使用荧光团辅助碳水化合物电泳（FACE）方法测定糖原的葡聚糖链长分布

该方法提供了对糖原颗粒结构组织的更好理解。这是一个重要的问题，因为葡聚糖链的种群，即所谓的链长分布，决定了糖原颗粒的物理化学性质。如水溶性。

该技术的一个主要优点是，无论葡聚糖链长短如何，荧光都是恒定的。只有一个APTS分子被葡聚糖结合。因此，荧光强度与葡聚糖链的数量成正比。

辅助毛细管电泳领域适用于解决糖原代谢酶的医学机制。例如，我们可以确定通过将支化酶转移到接受的葡聚糖上的葡聚糖链的聚合程度。反应必须在条件下进行。

因此，必须保护区域免受潮气。将200微升每毫升0.5-2毫克纯化的糖原与200微升pH值为4.8的100醋酸缓冲液混合。加入2微升异淀粉酶和1.5微升支链淀粉酶。

通过上下移液轻轻混合。然后在42摄氏度下在1.5毫升管中孵育16小时。通过在95摄氏度下孵育5分钟来停止反应。

在室温下以16，100倍G'离心5分钟，以沉淀并除去任何不溶性物质。用移液器取下超级维护，并将其转移到新的带注释的试管中。将树脂珠加入空的微沟管中后，通过加入相当于100微升的阴离子阳离子交换树脂珠来脱盐上清液并搅拌。

通过移液收集样品，并将其放入新的带注释的试管中。将样品冷冻干燥。将干燥的样品储存在室温或20摄氏度下。

将干燥的样品与2微升1摩尔氰基硼氢化钠和四氢呋喃以及2微升8氨基1-3-6芘三磺酸混合。在42摄氏度下在黑暗中孵育16小时。向每个样品中加入46微升超纯水。

要将样品稀释50次，将一微升样品加入49微升超纯水中，加入100微升微孔中。在漩涡中彻底混合。将样品放在黑暗中5至10分钟，同时设置面部。

要进行反极性电泳，请设置方法，将注射压力设置为每平方英寸0.5磅力。然后将极性设置为反向模式以进行分离。在超纯水中将N连接的碳水化合物分离缓冲液稀释至三分之一。

在裸熔石英毛细管中以30千伏的稀释缓冲液进行APTS标记的葡聚糖分离。然后设置注射时间，并开始分析。导出分别包含电泳图配置文件和集成数据的 ASC 和 CDF 文件。

打开ASC文件，并根据时间图表绘制相对荧光单位。打开 CDF 文件。继续进行第一次自动积分，并使用谷到谷积分和最小面积调整以下参数。

手动检查并更正任何不正确的集成事件。在4.13至4.67分钟之间观察到的荧光信号来自未反应的APTS。标记的麦芽六糖DP 6的阿留申时间估计为8.49分钟。

根据DP 6的阿留申时间鉴定出APTS标记的牛糖原葡聚糖。在对照样品中未检测到微量游离低聚麦芽糖，其中糖原未与去分枝酶孵育。插图显示葡聚糖链的分离度高达 44 DP。链长分布显示为每个 DP 的 DP 百分比。平均链长是通过对每个百分比链乘以相应的聚合度来计算的。

面部分析表明，最丰富的葡聚糖是麦芽糖和兔肝，牡蛎中的麦芽六糖和牛肝中的麦芽七糖。使用面部分析测定从野生型和突变蓝藻细菌菌株纯化的糖原的链长分布。减法分析是通过从突变体的每个DP的百分比中减去野生型DP的百分比来进行的。

根据每个CLD观察到的最大峰，对来自火连囊虫野生型和突变体的糖原的平均链长分布进行归一化。该技术可以更好地理解与糖原代谢缺陷相关的人类疾病，特别是安徒生病疾病，这是由于异常糖原颗粒在细胞中积累的丰富结果。