercaptoethanol</td><td>Gibco</td><td>31350010</td><td></td></tr></tbody></table>

利用自制微型生物反应器由诱导性多能干细胞生成脑类器官

Brain Organoid Generation from Induced Pluripotent Stem Cells in Home-Made Mini Bioreactors

由iPSC衍生的脑类器官是一种极具前景的技术 体外 模拟神经系统病理及药物筛选。该技术为近期新兴，尚处于发展初期，仍存在一些尚未解决的局限性。目前的实验方案尚无法获得足够一致的类器官用于药物发现和临床前研究。类器官的成熟过程可能长达一年，迫使研究人员同时启动多个分化流程，从而增加了实验室在空间和设备方面的额外成本。此外，脑类器官常在中心区域出现坏死区，这是由于营养和氧气供应不足所致。因此，目前大多数实验方案采用循环培养系统以改善营养供应。
同时，目前尚无价格低廉的动态系统或生物反应器用于类器官培养。本文介绍了一种利用紧凑且低成本的自制微型生物反应器培养脑类器官的方案。该方案可实现高质量类器官的大规模制备。

方案流程如图1所示。该方案包含五种培养基，诱导iPSCs分化为脑类器官，持续至少一个月。当iPSCs生长至75-90%融合度时，开始进行分化（图2A，B）。在培养基A中培养iPSCs的第10-11天，开始出现向神经元分化的最初迹象，此时细胞开始聚集成“玫瑰花环”样结构（图2C）。在第14-15天，iPSCs分化为神经上皮前体细胞。99%的细胞表达神经上皮标志物SOX1，且不表达多能性细胞标志物TRA-1-81和OCT4（补充图S1）。随后，我们使用含EDTA的溶液收获细胞，并将其转移至培养基B中，接种于带有微孔的特殊24孔培养板中（图2D）。细胞转移至微孔后的状态如图2E所示。每个微孔促进细胞聚集成一个单一的球形结构。所有微孔中形成的球体大小一致，每个球体约含100个细胞（<...

本文介绍了一种利用人诱导性多能干细胞（iPSCs）生成脑类器官的实验方案。为了大量且高质量地获得脑类器官，我们使用自制的微型生物反应器。

由诱导多能干细胞（iPSC）衍生的脑类器官是一种极具前景的技术，可用于体外模拟神经系统疾病的病理过程以及药物筛选。该技术……

迄今为止，由多能干细胞分化而来的脑类器官是与天然人类脑组织最接近的体外三维模型。此外，脑类器官同样适用于建立各种中枢神经系统病理模型、测试药理活性物质，以及用于再生医学。然而，该技术仍处于发展的初期阶段。根据获得类器官聚集体的方法以及后续的分化培养方式，该实验方案可分为两类。第一类包括不同的分化方案和培养时间，使用不同的分化诱导剂，并在特殊低吸附装置（如市售的离心管或培养板）中通过摇床进行类器官的后续成熟培养；第二类则包括使用特殊的生物反应器。多种实验方案的分析表明，类器官应在具有循环营养培养基的条件下进行培养。然而，目前尚缺乏简单且低成本的系统来获得具有标准大小和形态的类器官，因此需要开发此类装置以实现规模化培养。在本研究中，我们描述了一种制备和测试简单、低成本微型生物反应器的方法，该反应器可实现高质量类器官的大规模生产。将无菌的15毫升离心管切成高7或8毫米的环状。对环状物进行高压灭菌。将经处理或微生物用培养皿中的低聚集体破碎成碎屑。将约1克塑料碎屑溶于10毫升氯仿中，过夜以制备液态塑料。在无菌超低吸附6厘米培养皿的中央制作一个塑料凸起。有两种同样适用的方法。第一步，将高压灭菌器置于培养皿中央的塑料环中，并向环内加入0.5毫升液态塑料。第二步，无需使用塑料环，直接将0.5毫升液态塑料滴加到培养皿的中央。将培养皿在超净工作台中敞开放置2至3小时，直至完全干燥。将诱导性多能干细胞在多能干细胞培养基中培养，直至35毫米培养皿中细胞融合度达到75%或90%。培养皿预先用溶解于冷的杜氏改良伊格尔培养基（Dulbecco Modified Eagle Medium）和Fisher-12培养基中的基质包被。制备添加血清替代物的A型培养基。将诱导性多能干细胞在含血清替代物的培养基中培养1天。在分化第0天，将多能干细胞的培养基更换为无血清替代培养基。制备培养基A。在分化第2天，将培养基更换为培养基A。在培养基A中培养细胞2周，每隔2天更换一次培养皿中的培养基。在第14天，使用一种特殊的24孔培养板开始类球体的形成，该培养板每孔含有约1,200个微孔。准备带有微孔的24孔培养板，向每孔加入1毫升培养基A，在配有板架的摆动转子离心机中以1,300×g短暂离心5分钟。在显微镜下检查微孔中无气泡。准备B培养基。从培养皿中移除培养基。为使细胞脱离，用PBS配制的1.5毫升EDTA溶液处理细胞。在显微镜下控制细胞脱落。将细胞收集至15毫升离心管中。向管中细胞加入5毫升混合的Dulbecco和Fisher培养基。在200g下离心5分钟。弃去上清液，并将细胞重悬于2毫升的B培养基中。将含有10亿个细胞的细胞悬液转移至24孔板的每个微孔中。轻轻吹打细胞数次，然后短暂离心（100g，1分钟），以使细胞落入微孔中。在显微镜下观察，确保细胞在微孔中均匀分布。将培养板孵育过夜，使细胞聚集形成类球体。次日（第15天）早晨，在显微镜下检查类球体的质量，健康的类球体应呈透明且表面光滑。小心地将每个孔中的类球体收集到15毫升离心管中，静置2至3分钟使类球体依靠重力沉淀，然后移除上清液。向类球体中加入2毫升基质（在冰上解冻并临时保存），轻轻吹打混匀，并在室温下孵育30分钟。为洗去多余的基质，向管中加入8毫升B培养基，轻轻吹打混匀，然后在100×g条件下离心1分钟。弃去上清液。向管中加入20毫升B培养基，轻轻吹打混匀，随后将类球体悬液分装至微型生物反应器中。然后将微型生物反应器放入一个15厘米的培养皿中，以防止水分蒸发和污染。将装有微型生物反应器的培养皿置于旋转摇床中。以70至75 rpm的转速培养类器官。第16天，准备C培养基。将类器官转移至50毫升离心管中，静置5分钟，使其沉降至管底。吸除上清液，加入5毫升C培养基。将类器官重新接种至微型生物反应器中。将类球体在C培养基中培养2周，每2天更换一次培养基。在此2周期间，每个微型生物反应器中选择约100个类球体用于后续培养。第30天，配制D培养基。将培养基更换为D培养基，该培养基为成熟培养基。每2至3天更换一次培养基，持续3周。随后使用含有D、F和GDNF的培养基。在培养基A和B中连续培养1个月后，可获得大小和形态标准化的类器官。随着其生长，需要更频繁地更换培养基，最多可达每周4次。培养2个月后，直径达到4至5毫米。再经过一个月，直径达到5至6毫米，生长即停止。该图显示了类器官酶的形态，经苏木精和伊红染色后呈现清晰的切片结构。免疫组织化学分析显示，培养1个月后，存在SOX2阳性的前体细胞簇，包括位于中央区域内部的细胞簇。在类器官的周边区域，可见胶质纤维酸性蛋白、微管相关蛋白2和硫嗪水解酶阳性表达。细胞发生浓缩，对应于神经元的成熟形态。在某些情况下，中央区域的坏死区会形成白色团块。这表明本方案在获得较大类器官方面存在局限性。生长的限制因素很可能是营养物质和氧气扩散的速率。我们使用多种培养基和细胞类型制备类球体，并针对某些类型的类器官测试了本系统。其中包括大量脑和视网膜类器官、肝癌细胞与间充质干细胞组合形成的类器官、胚层间充质干细胞与由诱导性多能干细胞分化而来的造血干细胞组合形成的类器官，以及肠道类器官。最初的细胞组成是否存在差异？分化因子、培养方式和培养基、细胞外基质，以及可能的气体混合成分、平台旋转速率和其他参数都会产生影响。未来将有可能获得具有相同形状、大小或形态模型的类器官，适用于多种器官和组织。本研究提出了微型生物反应器的应用。

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在自制迷你生物反应器中从诱导多能干细胞中生成脑类器官

该视频展示了一种利用诱导多能干细胞生成人脑类器官的方法。视频中展示了神经球如何形成神经外胚层，从而抑制其他胚层的形成。神经球被包埋在三维凝胶基质中，并形成神经上皮芽状结构。当在类器官培养基中孵育时，这些神经上皮芽进一步分化为特定的脑区，最终形成成熟的脑类器官。...

一种体外生成人脑类器官的方法

本视频演示了一种利用诱导性多能干细胞（iPSCs）生成脑类器官的实验方法。将人iPSCs诱导形成拟胚体（EBs）。在诱导培养基中，将EBs培养于聚合物支架上，促进其分化为神经干细胞、前体细胞以及未成熟神经元。最后，将EBs包埋于基质中，并转移至维持培养基中以形成脑类器官。...

生成诱导多能干细胞来源的脑类器官

本视频展示了一种利用一次性三维生物反应器从诱导多能干细胞（iPSCs）生成成熟小脑类器官的技术。该生物反应器可促进iPSC聚集体的形成，随后通过一系列富含生长因子和趋化因子的培养基处理，诱导iPSC聚集体分化为成熟的小脑类器官。之后，收集类器官并进行冷冻保存，以供后续分析。...

使用一次性生物反应器从诱导多能干细胞生成成熟小脑类器官

类脑器官代表了一种新的体外模型系统，可用于研究人类早期大脑发育。in...

由人诱导多能干细胞生成标准化且可重复的前脑类脑器官

本方案旨在以简化且低成本的方式生成脑类器官，无需外源性生长因子或基底膜基质，同时仍能维持脑细胞类型的多样性及细胞组织的多种特征。...

一种静态自诱导法由人胚胎干细胞生成脑类器官

本方案描述了一种动态培养系统，用于在化学成分明确且无饲养层的条件下，利用一次性生物反应器生成尺寸可控的人多能干细胞聚集体，并进一步诱导其向小脑类器官分化。...

由人多能干细胞可扩展地生成成熟小脑类器官及通过免疫染色进行表征

该方案可将人多能干细胞分化为肠道类器官。该方案通过模拟人类正常发育过程，将细胞依次分化为定型内胚层、后肠内胚层，最终形成肠上皮组织。因此，该方案适用于研究肠道发育以及疾病建模应用。...

生成人诱导多能干细胞来源的肠道类器官用于发育与疾病建模研究

我们提供了生成和表征基于人诱导性多能干细胞（hIPSC）的2D和3D新皮质发育模型的详细方案，以及用于定性和定量分析初级纤毛（PC）发生与功能的互补方法。...

基于人诱导性多能干细胞的二维和三维模型解析初级纤毛在新皮质发育中的作用

本文详细描述了人多能干细胞来源的小肠和结肠类器官的生成、维持及表征方法。这些方法旨在提高实验可重复性，扩大可扩展性，并减少类器官接种和传代所需的工作时间。...

人多能干细胞来源的肠道和结肠类器官的生成、维持与表征

本文介绍了一种利用人类多能干细胞通过自组织方式高效生成具有发育相关性的人类心脏类器官（hHOs）的实验方案。该方案依赖于发育信号的顺序性激活，可产生高度复杂且功能相关的人类心脏组织。...

生成源自多能干细胞的自组装人类心脏类器官

本方案介绍了一种利用人多能干细胞生成血管类器官的方法。...

由人诱导性多能干细胞生成血管类器官

了解利用自制迷你生物反应器从诱导多能干细胞生成脑类器官的方法。该技术可高效培养高质量三维脑组织模型，适用于中枢神经系统疾病建模与再生医学研究。

利用自制微型生物反应器由诱导性多能干细胞生成脑类器官

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