Name: 蛛网膜下腔出血结合磁共振成像（MRI）的血管内穿孔模型 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-12-16T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 30 s
Description: 了解小鼠蛛网膜下腔出血血管内穿孔模型的建立方法，结合术后磁共振成像验证出血部位并排除其他颅内病变。该技术可量化出血体积，支持神经科学研究中的亚组分析。

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SL 由中国国家留学基金管理委员会资助。KT 由柏林健康研究所（Berlin Institute of Health）的 BIH-MD 奖学金和 Sonnenfeld-Stiftung 基金会资助。RX 由柏林健康研究所-夏里特临床科学家项目（BIH-Charité Clinician Scientist Program）资助，该项目资金来自夏里特-柏林大学医学中心（Charité - Universitätsmedizin Berlin）和柏林健康研究所（Berlin Institute of Health）。我们感谢德国研究基金会（DFG）以及夏里特-柏林大学医学中心开放获取出版基金对本研究的支持。

实验按照德国柏林州卫生与社会事务局（Landesamt fuer Gesundheit und Soziales, LaGeSo）制定的指南和规定进行（批准号：G0063/18）。本研究使用8至12周龄的雄性C57Bl/6J小鼠，体重为25 ± 0.286 g（平均值 ± 标准误）。
1. 动物准备
<ol>
	<li>通过腹腔注射氯胺酮（70 mg/kg）和赛拉嗪（16 mg/kg）诱导麻醉。维持正常体温，有助于快速进入深度麻醉状态。通过疼痛刺激（如脚趾夹捏）测试镇静程度，并确认无反应。</li>
	<li>用剃刀小心剃除小鼠颈部毛发，依次用70%乙醇和聚维酮碘/氯己定清洁皮肤，并在皮肤表面涂抹1%利多卡因以实现局部镇痛。</li>
	<li>将小鼠置于仰卧位，用胶带固定四肢和尾巴，轻轻将颈部皮肤向手术对侧拉伸，同时轻微抬高颈部。</li>
	<li>使用眼科软膏（例如5%泛醇）防止术中眼球脱水。</li>
</ol>
2. 蛛网膜下腔出血（SAH）诱导
<img alt="小鼠手术操作示意图；展示用于研究目的的动脉结扎与切口步骤。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63150/63150fig01.jpg" data-altupdatedat="1788282455000" data-alt="图 1"> 
图 1：手术技术分步图示。（A）暴露右侧颈总动脉解剖结构示意图：识别出颈总动脉（CCA）及其分叉为颈内动脉（ICA）和颈外动脉（ECA）的结构，以及ECA的小分支（OA和STA）。（B）将ECA从周围组织中游离，并用两根缝线结扎，然后切断。需在分叉附近松松地放置第三根结扎线，但不得阻断血流。（C）暂时阻断ICA和CCA（通过结扎或夹闭），以防止切开ECA时发生大量出血。（D）将尼龙线插入ECA并推进至CCA。必须小心收紧预先设置的结扎线，以防止血液渗出，同时仍允许尼龙线顺利前进。（E）重新开放ICA和CCA，并将ECA残端调整至颅侧方向。将尼龙线向前推进约9 mm进入ICA，即可到达大脑前动脉（ACA）与大脑中动脉（MCA）的分叉处，再向前推进约3 mm即可穿破血管。（F）确认CCA暂时重新结扎后，撤出尼龙线。迅速闭合ECA的预置结扎线，并重新开放CCA以恢复血流。缩写：ACA = 大脑前动脉，CCA = 颈总动脉，ECA = 颈外动脉，MCA = 大脑中动脉，ICA = 颈内动脉，OA = 枕动脉，PPA = 翼腭动脉，STA = 甲状腺上动脉。比例尺 = 2 mm。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63150/63150fig01large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
<ol>
	<li>使用无菌手术刀从下巴至胸骨上缘（1.5 cm）切开颈部皮肤，并钝性分离唾液腺与其周围结缔组织。</li>
	<li>分离气管一侧的肌群（本例为右侧），暴露被营养性血管和小静脉覆盖的颈总动脉（CCA）鞘。颈总动脉与迷走神经彼此紧邻。</li>
	<li>游离颈总动脉，并在其周围预留一根8-0丝线缝线，暂不结扎。注意保护迷走神经，因其易受损伤（图1A）。</li>
	<li>在分离区域的下后三分之一处可见颈总动脉、颈内动脉（ICA）和颈外动脉（ECA）的三分叉结构。解剖ECA的远端，并在其尽可能远的位置双重结扎该血管。</li>
	<li>在双重结扎段的中点切断ECA，形成血管残端。</li>
	<li>预先在ECA残端周围安置一根用于栓线的结扎线，但在成功插入栓线前不要收紧结扎。</li>
	<li>使用缝线或微型夹暂时阻断ICA和CCA（图1B）。</li>
	<li>使用显微血管剪在ECA上做一个小切口（约ECA直径的一半）。将一根5-0（或替代的4-0）聚丙烯栓线插入ECA，并向前推进至CCA。</li>
	<li>轻微收紧ECA上的结扎线，同时松开ICA和CCA上的微型夹（图1C）。</li>
	<li>轻柔回拉栓线，并将ECA残端向颅侧调整，使栓线经三分叉处进入ICA并内翻（图1D）。</li>
	<li>将栓线尖端朝内侧倾斜，与气管中线夹角约为30°，与水平面夹角也约为30°。将栓线向前推进进入ICA。当到达前 cerebral 动脉（ACA）与大脑中动脉（MCA）分叉处时会遇到阻力（约9 mm）。</li>
	<li>再向前推进栓线3 mm，穿破右侧ACA。迅速将栓线撤回到ECA残端，使血液流入蛛网膜下腔。</li>
	<li>将栓线保持在此位置约10秒（图1E）。手术成功的辅助证据包括肌肉震颤、同侧瞳孔缩小、呼吸急促、心律改变以及尿失禁等表现。</li>
	<li>暂时关闭CCA以避免过多失血。立即拔出栓线，并用预先安置的缝线结扎ECA。重新开放CCA，允许再灌注及更多血液流入蛛网膜下腔（图1F）。</li>
	<li>检查有无出血渗漏后，对伤口周围皮肤进行消毒，以预防术后皮肤感染，并使用不可吸收的4-0聚酯纤维缝线缝合伤口。</li>
	<li>将小鼠置于保温箱中直至意识恢复。等待动物完全清醒，并确认其已恢复足够意识以维持胸卧位。在完全恢复前，不得将其放回与其他小鼠共同饲养的笼中。</li>
	<li>术后给予对乙酰氨基酚，剂量为200–300 mg/kg体重，用于缓解疼痛。</li>
	<li>术后每日观察小鼠状况。</li>
</ol>
3. 磁共振成像测量
<ol>
	<li>术后24小时，使用啮齿类动物扫描仪（材料表）和专用的小鼠头部共振器进行MRI扫描；此处使用的是20 mm发射/接收四通道体积共振器。</li>
	<li>将小鼠置于循环水加热毯上，以维持约37 °C的恒定体温。通过面罩吸入2.5%异氟烷（O2/N2O混合气体，30%/70%）诱导麻醉，并以1.5–2%异氟烷维持麻醉，同时持续监测通气情况。</li>
	<li>首先进行快速参考扫描，获取3组正交切面图像包（Tri-Pilot-Multi，FLASH序列，重复时间TR/回波时间TE = 200 ms/3 ms，1次平均，翻转角FA = 30°，视野FOV = 28 mm × 28 mm，矩阵MTX = 256 × 256，层厚1 mm，总采集时间TA = 30 s）。</li>
	<li>随后采用高分辨率T2加权二维快速自旋回波序列进行成像（成像参数：TR/TE = 5505 ms/36 ms，RARE因子8，6次平均，46层连续轴向切片，层厚0.35 mm，覆盖全脑，FOV = 25.6 mm × 25.6 mm，MTX = 256 × 256，TA = 13 min）。</li>
	<li>若结果不清晰，可额外采用呼吸门控的T2*加权梯度回波序列，其等距切片参数与T2加权扫描相同（2D FLASH，TR/TE = 600 ms/6.3 ms，FA = 30°，1次平均，20层轴向切片，层厚0.35 mm，FOV与MTX与T2加权序列相同，TA = 5–10 min，具体取决于呼吸频率）。</li>
	<li>将数据转换为DICOM图像格式，并使用ImageJ软件对蛛网膜下腔出血（SAH）进行分级及血肿体积测量。定量分析的具体步骤详见补充材料中的逐步操作指南（补充图1）。</li>
</ol>

<ol><li>Macdonald, R. L., Schweizer, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+subarachnoid+haemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Spontaneous subarachnoid haemorrhage.</a> The Lancet. 389 (10069), 655-666 (2017).</li>
<li>van Gijn, J., Kerr, R. S., Rinkel, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subarachnoid+haemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Subarachnoid haemorrhage.</a> The Lancet. 369 (9558), 306-318 (2007).</li>
<li>Abraham, M. K., Chang, W. -T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subarachnoid+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Emergency+Medicine+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Subarachnoid hemorrhage.</a> Emergency Medicine Clinics of North America. 34 (4), 901-916 (2016).</li>
<li>Schertz, M., Mehdaoui, H., Hamlat, A., Piotin, M., Banydeen, R., Mejdoubi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Incidence+and+mortality+of+spontaneous+subarachnoid+hemorrhage+in+martinique%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">Incidence and mortality of spontaneous subarachnoid hemorrhage in martinique.</a> PLOS ONE. 11 (5), 0155945(2016).</li>
<li>Okazaki, T., Kuroda, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aneurysmal+subarachnoid+hemorrhage%3A+intensive+care+for+improving+neurological+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Intensive+Care%22%5BJournal%5D)">Aneurysmal subarachnoid hemorrhage: intensive care for improving neurological outcome.</a> Journal of Intensive Care. 6 (1), 28(2018).</li>
<li>Kilbourn, K. J., Levy, S., Staff, I., Kureshi, I., McCullough, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+characteristics+and+outcomes+of+neurogenic+stress+cadiomyopathy+in+aneurysmal+subarachnoid+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Neurology+and+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Clinical characteristics and outcomes of neurogenic stress cadiomyopathy in aneurysmal subarachnoid hemorrhage.</a> Clinical Neurology and Neurosurgery. 115 (7), 909-914 (2013).</li>
<li>de Oliveira Manoel, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+critical+care+management+of+spontaneous+intracranial+hemorrhage%3A+a+contemporary+review%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Care%22%5BJournal%5D)">The critical care management of spontaneous intracranial hemorrhage: a contemporary review.</a> Critical Care. 20 (1), 272(2016).</li>
<li>Schneider, U. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia+inflict+delayed+brain+injury+after+subarachnoid+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathologica%22%5BJournal%5D)">Microglia inflict delayed brain injury after subarachnoid hemorrhage.</a> Acta Neuropathologica. 130 (2), 215-231 (2015).</li>
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<li>Suzuki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heme+oxygenase-1+gene+induction+as+an+intrinsic+regulation+against+delayed+cerebral+vasospasm+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Heme oxygenase-1 gene induction as an intrinsic regulation against delayed cerebral vasospasm in rats.</a> Journal of Clinical Investigation. 104 (1), 59-66 (1999).</li>
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<li>Barry, K. J., Gogjian, M. A., Stein, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+animal+model+for+investigation+of+subarachnoid+hemorrhage+and+cerebral+vasospasm%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Small animal model for investigation of subarachnoid hemorrhage and cerebral vasospasm.</a> Stroke. 10 (5), 538-541 (1979).</li>
<li>Bederson, J. B., Germano, I. M., Guarino, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortical+blood+flow+and+cerebral+perfusion+pressure+in+a+new+noncraniotomy+model+of+subarachnoid+hemorrhage+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Cortical blood flow and cerebral perfusion pressure in a new noncraniotomy model of subarachnoid hemorrhage in the rat.</a> Stroke. 26 (6), 1086-1092 (1995).</li>
<li>Veelken, J. A., Laing, R. J. C., Jakubowski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Sheffield+model+of+subarachnoid+hemorrhage+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">The Sheffield model of subarachnoid hemorrhage in rats.</a> Stroke. 26 (7), 1279-1284 (1995).</li>
<li>Sugawara, T., Ayer, R., Jadhav, V., Zhang, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+grading+system+evaluating+bleeding+scale+in+filament+perforation+subarachnoid+hemorrhage+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">A new grading system evaluating bleeding scale in filament perforation subarachnoid hemorrhage rat model.</a> Journal of Neuroscience Methods. 167 (2), 327-334 (2008).</li>
<li>Egashira, Y., Shishido, H., Hua, Y., Keep, R. F., Xi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+grading+system+based+on+magnetic+resonance+imaging+in+a+mouse+model+of+subarachnoid+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">New grading system based on magnetic resonance imaging in a mouse model of subarachnoid hemorrhage.</a> Stroke. 46 (2), 582-584 (2015).</li>
<li>Mutoh, T., Mutoh, T., Sasaki, K., Nakamura, K., Taki, Y., Ishikawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Value+of+three-dimensional+maximum+intensity+projection+display+to+assist+in+magnetic+resonance+imaging+%28MRI%29-based+grading+in+a+mouse+model+of+subarachnoid+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Medical+Science+Monitor%22%5BJournal%5D)">Value of three-dimensional maximum intensity projection display to assist in magnetic resonance imaging (MRI)-based grading in a mouse model of subarachnoid hemorrhage.</a> Medical Science Monitor. 22, 2050-2055 (2016).</li>
<li>Kothari, R. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ABCs+of+measuring+intracerebral+hemorrhage+volumes%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">The ABCs of measuring intracerebral hemorrhage volumes.</a> Stroke. 27 (8), 1304-1305 (1996).</li>
<li>Leclerc, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+pathophysiology+in+humans+and+rodent+models+of+subarachnoid+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Molecular+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">A comparison of pathophysiology in humans and rodent models of subarachnoid hemorrhage.</a> Frontiers in Molecular Neuroscience. 11, 71(2018).</li>
<li>Titova, E., Ostrowski, R. P., Zhang, J. H., Tang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+models+of+subarachnoid+hemorrhage+for+studies+of+cerebral+vasospasm%5BTitle%5D)+AND+%22Neurological+Research%22%5BJournal%5D)">Experimental models of subarachnoid hemorrhage for studies of cerebral vasospasm.</a> Neurological Research. 31 (6), 568-581 (2009).</li>
<li>Marbacher, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+review+of+in+vivo+animal+models+of+subarachnoid+hemorrhage%3A+Species%2C+standard+parameters%2C+and+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Stroke+Research%22%5BJournal%5D)">Systematic review of in vivo animal models of subarachnoid hemorrhage: Species, standard parameters, and outcomes.</a> Translational Stroke Research. 10 (3), 250-258 (2019).</li>
<li>Marbacher, S., Fandino, J., Kitchen, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standard+intracranial+in+vivo+animal+models+of+delayed+cerebral+vasospasm%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Standard intracranial in vivo animal models of delayed cerebral vasospasm.</a> British Journal of Neurosurgery. 24 (4), 415-434 (2010).</li>
<li>Thompson, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+cerebral+aneurysm+models%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgical+Focus%22%5BJournal%5D)">In vivo cerebral aneurysm models.</a> Neurosurgical Focus. 47 (1), 1-8 (2019).</li>
<li>Frontera, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prediction+of+symptomatic+vasospasm+after+subarachnoid+hemorrhage%3A+The+modified+fisher+scale%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Prediction of symptomatic vasospasm after subarachnoid hemorrhage: The modified fisher scale.</a> Neurosurgery. 59 (1), 21-26 (2006).</li>
<li>Fisher, C. M., Kistler, J. P., Davis, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relation+of+cerebral+vasospasm+to+subarachnoid+hemorrhage+visualized+by+computerized+tomographic+scanning%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Relation of cerebral vasospasm to subarachnoid hemorrhage visualized by computerized tomographic scanning.</a> Neurosurgery. 6 (1), 1-9 (1980).</li>
<li>Wilson, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+quantitative+method+to+predict+symptomatic+vasospasm+after+subarachnoid+hemorrhage+based+on+computed+tomography%3A+Beyond+the+fisher+scale%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">A simple and quantitative method to predict symptomatic vasospasm after subarachnoid hemorrhage based on computed tomography: Beyond the fisher scale.</a> Neurosurgery. 71 (4), 869-875 (2012).</li>
<li>Schüller, K., Bühler, D., Plesnila, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+of+subarachnoid+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">A murine model of subarachnoid hemorrhage.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (81), e50845(2013).</li>
</ol>

无利益冲突

综上所述，本研究建立了一种通过血管内细丝穿孔法诱导的标准化蛛网膜下腔出血（SAH）小鼠模型，该模型具有创伤小、手术时间短和死亡率可接受的优点。术后24小时进行磁共振成像（MRI）检查，以确认出血部位准确，并排除其他相关颅内病变。此外，我们对不同SAH出血等级进行了分类，并测量了出血量，从而可根据出血等级进行进一步的亚组分析。
小鼠的适当体位会影响穿刺成功与否。应将小鼠颈部稍向手术对侧拉伸，头部略抬高，以暴露三分叉处，使穿刺路径更易于接近。若导丝前进受阻，可将其稍许回撤至三分叉处，并调整头部位置，直至导丝能无阻力地顺利推进。
术中神经保护至关重要。迷走神经和颈丛的损伤可能导致呼吸和心率节律改变，部分小鼠甚至可能因恶性心律失常而死亡。若出现上述症状，必须暂停操作数分钟，直至呼吸和心率稳定。
减少术中失血对于提高小鼠存活率至关重要。根据我们的经验，双重结扎应尽可能靠近颈外动脉（ECA）进行。我们在两个结扎点之间的中段切断ECA，以防止远端ECA残端的血液反流。当将线栓插入ECA...

蛛网膜下腔出血（SAH）由颅内动脉瘤破裂引起，是一种危及生命的急症，具有较高的致残率和死亡率，约占所有脑卒中病例的5%1,2。SAH患者表现为剧烈头痛、神经功能障碍以及意识状态进行性恶化3。约30%的SAH患者在初次出血事件后的30天内死亡4。临床上，50%的患者在早期脑损伤之后出现迟发性脑损伤（DBI）。DBI的特征是迟发性脑缺血和迟发性神经功能缺损。目前研究表明，多种不同因素的协同作用导致神经功能丧失，包括血脑屏障破坏、小动脉收缩、微循环功能障碍以及血栓形成5,6。
蛛网膜下腔出血（SAH）的一个独特之处在于，其发病机制起源于脑实质外部位，但随后引发脑实质内的有害级联反应：病理过程始于血液在蛛网膜下腔的积聚，进而触发多种脑实质内效应，例如神经炎症、神经元和内皮细胞凋亡、皮层扩布性去极化以及脑水肿形成7,8。
临床研究受到多种因素的限制，因此动物模型在持续且准确地模拟疾病病理机制变化方面成为关键环节。目前已提出多种蛛网膜下腔出血（SAH）模型方案，例如将自体血注入小脑延髓池（ACM）。此外，还有一种改良方法，即分别向小脑延髓池和视交叉池进行两次自体血注射（APC）9,10。尽管自体血注射是一种模拟蛛网膜下腔出血后血管痉挛及炎症反应病理过程的简便方法，但其颅内压（ICP）升高相对较慢，且未诱导出明显的血脑屏障通透性改变11,12。另一种方法为动脉周围置血法，常用于较大的SAH模型（如猴和犬），其操作是将抗凝的自体血或类似的血液制品放置于血管周围。通过显微镜可观察到动脉直径的变化，作为SAH后脑血管痉挛的评估指标13。
Barry 等人于1979年首次描述了一种血管内穿孔模型，该模型通过去除颅骨暴露基底动脉，随后使用钨微电极在显微立体定位技术引导下穿刺动脉14。1995年，Bederson 和 Veelken 对 Zea-Longa 的脑缺血模型进行了改良，建立了血管内穿孔法，并自此不断优化该技术15,16。该方法的依据在于小鼠与人类具有相似的颅内血管网络，即威尔氏环（circle of Willis）。
在小鼠模型中，针对蛛网膜下腔出血（SAH）的术后评估与分级，已有多种方法被提出。Sugawara 等人开发了一种分级量表，自2008年以来已被广泛使用。17该方法基于形态学变化评估蛛网膜下腔出血（SAH）的严重程度。然而，使用该方法时必须在直视下检查小鼠脑组织的形态，因此需处死小鼠以进行评估。此外，尚有多种用于确定SAH严重程度的方法 体内 已建立多种评估方法，包括从简单的神经功能评分到颅内压（ICP）监测，再到各种放射影像学技术。此外，MRI分级已被证实为一种新型无创工具，可用于评估蛛网膜下腔出血（SAH）的严重程度，并与神经功能评分具有相关性。18,19.
此处介绍了一种由血管内穿刺引起的蛛网膜下腔出血（SAH）模型的实验方案，并结合术后磁共振成像（MRI）。旨在建立一套系统，以客观量化出血量 体内 在该设定中，我们还开发了一种基于7.0 T高分辨率T2加权MRI的蛛网膜下腔出血（SAH）分级及总血容量量化系统。该方法可确保SAH的正确诱导，并排除其他病理状况，如脑卒中、脑积水或脑内出血（ICH）以及相关并发症。

<table><tbody><tr><td>眼霜</td><td>Bayer</td><td>815529836</td><td>Bepanthen</td></tr><tr><td>图像分析软件</td><td>ImageJ</td><td></td><td>捆绑 Java 1.8.0_172</td></tr><tr><td>结扎缝线（5-0）</td><td>SMI</td><td></td><td>黑色丝线 USP</td></tr><tr><td>显微镜光源</td><td>Zeiss</td><td>CL 6000 LED</td><td></td></tr><tr><td>氯胺酮</td><td>CP-pharma</td><td>797-037</td><td>100 mg/mL</td></tr><tr><td>磁共振成像仪</td><td>Bruker</td><td>Pharmascan 70/16</td><td>&amp;nbsp;7 Tesla</td></tr><tr><td>磁共振成像采集软件</td><td>Bruker</td><td></td><td>Bruker Paravision 5.1</td></tr><tr><td>对乙酰氨基酚（40 mg/mL）</td><td>bene Arzneimittel</td><td>4993736</td><td></td></tr><tr><td>普理灵缝线（5-0）</td><td>Erhicon</td><td>EH7255</td><td></td></tr><tr><td>剃刀</td><td>Wella</td><td>HS61</td><td></td></tr><tr><td>手术器械（精细剪刀）</td><td>FST</td><td>14060-09</td><td></td></tr><tr><td>手术器械（镊子#1）</td><td>AESCULAP</td><td>FM001R</td><td></td></tr><tr><td>手术器械（镊子#2）</td><td>AESCULAP</td><td>FD2855R</td><td></td></tr><tr><td>手术器械（镊子#3）</td><td>Hammacher</td><td>HCS 082-12</td><td></td></tr><tr><td>手术器械（持针器）</td><td>FST</td><td>91201-13</td><td></td></tr><tr><td>手术器械（Vannas弹簧剪）</td><td>FST</td><td>15000-08</td><td></td></tr><tr><td>手术显微镜</td><td>Zeiss</td><td>Stemi 2000 C</td><td></td></tr><tr><td>通气监测系统</td><td>Stony Brook</td><td></td><td>Small Animal Monitoring &amp;amp; Gating System</td></tr><tr><td>伤口缝合线（4-0）</td><td>Erhicon</td><td>CB84D</td><td></td></tr><tr><td>赛拉嗪</td><td>CP-pharma</td><td>797-062</td><td>20 mg/mL</td></tr></tbody></table>

蛛网膜下腔出血的血管内穿孔模型结合磁共振成像（mri）

Endovascular Perforation Model for Subarachnoid Hemorrhage Combined with Magnetic Resonance Imaging (MRI)

通过血管内丝线穿孔法模拟蛛网膜下腔出血（SAH）是一种常用的动物模型，但该技术可能导致较高的死亡率，并引发不可控的SAH出血量以及其他颅内并发症，如脑卒中或颅内出血。本实验方案介绍了一种标准化的SAH小鼠模型，采用血管内丝线穿孔法诱导SAH，并在术后24小时结合7.0 T磁共振成像（MRI）检查，以确认出血部位准确，并排除其他相关颅内病理改变。简言之，C57BL/6J小鼠通过腹腔注射氯胺酮/赛拉嗪（70 mg/16 mg/kg体重）进行麻醉，仰卧位固定。经颈部正中切口暴露颈总动脉（CCA）及颈动脉分叉处，将5-0不可吸收单丝聚丙烯缝合线逆行插入颈外动脉（ECA），并沿颈总动脉推进。随后将丝线经颈内动脉（ICA）进入，并向前推送以穿破大脑前动脉（ACA）。术后小鼠恢复后，在24小时时接受7.0 T MRI检查。通过术后MRI可对出血体积进行量化和分级，从而建立稳定的实验性SAH组，并可根据出血量进一步开展亚组分析。

死亡率 
本研究共对92只8至12周龄的雄性C57Bl/6J小鼠进行了蛛网膜下腔出血（SAH）手术；其中观察到总体死亡率为11.9%（n = 12）。死亡事件均发生在术后6至24小时内，提示围手术期死亡以及SAH出血本身是最可能的致死因素。
SAH出血分级 
共有50只小鼠在术后24小时接受MRI检查，以确认SAH并检测其他可能同时发生的病理状况，包括亚急性缺血性卒中和脑积水。其余动物用于更早期的扫描，以确定术后MRI检查的最佳时间点。在术后24小时检查的50只小鼠中，有n=7只未出现SAH（出血等级0），以及n=5只小鼠被检测到合并卒中和/或脑内出血（出血等级IV）。SAH出血等级根据T2加权MRI扫描结果进行量化，如下所示（图2A，B）：
0级：未发现蛛网膜下腔出血或出血（14%） 
I级：蛛网膜下腔出血厚度≤0.80 mm（24%） 
I...

本文介绍了一种标准化的蛛网膜下腔出血（SAH）小鼠模型，通过血管内细丝穿刺法诱导，并在术后24小时结合磁共振成像（MRI）以确认出血部位准确，并排除其他相关的颅内病理改变。

蛛网膜下腔出血的血管内穿孔模型结合磁共振成像（MRI）

用于模拟蛛网膜下腔出血（SAH）的血管内丝线穿孔模型是一种常用模型——然而，该技术可能导致较高的……

结合术后磁共振成像的血管内穿刺模型可用于确认出血并排除其他颅内病理改变。该方法的优势之一在于可对出血量进行定量，以便进一步开展亚组分析。首先剃除小鼠颈部的毛发。在操作过程中使用眼膏。先用70%乙醇对皮肤进行消毒，随后使用聚维酮碘或氯己定，并注射1%利多卡因。将小鼠置于仰卧位，使其头部和躯干朝上。用胶带固定小鼠背部四肢以稳定小鼠。拉伸颈部皮肤并将其提起。从下巴至胸骨上缘展开颈部皮肤，分离唾液腺与周围结缔组织。沿气管一侧分离肌肉，暴露颈总动脉鞘。使用牵开器或无菌纱布垫暴露手术区域，游离颈总动脉，并留置一根未结扎的8-0丝线备用，注意避免损伤迷走神经。分离颈外动脉远端，并在远端位置对血管进行双重结扎。在结扎两次的丝线段中点处分离ECA，形成血管残端。在ICA周围留置丝线缝合线，但不结扎。预先在ECA残端处为导丝放置一道结扎线。在成功插入尼龙丝之前，不要关闭血管。使用缝线或微型夹暂时闭合颈内动脉（ICA）和颈总动脉（CCA）。使用显微血管剪在颈外动脉（ECA）上做一切口，插入5-0或 alternatively 4-0 Prolene 尼龙丝，并将其推进至颈总动脉（CCA）。在分离 ICA 和 CCA 上的微型夹时，同时结扎 ECA 的结扎线。轻柔地回撤尼龙线，并将 ECA 残端向头侧方向调整，同时将尼龙线经分叉处插入 ICA。将尼龙线尖端在水平面内以与气管中线约 30 度的角度向内侧置入 ICA 内。在前 cerebral 动脉（ACA）与中 cerebral 动脉（MCA）分叉处可观察到阻力。将线栓向前推进至多三毫米，穿破右侧 ACA。迅速将线栓撤回至颈外动脉（ECA）残端，以使血液流入蛛网膜下腔。将尼龙线在此位置放置10秒，然后撤出。可预先暂时闭合颈总动脉以避免大量失血，然后再撤出尼龙线。使用预先准备的缝线结扎颈外动脉（ECA），并重新开放此前已结扎的颈总动脉（CCA）。若出现肌肉震颤、同侧瞳孔缩小、呼吸急促、心律改变及尿失禁等症状，可作为手术成功的辅助证据。确保无出血渗漏，并对皮肤进行消毒。缝合伤口。将小鼠放入保温箱中，等待动物恢复足够的意识以维持胸卧位。为缓解疼痛，给予每毫升1.2毫克的对乙酰氨基酚。在小鼠头部谐振器上使用啮齿类动物扫描仪，在手术后24小时进行MRI扫描。将小鼠放置在37摄氏度的循环水加热毯上。首先，进行快速参考扫描，获取三个正交切面的图像包。然后采用高分辨率T2加权二维快速自旋回波序列进行成像。将数据转换为DICOM图像格式，并使用ImageJ软件进行蛛网膜下腔出血（SAH）分级和血凝块体积测量。为确保准确判断出血部位并排除其他颅内病变，术后24小时进行MRI扫描。SAH出血分级基于T2加权MRI扫描结果进行量化。在检测的小鼠中，14%的动物被归类为出血等级零级，影像学上未见蛛网膜下腔出血（SAH）或出血征象。大多数动物的出血等级介于一级至三级之间，10%的动物表现为四级出血，定义为沿脑沟分布的SAH和/或脑内出血（ICH）。根据SAH厚度对各级SAH的总出血量进行了定量，有助于确定出血范围。根据轴向蛛网膜下腔出血（SAH）厚度计算的出血量在相应的一至三级亚组中显示出显著差异。在整个手术过程中，彻底分离周围连接组织对于准确放置缝线至关重要。确保颈外动脉（ECA）残端长度足够，以便为结扎、切开和插入线栓提供充足的操作空间。在到达大脑中动脉-前 cerebral 动脉分叉之前，若感到阻力，切勿向前推进导丝，以防止血管过早穿孔。

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蛛网膜下腔出血结合磁共振成像（MRI）的血管内穿孔模型

动脉瘤性蛛网膜下腔出血（SAH）是指动脉瘤破裂后血液流入蛛网膜下腔所引起的出血。尽管由于治疗手段的不断改进，该疾病的发病率和死亡率已呈下降趋势，但蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的风险仍与数年前持平。自1979年Barry et al. 首次在实验性脑血管痉挛模型中使用大鼠以来，建立一种全面且可重复的动物模型以识别脑血管痉挛的启动事件，一直是研究的重点。早期在大鼠中的研究表明，向小脑延髓池单次注射自体血可导致急性（数分钟内发生）但不会引起迟发性脑血管痉挛3, 6,...

一种低死亡率的大鼠模型用于评估实验性蛛网膜下腔出血后迟发性脑血管痉挛

从一名被诊断为脑动脉瘤的患者开始，这是一种脑内血管膨出并充满血液的病症。将患者头部固定在磁共振成像仪的头部线圈内。 开始成像。 该系统产生强磁场，使脑组织中的质子沿其方向排列。 通过施加反转射频脉冲，使质子的排列方向与主磁场相反，从而启动磁化准备快速梯度回波（MPRAGE）序列。当脉冲停止后，质子通过T1弛豫过程逐渐恢复到与磁场原有的对齐状态，并在此过程中发射电磁信号。流动血液中的质子具有较短的T1弛豫时间，可产生明亮的信号，而周围静止组织产生的信号较弱，形成暗背景。 头部线圈检测这些信号，并将其处理成高分辨率的三维图像。 脑动脉瘤表现为具有明显瘤颈和瘤顶区域的膨出。...

使用MPRAGE进行脑动脉瘤的磁共振成像

血管周围间隙（PVS）是围绕脑血管的充满液体的间隙，参与脑内液体的引流。为了观察小血管卒中期间血管周围间隙（PVS）的变化，需对患者脑部基底节区域进行磁共振成像（MRI）。成像方案包括T2加权快速自旋回波和液体衰减反转恢复（FLAIR）序列。T2加权成像可增强充满脑脊液（CSF）的血管周围间隙与周围组织之间的对比度。FLAIR...

人类小血管卒中期间脑内血管周围间隙的磁共振成像

本视频展示了通过血管内穿刺法在小鼠模型中诱导蛛网膜下腔出血的操作过程。对麻醉后的小鼠颈部区域进行切口，以暴露颈总动脉及其分叉部位。将一根细丝经动脉插入，穿刺颅内动脉分支，从而诱导蛛网膜下腔出血。...

通过血管内穿刺法在小鼠模型中诱导蛛网膜下腔出血

一种蛛网膜下腔出血的小鼠模型

兔实验性颅内压控制的血液分流蛛网膜下腔出血（SAH）模型结合了标准操作步骤——锁骨下动脉插管和经皮小脑延髓池穿刺，可高度模拟人类SAH后的病理生理状态。本文提供了详细的分步操作说明，并讨论了成功建立实验性SAH模型的关键手术要点。...

用于研究蛛网膜下腔出血急性期与远期后遗症的兔血液分流模型：技术要点

本文旨在介绍一种方法，该方法可在小鼠微计算机断层扫描后实现脑血管树的三维重建，并测定整个血管节段的体积，可用于量化蛛网膜下腔出血小鼠模型中的脑血管痉挛。...

一种用于量化蛛网膜下腔出血小鼠模型中脑血管痉挛的容积法

本方案中，我们描述了一种通过向小脑延髓池两次注射自体全血来建立标准化的蛛网膜下腔出血（SAH）小鼠模型的方法。这种双次注射操作具有高度的标准化，属于一种中度至急性SAH模型，且在死亡率方面相对安全。...

经大池双次直接注射血液作为蛛网膜下腔出血模型

本文旨在介绍一种基于超声成像的方法，该方法能够 体内 小鼠脑动脉血流成像。我们展示了该技术在蛛网膜下腔出血（SAH）小鼠模型中用于测定与血管痉挛相关的血流速度变化的应用。...

利用高频经颅双功能超声分析小鼠蛛网膜下腔出血模型中的脑血管痉挛

磁共振成像（MRI）已成为研究基因改造小鼠表型的日益流行的工具。本文阐述了利用多只小鼠同时进行MRI扫描，以实现对基因改造小鼠高通量表型分析所必需的方法。...

多只小鼠神经解剖磁共振成像

了解小鼠蛛网膜下腔出血血管内穿孔模型的建立方法，结合术后磁共振成像验证出血部位并排除其他颅内病变。该技术可量化出血体积，支持神经科学研究中的亚组分析。

蛛网膜下腔出血的血管内穿孔模型结合磁共振成像（MRI）

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