利用显微CT扫描分析寄生植物与宿主的相互作用

该协议大大提高了寄生植物组织与将使用显微断层扫描分析的样品中宿主之间的对比度。这里描述的技术加快了通过样品的造影剂灌注过程，允许分析寄生植物和宿主之间形成的特定组织和结构。真空方法非常简单，应该不会带来任何困难。

另一方面，灌注设备的设置可能有点挑战性。但事先练习可能会有所帮助。对于小型非木质样品，可以使用真空方法进行应用。

而丰盛法应用于较大和木质的样品，包括寄主茎或根的一部分。如果使用真空方法，请将样品放入装有对比溶液的小瓶中。然后，将小瓶放入连接到真空泵的真空室或干燥器中。

从小瓶中取下盖子并关闭真空室或干燥器。检查真空室或干燥器上是否有裂缝。打开腔室或干燥器的排气阀以迫使空气排出。

打开泵并等待压力达到大约 20 英寸汞柱或 10 psi。关闭腔室或干燥器排气阀以防止空气重新进入。然后迅速关闭泵。

将样品在真空下放置至少两个小时。如果使用 prorich 方法，请根据样本量选择供应罐。对于小样品，可以使用没有针头的50毫升注射器作为罐。

将透明塑料管的一端连接到供应罐。然后将另一端连接到二通或三通阀。将第二根管子连接到阀门中的其他出口。

将供应罐固定在较高位置，而无需拆卸上一步中设置的设备。关闭三通或二通阀以防止液体离开管道系统，并将对比溶液倒入供应罐中。确保管道系统中没有大的气泡，然后再次关闭阀门，将设备留在原位。

为了制备用于大量造影剂溶液的样品，请将其浸没在液体中并切断宿主茎或根近端的尖端。小心地打开阀门，让对比溶液缓慢流动，并填充连接到罐的塑料管，同时将系统的开口端保持在略微升高的位置，以防止对比溶液溢出。将样品中主体茎或根的近端连接到管道系统的开口端。

让溶液灌注样品至少两个小时或直到溶液积聚在容器内。关闭阀门并小心地将样品与设备断开。通过将样品浸入水中两分钟来洗涤样品。

将样品放在室温下的纸巾中，让多余的水蒸发两到五分钟，而不让样品完全变干。将样品包裹在石蜡薄膜中，避免将薄膜折叠在样品顶部。显微镜CT扫描可用于更好地了解寄生植物的复杂结构及其与宿主的相互作用，以非破坏性的三维方式。

此处描述的协议适用于不同的显微CT系统。但是，设置和参数取决于系统和样本。3D X射线显微镜图像与在光学显微镜下观察到的解剖切片一样有效，可以分析寄生虫宿主界面的组织组织和拓扑结构。

基于由于对比剂吸收差异而导致的亮白色和深灰色色差，可以观察到Haustorium血管核心周围的实质丰度。在横截面上很容易观察到血管核心，因为两条血管链被实质隔开。生长在多肉寄主植物内的内寄生虫Viscum最小值显示出以淀粉形式储存碳水化合物的实质细胞。

碘吸收的差异允许检测由宿主体内内寄生虫形成的错综复杂的皮质链网。Cuscuta Americana和Struthantus marcianus获得的结果有助于说明显微断层扫描方法分别适用于小样品和大样品的便利性。虚拟连续切片Sibelium真菌形态表明，寄主根中的血管分叉成寄生虫块茎，并且两种植物之间的木质部连续性是通过穿孔板通过血管与容器的连接形成的。

这里描述的过程可以与其他技术（例如虚拟分割）结合使用，以提供对寄生植物与其宿主之间连接的三维结构的新见解。该技术为分析寄生植物生物学的不同方面铺平了道路，包括内寄生虫的发展和高寄生虫连接的功能。