机械冲突避免测定测量小鼠疼痛行为

这种方法可以帮助回答有关动物在不同疼痛条件下的有效或动机状态的问题。这是改善临床前研究转化的重要一步。这种技术的主要优点是它相对快速且易于执行，但仍然可以评估影响疼痛相关行为的复杂动机。

首先使用不透明的白色三毫米厚的丙烯酸树脂建造一室的侧壁，地板和天花板。对于正面墙，请使用透明的三毫米厚的丙烯酸。用铰链连接一室的盖子，以便可以很容易地将小鼠放入腔室并从腔室中取出。

然后将自粘发光二极管胶带贴在盖子的内表面上，以提供约4， 800勒克斯的照明。将不透明的丙烯酸板滑入和滑出位置，以将腔室与MCA设备的其余部分关闭。接下来，建造一个270毫米长的无光室二，MCA测试室，在所有侧面使用半透明的深红色丙烯酸，顶部有铰链盖。

然后在腔室的地板上放置一个具有两个毫米孔的13 x 31网格，通过该网格可以突出一系列具有0.5毫米直径尖端的钝探头。通过在探头底板下方放置额外的丙烯酸板来调整探头的高度。使用此方法，将设备配置为零、二和五毫米探头高度。

作为钝化地图针或类似材料的替代品，使用3D打印机文件打印二室的地板和具有可水洗和生物相容性材料（如尼龙12塑料）的探针板。最后，使用四面半透明的深红色丙烯酸构建一个暗室三，其铰链盖类似于第一和第二室。将其放在第一室的另一端，作为第二室中机械探头的黑暗逃生区域。

在安排基线测试的前一天，将小鼠与笼中伴侣一起适应MCA单元5至15分钟，以促进整个设备的社会探索。确保一号腔室中的LED已关闭，第一室和第二室之间的屏障保持打开，并且探头不会突出于第二室的地板上。接下来，设置一个能够在三脚架上录制1080像素素材的摄像机，并具有整个MCA设备的侧向视图。

调整视野，使 MCA 填充录制的图像。录制开始后，在摄像机的现场视图中握住手持式干式擦除板，在视频的开头标注动物测试运行的识别信息。对于第一次运行，将探头高度设置为零，并将要测试的鼠标从其家庭笼子转移到具有屏障门的一室。

启动在录制的素材中可见的计时器。10秒钟后，打开腔室一个LED。在鼠标在点亮的腔室中放置20秒后，取出腔室一和两个腔室之间的屏障。

观察动物两分钟，并在测试过程中用秒表测量潜伏期或停留时间。记录第一个进入第二个房间的延迟，跨越第二个房间的一半以上的延迟，第二个房间的总停留时间，到达第三个房间的延迟，以及两分钟内每个房间的总停留时间，并将它们转换为比例。测试完成后，将鼠标放回其主笼子。

用70%乙醇清洁MCA腔室，并使其完全干燥。在将探针高度设置为零的情况下运行队列中的所有小鼠后，在机械探针底板下方插入一张三毫米的丙烯酸片，并以两毫米的探针高度重复运行。在将探针高度设置为两毫米的所有小鼠运行后，在探针底板下方再插入三毫米的丙烯酸片，并以五毫米的探针高度重复运行。

在测试会话结束时使用消毒剂进行最终清洁。在完整的弗氏佐剂诱导的炎症性疼痛模型中，与基线相比，盐水注射不会改变逃逸潜伏期。注射佐剂的小鼠在注射后四天显示出逃逸潜伏期的显着增加，但只有当探针高度提高到五毫米时。

在测试开始前90分钟接受卡洛芬的小鼠中看不到这种增加的潜伏期。当探针高度设置为5毫米时，神经性疼痛的幸免于神经损伤模型显着增加了逃逸潜伏期与基线相比。通过在测试前90分钟给予阿片类镇痛药丁丙诺啡来防止这种增加。

在神经损伤前没有接受基线MCA测试的小鼠中也观察到逃逸潜伏期增加。在测试前90分钟施用加巴喷丁可以防止5毫米的幸免于神经损伤小鼠的逃逸潜伏期增加。在断裂或铸造模型中，从第一腔室逸出的潜伏期与损伤前的探头高度成比例地增加。

受伤后，潜伏期在零毫米处保持不变，但与基线相比，男性的两毫米和五毫米探针高度以及雌性的五毫米探针高度显着增加。尝试此过程时要记住的最重要的事情是确保所有小鼠都习惯于MCA设备，并在整个研究中保持适当的随机化和盲法。这种方法可以与其他疼痛敏感性措施一起使用，包括von Frey或有条件的地方偏好。