分离大鼠脂肪组织间充质干细胞以分化为产生胰岛素的细胞

该方案的总体目标是分离和表征红色脂肪组织，干燥的间充质干细胞，并使用简单的方法将它们分化为产生胰岛素的细胞。间充质干细胞已经在遗传学领域找到了方法。它们可以从各种来源分离，例如骨髓，脂肪组织和围产期组织。

他们接受优秀的文化特征。它们是多效的，可以潜在地治疗各种疾病。脂肪组织提供了间充质干细胞的丰富来源。

这些脂肪MSCs可以很容易地从脂肪抽吸物中分离出来，与骨髓等其他来源相比，产量高。它们可以为自体和同种异体移植提供良好的来源。在本视频中，介绍了一种从大鼠附睾脂肪中分离和表征脂肪间充质干细胞的简单方案。

此过程是一种简单高效的隔离方法。分离后，我们将使用简单，相对较短的方案忍受这些脂肪间充质干细胞分化为产生胰岛素的细胞。我们将从通过附睾脂肪的胶原消化来分离脂肪间充质干细胞开始，以获得更强的血管分数。

然后间充质干细胞将以其可塑性粘附，以及CD标记物的表达和分化成多个中胚层谱系来表征。麻醉动物，然后使用宫颈脱位进行安乐死。用70%乙醇喷洒全身，首先切除腹部下部的皮肤和肌肉。

然后用附睾脂肪暴露睾丸。轻轻切除附睾脂肪。注意不要用脂肪切开血管。

在生物安全柜中，使用镊子和手术刀将脂肪组织切成小块。将脂肪组织转移到含有10毫升无菌PBS的离心管中。通过倾斜猎鹰管45秒开始清洗。

然后将管子静置五分钟，分成两层。使用10毫升注射器取出含酶的PBS。重复此洗涤步骤四到五次，直到PBS变清。

洗涤后，将脂肪组织重新悬浮在胶原蛋白溶液中，然后在振荡水浴中孵育，直到组织几乎均匀。之后，将组织胶原混合物涡旋15秒，然后离心5分钟。离心后，您将有三层。

小心地丢弃基质血管部分的上清液。首先小心地丢弃顶部的油层，然后是回声层，而不干扰基质血管级分丸。在无菌BSA中重新悬浮基质血管部分并重新离心五分钟。

整个离心，将完整的DMEM F-12培养基放入25厘米见方的烧瓶中。离心后，弃去上清液并将基质血管沉淀重新悬浮在完整的DMEM F-12培养基中。并转移到培养瓶中。

放入37度5%二氧化碳培养箱中。第二天，取出未附着的细胞，并用新鲜培养基替换培养基。从隔离的第二天开始，成纤维细胞样细胞将开始出现。

然后随着时间的流逝，它们的数量和大小会逐渐增加。通过传代，细胞将变得更加均匀。这些细胞表现出所有间充质干细胞表征标准。

这些细胞使用含有烟酰胺β巯基乙醇和Exendin-4的简单方案分化为产生胰岛素的细胞。在整个分化步骤中，细胞开始失去它们的成纤维细胞形状，我认为簇状形态。当使用产生胰岛素的细胞显示阳性的深红色二硅醌染色时，再使用胰岛素产生细胞表达各种β细胞标志物，如Pdx-1，mafA和胰岛素。

此外，当受到较高葡萄糖浓度的挑战时，诱导的胰岛素产生细胞在上清液中分泌更高水平的胰岛素。我们提供了一个详细的，逐步的方案，用于脂肪间充质干细胞的分离和表征。我们还在这里提供了一种相对简短，简单和有效的方案，用于将脂肪间充质干细胞分化为产生胰岛素的细胞。

这为研究人员进入间充质干细胞领域并研究它们分化为产生胰岛素的细胞提供了门户。