Name: 利用细胞外通量分析探索单个3D微组织球体的线粒体能量代谢 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-02-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 15 s
Description: 探索利用Seahorse细胞外通量分析技术检测单个3D肿瘤球体线粒体能量代谢的方法。该方案为癌症研究和药物发现提供了优于单层细胞培养的生理相关模型，可准确评估不同细胞系和药物处理下的代谢变化。

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N.J.C 获得了英国生物技术和生物科学研究生理事会（BBSRC）MIBTP 企业合作奖（BB/M01116X/1，1940003）以及 Sygnature Discovery 有限公司的支持

作者声明无任何利益冲突。

主要发现与成果 
本文提供了一项详细的实验方案&#160;利用XFe96 XF分析仪，结合一系列癌源性细胞系，检测单个三维球状体的线粒体能量代谢。本文建立并描述了一种快速培养A549、HepG2/C3A、MCF7和SK-OV-3细胞球状体的方法，该方法采用抗细胞黏附技术实现细胞强制聚集。本方案针对使用XF技术检测球状体代谢过程中的多个关键问题进行了探讨，包括：（1）优化球状体培养流程，以及将球状体从原始培养容器转移至技术供应商提供的专用球状体检测微孔板时的操作与处理；（2）呼吸作用相关化合物的使用浓度及其渗透的时间依赖性；（3）加样注射策略的选择；（4）实验组间数据标准化的方法。本文对上述各项因素均进行了系统研究，并在下文予以详细讨论。所提出的方法旨在以XFe96通量分析仪为基础，利用单个三维球状体获得稳定可靠的代谢氧通量数据。该实验策略可作为通用框架和起点，适用于基础实验室条件下其他球状体模型的建立与应用。
注意事项 
类球体生长、大小及XF技术的敏感性 
为了使用...

An erratum was issued for: <a href="https://www.jove.com/t/63346">Exploring Mitochondrial Energy Metabolism of Single 3D Microtissue Spheroids using Extracellular Flux Analysis</a>. The Representative Results section was updated.
Figure 5 was updated from:
<img alt="Oxygen consumption rate (OCR) graphs with oligomycin effects on A549, HepG2/C3A, MCF-7, SK-OV-3 cells." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63346/63346fig05.jpg" data-altupdatedat="1761830439000" data-alt="Figure 5"> 
Figure 5: Single or sequential injection of mitochondrial respiratory compounds. Cancer-cell-derived spheroids of MCF-7, HEPG2/C3A, SK-OV-3, and A549 were placed into wells of an XFe96 spheroid microplate in XF RPMI and probed for OCR using the Agilent Seahorse XFe96 analyzer. OCR was measured 5x, after which 2 µg/mL oligomycin (injection Port A: green trace) or 5 µM BAM15 (injection Port A: blue trace or injection port B: green trace) to inhibit the mitochondrial ATP synthase and determine maximal respiratory capacity, respectively. Kinetic OCR data are expressed as % basal (A-D). Maximal respiratory capacity (OCRmax) was calculated as a factor of basal OCR by the equation: OCRmax = OCRBAM15 / OCRbasal. OCRmax was obtained from OCR averages across measurement cycles 8-10 post BAM15 injection with (green bars) and without (blue bars) oligomycin. Data are averages ± SEM from 3-8 individual well replicates across the spheroid assay microplate. Abbreviations: OCR = oxygen consumption rate. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63346/63346fig05large.jpg" target="_blank">Please click here to view a larger version of this figure.</a>
to:
<img alt="Oligomycin effect on OCR in cancer cell lines; comparison graph; metabolic activity analysis." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63346/63346fig5v2.jpg" data-altupdatedat="1761830439000" data-alt="Figure 5"> 
Figure 5: Single or sequential injection of mitochondrial respiratory compounds. Cancer-cell-derived spheroids of MCF-7, HEPG2/C3A, SK-OV-3, and A549 were placed into wells of an XFe96 spheroid microplate in XF RPMI and probed for OCR using the Agilent Seahorse XFe96 analyzer. OCR was measured 5x, after which 2 µg/mL oligomycin (injection Port A: green trace) or 5 µM BAM15 (injection Port A: blue trace or injection port B: green trace) to inhibit the mitochondrial ATP synthase and determine maximal respiratory capacity, respectively. Kinetic OCR data are expressed as % basal (A-D). Maximal respiratory capacity (OCRmax) was calculated as a factor of basal OCR by the equation: OCRmax = OCRBAM15 / OCRbasal. OCRmax was obtained from OCR averages across measurement cycles 8-10 post BAM15 injection with (green bars) and without (blue bars) oligomycin. Data are averages ± SEM from 3-8 individual well replicates across the spheroid assay microplate. Abbreviations: OCR = oxygen consumption rate. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63346/63346fig5v2large.jpg" target="_blank">Please click here to view a larger version of this figure.</a>

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/63346">Exploring Mitochondrial Energy Metabolism of Single 3D Microtissue Spheroids using Extracellular Flux Analysis</a>. The Representative Results&#160;section was&#160;updated.

Erratum: Exploring Mitochondrial Energy Metabolism of Single 3D Microtissue Spheroids using Extracellular Flux Analysis

过去20年中，生物研究领域的体外（in vitro）模型技术迅速发展。如今，这类模型包括器官芯片、类器官以及三维微组织球体，这些已成为提升体外（in vitro）与体内（in vivo）研究之间转化效率的共同研究重点。先进体外（in vitro）模型的应用，特别是球体模型，已广泛覆盖多个研究领域，包括组织工程、干细胞研究、癌症与疾病生物学1,2,3,4,5,6,7，以及安全性测试，如遗传毒理学8,9,10、纳米材料毒理学11,12,13,14，以及药物安全性和有效性测试8,15,16,17,18,19。
正常的细胞形态对于生物学表型和功能至关重要。将细胞培养成三维微组织球体可使细胞获得更接近体内实际观察到的形态、表型功能和组织结构 体内 但难以通过传统的单层细胞培养技术捕获。两者 体内 和 体外 细胞功能直接受到细胞微环境的影响，这种影响不仅限于细胞间的通讯与程序化过程（如细胞间连接的形成、细胞生态位构建的机会）；还包括细胞对局部环境中激素和生长因子的暴露（如作为炎症反应一部分的细胞因子暴露）；物理与化学基质的组成（如细胞是生长在刚性组织培养塑料上还是弹性组织环境中）；以及最重要的是，细胞代谢如何受到营养物质、氧气供应以及乳酸等代谢废物处理过程的影响。
代谢通量分析是一种强大的方法，可用于在限定条件下研究细胞代谢 体外 系统。具体而言，XF 技术能够分析完整细胞和组织中细胞生物能量学的实时、活体动态变化。鉴于许多细胞内代谢事件发生在数秒至数分钟的时间尺度内，实时功能分析方法对于理解完整细胞和组织中细胞代谢通量的实时变化至关重要。 体外.
本文提供了培养源自癌症的细胞系 A549（肺腺癌）、HepG2/C3A（肝细胞癌）、MCF-7（乳腺腺癌）和 SK-OV-3（卵巢腺癌）的实验方案 体外 3D&#160;采用强制聚集方法的球状体模型（图1）。本文还（i）详细描述了如何使用安捷伦 XFe96 XF 分析仪检测单个三维球状体的线粒体能量代谢；（ii）强调了利用单个三维球状体优化 XF 检测的方法；（iii）讨论了采用该方法检测三维球状体代谢时的重要注意事项与局限性。尤为重要的是，本文阐述了数据的采集方法，这些数据可用于计算氧消耗率（OCR），从而确定细胞球状体中的氧化磷酸化水平及线粒体功能。尽管本方案未对细胞外酸化率（ECAR）进行分析，但 ECAR 是 XF 实验中与 OCR 同时测量的另一项参数。然而，ECAR 数据常因采用仪器制造商提供的基础分析方法而被解读不当或不准确。本文对基于该技术厂商基本方法计算 ECAR 所存在的局限性进行了评述。

<table><tbody><tr><td>A549</td><td>ECACC</td><td>&amp;nbsp;#86012804</td><td>肺癌细胞系</td></tr><tr><td>Agilent Seahorse XF RPMI 培养基，pH 7.4</td><td>Agilent Technologies Inc.</td><td>103576-100</td><td>含 1 mM HEPES 的 XF 检测培养基，不含酚红、碳酸氢钠、葡萄糖、L-谷氨酰胺和丙酮酸钠</td></tr><tr><td>Agilent Seahorse XFe96 细胞外通量分析仪</td><td>Agilent Technologies Inc.</td><td>-</td><td>用于单个类球体中氧消耗速率测量的仪器</td></tr><tr><td>抗霉素 A</td><td>Merck Life Science</td><td>A8674</td><td>线粒体呼吸链复合体 III 抑制剂</td></tr><tr><td>BAM15</td><td>TOCRIS bio-techne</td><td>5737</td><td>线粒体质子载体解偶联剂</td></tr><tr><td>黑色壁微孔板</td><td>Greiner Bio-One</td><td>655076</td><td>用于基于荧光的检测</td></tr><tr><td>CELLSTAR 防粘附表面 96 孔 U 型微孔板</td><td>Greiner Bio-One</td><td>650970</td><td>用于生成类球体的微孔板</td></tr><tr><td>CellTiter-Glo 3D 细胞活力检测试剂盒</td><td>Promega</td><td>G9681</td><td>用于测定 3D 微组织类球体细胞活力的检测试剂盒</td></tr><tr><td>Cultrex 聚-D-赖氨酸</td><td>R&amp;D Systems a biotechne brand</td><td>3439-100-01</td><td>用于包被 XFe96 类球体微孔板以促进类球体附着的分子细胞粘附剂</td></tr><tr><td>D-(+)-葡萄糖</td><td>Merck Life Sciences</td><td>G8270</td><td>细胞培养生长及 XF 检测培养基的补充剂</td></tr><tr><td>Dulbecco&amp;rsquo;s 改良伊格尔培养基 (DMEM)</td><td>Gibco</td><td>11885084</td><td>HepG2/C3A 类球体的培养基</td></tr><tr><td>EVOS XL Core 成像系统</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>AMEX1000</td><td>相差成像显微镜</td></tr><tr><td>EZ-PCR 支原体检测试剂盒</td><td>Biological Industries</td><td>20-700-20</td><td>细胞培养物中的支原体筛查</td></tr><tr><td>FIJI 即 Image J</td><td></td><td></td><td>合并图像的分析</td></tr><tr><td>胎牛血清</td><td>Merck Life Science</td><td>F7524</td><td>细胞培养基补充剂</td></tr><tr><td>HepG2/C3A</td><td>ATCC</td><td>&amp;nbsp;#CRL-10741</td><td>肝癌细胞系，源自亲代 HepG2 细胞系的克隆衍生物</td></tr><tr><td>Lactate-Glo</td><td>Promega</td><td>J5021</td><td>用于测定类球体培养基中乳酸含量的检测试剂盒</td></tr><tr><td>L-谷氨酰胺（200 mM 溶液）</td><td>Merk Life Sciences</td><td>G7513</td><td>细胞培养生长及 XF 检测培养基的补充剂</td></tr><tr><td>M50 体视显微镜</td><td>Leica Microsytems</td><td>LEICAM50</td><td>体视解剖显微镜；用于类球体操作</td></tr><tr><td>MCF-7</td><td>ECACC</td><td>#86012803</td><td>乳腺腺癌细胞系</td></tr><tr><td>来自&lt;em&gt;Streptomyces diastatochromogenes&lt;/em&gt;的鱼藤酮</td><td>Merck Life Science</td><td>O4876</td><td>ATP 合酶抑制剂</td></tr><tr><td>青霉素-链霉素</td><td>Gibco</td><td>15140122</td><td>添加至细胞培养基中的抗生素</td></tr><tr><td>Quant-iT PicoGreen dsDNA 检测试剂盒</td><td>Initrogen</td><td>P7589</td><td>类球体中双链 DNA 的分析</td></tr><tr><td>鱼藤酮</td><td>Merck Life Science</td><td>R8875</td><td>线粒体呼吸链复合体 I 抑制剂</td></tr><tr><td>RPMI 1640</td><td>Gibco</td><td>21875091</td><td>A549、MCF7 和 SK-OV-3 类球体的培养基</td></tr><tr><td>Seahorse Analytics</td><td>Agilent Technologies Inc.</td><td>Build 421</td><td>https://seahorseanalytics.agilent.com</td></tr><tr><td>Seahorse XFe96 类球体 FluxPak</td><td>Agilent Technologies Inc.</td><td>102905-100</td><td>每个 Seahorse XFe96 类球体 FluxPak 包含：6 个 Seahorse XFe96 类球体微孔板（102978-100）、6 个 XFe96 传感器盒和 1 瓶 500 mL Seahorse XF 校准液（100840-000）</td></tr><tr><td>移液管：5、10 和 25 mL</td><td>Greiner Bio-One</td><td>606107; 607107; 760107</td><td>细胞培养耗材</td></tr><tr><td>SK-OV-3</td><td>ECACC</td><td>&amp;nbsp;#HTB-77</td><td>卵巢腺癌细胞系</td></tr><tr><td>丙酮酸钠（100 mM 溶液）</td><td>Merck Life Science</td><td>S8636</td><td>细胞培养生长及 XF 检测培养基的补充剂</td></tr><tr><td>T75 cm&lt;sup&gt;2&lt;/sup&gt; 细胞培养瓶</td><td>Greiner Bio-One</td><td>658175</td><td>用于维持细胞培养的组织培养处理瓶</td></tr><tr><td>TrypLExpress</td><td>Gibco</td><td>12604-021</td><td>细胞解离试剂</td></tr><tr><td>Wave 控制器软件</td><td>Agilent Technologies Inc.</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>宽口移液枪头</td><td>STARLAB International GmbH</td><td>E1011-8400</td><td>具有宽开口的移液枪头，用于类球体操作</td></tr></tbody></table>

利用细胞外通量分析探索单个三维微组织球体的线粒体能量代谢

Exploring Mitochondrial Energy Metabolism of Single 3D Microtissue Spheroids Using Extracellular Flux Analysis

三维（3D）细胞聚集体，称为球状体，已成为 体外 近年来，细胞培养技术不断发展。与将细胞培养为二维单层细胞（2D培养）不同，球形细胞培养能够促进、调控并支持细胞生理结构和特性的形成 体内包括细胞外基质蛋白的表达、细胞信号传导、基因表达、蛋白质合成、分化和增殖。三维培养的重要性已在多个研究领域得到认可，包括肿瘤学、糖尿病、干细胞生物学和组织工程。在过去十年中，已开发出改进的方法用于生成类球体并评估其代谢功能和命运。
已使用XF24胰岛捕获板或XFe96类球体微孔板，通过细胞外通量（XF）分析仪研究三维微组织（如类球体）中的线粒体功能。然而，利用XF技术探测类球体中线粒体能量代谢的具体实验方案及优化方法尚未被详细描述。本文提供了使用XFe96 XF分析仪和类球体微孔板对单个三维类球体进行线粒体能量代谢检测的详细实验方案。通过使用不同癌细胞系，证明了XF技术能够区分不同大小、体积、细胞数量、&#160;DNA含量和类型的三维类球体中的细胞呼吸。
使用寡霉素、BAM15、鱼藤酮和抗霉素A等线粒体效应化合物的最佳浓度，检测三维球状体中线粒体能量代谢的特定参数。本文还讨论了对球状体获得数据进行归一化处理的方法，并阐述了利用XF技术研究球状体代谢时需考虑的诸多因素。本方案将有助于推动先进模型中的相关研究 体外 球状体模型

为获得形态良好且致密的球状体，每种细胞系均针对接种密度和培养时间进行了单独优化（图3。A549、HepG2/C3A和SK-OV-3细胞系最初形成松散的聚集体，在培养7天后才逐渐发育为具有清晰边界的圆形类球体。相比之下，MCF-7细胞在3天内即可形成类球体。所有类球体模型在培养结束后，其类球体体积与初始接种细胞密度之间均表现出明显相关性。类球体的大小和形态随接种密度的优化而得到调控。在所有模型中，随着类球体尺寸增大，其形态完整性和圆度开始下降。各细胞系的接种策略在4 × 103 细胞/孔，用于A549和SK-OV-3细胞；HepG2/C3A细胞的接种密度已在其他研究中优化为1 × 103 细胞/孔，MCF-7 细胞以 4 × 103 所有实验中每孔细胞数/孔。在优化的接种策略下，球状体体积介于 5.46 × 107 µm3 (SK-OV-3) 和 1.45 × 108 µm3 (A549) (图3B</str...

这些实验方案将帮助研究人员利用Seahorse细胞外通量分析技术，探究三维培养的癌细胞系来源类球体中的线粒体能量代谢。

三维（3D）细胞聚集体，称为球状体，近年来已成为体外细胞培养的前沿模型。与传统的二维细胞培养相比……

本方案使研究人员能够探究线粒体能量代谢及无缝球状体，从而可在多种不同细胞系、细胞数量和表型之间，以及在药物发现和癌症研究领域中的药物处理条件下进行比较。本研究提供了一套详细的实验方案，利用三维球状体探究线粒体能量代谢，相较于单层细胞实验，该模型具有更优越的生理相关性。可从透明的球状体中推导出生物学结论，并外推至体内肿瘤，进而识别可能靶向球状体肿瘤代谢的通路。例如，在类球体生长过程中碳水化合物的利用情况。所有数据均使用Seahorse细胞外通量96仪器检测，该仪器非常灵敏。在体外实验中，将类球体在检测板中的位置摆放准确，对于获得单个类球体水平的精确数据至关重要。使用倒置相差显微镜在4倍放大倍数下检查类球体的活性，以确保类球体结构完整、形态正常以及各样本间整体均匀。为水合传感器 cartridge，将约20毫升校准液分装至一个锥形管中。将装有校准液的锥形管置于不含二氧化碳的37摄氏度培养箱中过夜。取出检测试剂盒中的内容。将传感器盒倒置放在工具板旁边。使用多通道P300移液器，向工具板的每个孔中加入200 µL无菌双蒸水。将传感器 cartridge 置于工具板上方。检查每个孔中的水位是否足够高，以浸没传感器探头。将组装好的传感器 cartridge 转移至不含二氧化碳的 37 °C 培养箱中，过夜孵育。为包被球体培养微孔板，使用无菌技术，向球体培养微孔板的每孔中加入 30 微升无菌的 0.1 毫克/毫升多聚-L-赖氨酸溶液。从球体培养微孔板的每孔中吸除溶液，将微孔板倒置，并用力轻敲滤纸以去除残留液体。用 200 微升无菌双蒸水洗涤每孔。最后一次洗涤后，将微孔板倒置并用力轻敲滤纸，以去除残留水分。在后续使用前，让微孔板室温晾干30分钟。按照文中的描述配制XF RPMI培养基。在检测前一小时，将添加了补充物的 XF RPMI 检测培养基预热至 37 摄氏度。同时，将包被好的球形体检测微孔板置于不含二氧化碳的 37 摄氏度培养箱中预热。从空气培养箱中取出装有校准液的锥形管和传感器微孔板。从工具板上取下传感器盒，倒置放在工作台面上。使用P300多通道移液器吸取工具板中的水并弃去。向工具板的每个孔中加入200 µL预热的校准液。将传感器 cartridge 置于工具板上，确保传感器充分浸没在校准液中。将组装好的传感器 cartridge 转移至无二氧化碳、37°C 的培养箱中，直至准备加载端口注射溶液。从培养箱中取出类球体培养板，在显微镜下观察类球体，以确保在进行类球体转移步骤前其结构完整。将180微升预热的检测培养基加入至球体培养板的每个孔中，包括用于背景校正的孔。在直径7厘米的培养皿中加入3毫升检测培养基，使其部分充满。使用多通道移液器（配备宽口移液器吸头，移液体积设定为10至50微升），将球体从96孔培养板转移至培养皿中。将带有宽孔枪头的单通道移液器调至 20 微升体积，小心吸取单个球状体。将枪头直接置于该球状体检测微孔板每个孔的正中央，利用毛细作用使球状体从移液器枪头中脱出。通过显微镜观察，将移液器中的内容物重新吹打回培养皿中，以确认操作过程是否正常。将所有类球体转移至类球体检测微孔板后，将该微孔板置于无二氧化碳、37°C的培养箱中，孵育至少一小时。根据论文所述方法，使用完全补充的预热XF RPMI检测培养基配制每种化合物的工作储备浓度。使用经校准的P100多通道移液器，将每种化合物的工作溶液各20微升加入对应的所有加样孔中。准备分析仪以加载传感器盒。为了获得形态良好且致密的球状体，每种细胞系均针对接种密度和培养时间进行了单独优化。在优化的接种策略下，SK-OV-3 的球状体体积约为 5.46 × 10⁷ µm³，A549 的球状体体积约为 1.45 × 10⁸ µm³。所有类球体类型在初始接种密度与类球体体积之间均呈现线性相关关系。完美的类球体对称性具有1.0的圆度值，偏离1.0则表示圆度降低。对于所有类球体类型，氧消耗率随类球体尺寸增加而升高，并与类球体体积呈线性相关，其中MCF-7类球体的氧消耗率最高，SK-OV-3类球体的最低。MCF-7 类球体在整个实验过程中对溶剂对照无反应。在首次注射 0.5 微克/毫升后，经过五个测量循环，MCF-7 类球体的氧消耗率在加入寡霉素后降低。在 BAM15 作用下，第二次注射前氧消耗率升高。而鱼藤酮联合抗霉素A则降低了线粒体呼吸。本研究采用肿瘤来源的三维球状体，建立了一种精确检测基础线粒体呼吸、ADP磷酸化呼吸、质子漏呼吸、偶联效率、最大呼吸能力及备用呼吸能力的实验方案。所有呼吸化合物均产生了预期的氧气消耗速率动力学曲线，对应所选化合物表现出每分钟每孔20至30皮摩尔氧气的平均稳定基础呼吸速率。在微孔板中类球体的位置以及化合物注射后的测量周期编号，以确保在添加不同化合物之间呼吸速率保持稳定。在利用解偶联剂探究线粒体呼吸能力时，不仅解偶联剂的浓度至关重要，还需关注其在寡霉素存在下实现呼吸解偶联的能力；在研究线粒体能量代谢的实验中，寡霉素通常先于解偶联剂加入。

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提供了一种用于分析细胞线粒体功能的方法描述。该方法生成的线粒体功能谱可在一次实验中测量四个线粒体功能参数：基础呼吸速率、ATP偶联呼吸、质子漏和备用呼吸能力。...

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本方案描述了对由胰腺癌细胞（Patu8902）与活化的胰腺成纤维细胞（PS1）共培养生成的三维球状体进行细胞外通量检测的技术，用于测量两种主要的能量生成途径——糖酵解和线粒体呼吸作用。...

三维球状体中的细胞外通量检测：一种测量胰腺肿瘤球状体代谢活性的方法

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本技术描述了利用细胞外通量分析仪对小鼠离体视网膜组织的耗氧量和细胞外酸化速率进行实时记录的方法。...

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使用细胞外通量分析仪检测原代培养小鼠新生心肌细胞的耗氧率

在本研究中，我们描述了一种改进的实验方案，通过使用重组的perfringolysin...

测量重组Perfringolysin O透化细胞中的线粒体底物通量

本文介绍的方法总结了利用细胞外通量分析仪实时测定非贴壁小鼠造血干细胞和原始祖细胞（HSPCs）的细胞外酸化率（ECAR）和氧消耗率（OCR），以评估其细胞生物能量学的优化实验方案。...

利用细胞外通量分析仪评估小鼠造血干细胞及原始祖细胞的细胞生物能量代谢

我们描述了使用代谢细胞外通量分析仪逐步测定小鼠和人类中性粒细胞以及HL60细胞线粒体呼吸的实验方案。...

中性粒细胞线粒体生物能量谱的实时测量

本文详细描述了从骨髓、脾脏和梗死心脏中提取巨噬细胞的方法，并进一步评估活细胞中代谢通量的实验流程。...

分析 离体 脾脏和心脏巨噬细胞及骨髓单核细胞中的代谢流

本研究建立了一个代谢谱分析平台，该平台整合了三维（3D）胶质瘤类球体与基于细胞外通量分析的成像标准化方法。该方法可更准确地评估肿瘤对药物治疗的代谢反应，并有助于揭示潜在的耐药机制。...

三维脑肿瘤类球体药物筛选中的代谢谱分析进展

本方案描述了一种经济高效的方法，用于进行糖酵解应激测试，以量化原代小鼠小胶质细胞中的代谢重编程。在细胞分离并接受炎症刺激后，使用 freshly prepared、pH...

利用细胞外通量分析法研究原代小胶质细胞中的糖酵解

探索利用Seahorse细胞外通量分析技术检测单个3D肿瘤球体线粒体能量代谢的方法。该方案为癌症研究和药物发现提供了优于单层细胞培养的生理相关模型，可准确评估不同细胞系和药物处理下的代谢变化。

利用细胞外通量分析探索单个三维微组织球体的线粒体能量代谢

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