Name: 使用基于菲咯啉的比色法测量组织非血红素铁含量 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-01-31T14:45:00.000+00:00
Duration: 5 min 8 s
Description: 学习使用基于菲咯啉的比色法测量动物组织非血红素铁含量。该方法操作简便、成本低廉，可适配微孔板格式实现高通量分析，适用于多种实验动物模型的铁代谢研究。

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本工作由葡萄牙科学技术基金会（FCT-Fundação para a Ciência e a Tecnologia, I.P.）通过项目编号 UIDB/04293/2020 的国家基金资助。

C57BL/6 小鼠购自商业渠道，铁调素缺失（hepcidin-null）（Hamp1−/−) C57BL/6 背景小鼠8 由 Sophie Vaulont（法国科钦研究所）惠赠。动物饲养于 i3S 动物设施中，环境温度与光照受控，饲养条件为无特定病原体，可自由获取标准啮齿类饲料和水。欧洲海鲈（Dicentrarchus labrax从一家商业渔场购买，并饲养于ICBAS动物实验设施中，环境温度与光照条件受控，每日喂食 随意 使用标准海鲈鱼饲料喂养。所有涉及脊椎动物的实验程序均经i3S动物伦理委员会及国家主管部门Direção-Geral de Alimentação e Veterinária（DGAV）批准。有关商用试剂、设备和动物的信息列于下文 材料清单.
1. 溶液配制
注意：使用无铁玻璃器皿或一次性塑料器皿处理和配制所有试剂与溶液。避免金属实验材料（例如不锈钢刮勺）接触任何试剂或溶液，以防铁污染。确保所有可重复使用的玻璃器皿均不含铁。将器皿用适当的实验室洗涤剂清洗 30–60 分钟，用去离子水冲洗，再在用去离子水按 1:3 稀释的 37% 硝酸溶液中浸泡过夜，然后再次用去离子水冲洗，并使其自然晾干。
<ol>
	<li>酸混合液：在玻璃瓶中加入10 g三氯乙酸至82.2 mL 37%盐酸中，充分溶解后用去离子水定容至100 mL。使用前摇匀。也可仅使用37%盐酸进行组织消化。 
	注意：该溶液在避光的棕色玻璃试剂瓶中储存时，至少可稳定保存2个月。 
	注意：盐酸和三氯乙酸具有腐蚀性，其浓溶液会释放有毒酸性蒸气。操作酸类时必须始终穿戴防护服、耐化学腐蚀手套和防化学飞溅护目镜。避免吸入蒸气，并始终在通风橱内操作酸类。</li>
	<li>饱和乙酸钠溶液：在玻璃瓶中将228 g无水乙酸钠加入400 mL去离子水中，室温下振荡过夜。静置沉淀1天。若无沉淀析出，继续少量添加乙酸钠直至饱和。将溶液储存于玻璃瓶中。</li>
	<li>显色剂：配制1 mL显色剂时，将1 mg 4,7-二苯基-1,10-邻二氮杂菲二磺酸二钠盐溶于500 µL去离子水中，加入10 µL浓（100%）巯基乙酸，充分溶解后用去离子水定容至1 mL。 
	注意：根据需要量配制显色剂。避光保存时，该溶液可稳定保存1个月。</li>
	<li>工作用显色剂（WCR）：取1体积显色剂、5体积饱和乙酸钠溶液和5体积去离子水混合均匀。 
	注意：该溶液应在使用当天新鲜配制。</li>
	<li>铁标准储备液：配制20 mM铁标准储备液时，将111.5 mg羰基铁粉置于含有5,480 µL 37%盐酸的250 mL容量瓶中，室温下静置过夜使其溶解（或置于沸水浴中孵育促进溶解），然后用去离子水定容至100 mL。 
	注意：该标准溶液在密封良好的容器中可长期保存。</li>
	<li>工作用铁标准溶液（WISS）：在500 µL去离子水中加入13.5 µL 37%盐酸，再加入10 µL铁标准储备液，用去离子水定容至1 mL（终浓度为11.169 µg Fe/mL，200 µM；经原子吸收光谱法测定）。 
	注意：该工作溶液应在使用当天新鲜配制。</li>
</ol>
2. 样品干燥
<ol>
	<li>用手术刀切取一块重10-100 mg的组织样品。将样品置于一小块石蜡膜上，使用分析/精密天平准确称重（鲜重）。</li>
	<li>使用塑料镊子将组织样品放入24孔板中（不加盖，以允许水分蒸发），并在65 °C的普通培养箱中干燥48小时。</li>
	<li>或者，可使用实验室微波消解炉干燥组织样品。使用塑料镊子将已称重的组织样品放入无铁的聚四氟乙烯（Teflon）杯中，并在微波炉中进行干燥。根据仪器使用说明书设置操作参数。 
	注意：作为参考，使用特定消解炉（见材料表）干燥肝脏样品的操作参数见表1。</li>
	<li>使用塑料镊子将每份干燥后的组织样品置于分析/精密天平内的一小块石蜡膜上，准确称重（干重）。</li>
</ol>
3. 样品酸消化
<ol>
	<li>使用塑料镊子将每块干燥的组织转移至1.5 mL微量离心管中。</li>
	<li>加入1 mL酸混合液并盖紧微量离心管。以相同方式制备酸空白对照，唯不加组织。 
	注意：酸混合液具有腐蚀性，并释放有毒蒸气。操作时应穿戴防护服、耐化学腐蚀手套和防化学飞溅护目镜。避免吸入其蒸气，且务必在通风橱内操作。</li>
	<li>将微量离心管置于65 °C培养箱中孵育20小时，以消化组织。</li>
	<li>冷却至室温后，使用配有塑料吸头的移液器吸取500 µL澄清（黄色）酸提取液（上清液），转移至新的1.5 mL微量离心管中。若无法获得澄清上清液，可进行短暂离心。 
	注意：上清液酸性极强。操作时应穿戴防护服、耐化学腐蚀手套和防化学飞溅护目镜，并始终在通风橱内进行操作。 
	​说明：此时酸提取液可立即用于比色测定，或于-20 °C冷冻保存以备后续使用。使用前需将冷冻样品完全解冻至室温，并涡旋混匀。</li>
</ol>
4. 显色反应
<ol>
	<li>按照表2中的说明，在1.5 mL离心管中配制显色反应；若需高通量操作，可直接在平底、96孔、透明、未处理的聚苯乙烯微孔板中进行。所有反应（酸空白、标准品和样品）均需至少设置重复两份。</li>
	<li>室温孵育15分钟。</li>
</ol>
5. 吸光度读数
<ol>
	<li>使用分光光度计或酶标仪，在535 nm波长下以去离子水为参比，测定样品的吸光度。酶标板可在加盖或不加盖的条件下读数。若加盖读数，需在测量前去除因酸蒸气在盖上冷凝形成的冷凝水，以避免对吸光度读数造成干扰。 
	​注意：以去离子水（参比）测定的酸空白的光吸收值应低于0.015；标准品和样品的光吸收值应在0.100至1.000之间。对于铁含量极高或极低的样品，可能需要调整酸提取液（上清液）和去离子水（diH2O）的体积（表2）：若吸光度大于1.0，则使用较小体积的样品（上清液）；若吸光度低于0.1，则使用较大体积的上清液。在计算各样品的组织铁含量时，需考虑样品体积（Vsmp）（见步骤6）。</li>
</ol>
6. 组织铁含量的计算
<ol>
	<li>使用以下公式计算非血红素组织铁含量： 
	组织铁含量（µg/g 干组织）= <img alt="分光光度分析化学公式；光学激发测量方法。" src="/files/ftp_upload/63469/63469eq01v2.jpg" data-altupdatedat="1788282455000" data-alt="公式 1"> 
	AT = 测试样品的吸光度 
	AB = 酸空白的吸光度 
	AS = 标准品的吸光度 
	Fes = WISS 铁标准液浓度（µg Fe/mL） 
	W = 干组织重量（g） 
	Vsmp = 样品体积（表 2 中上清液的可变体积，换算为 mL） 
	Vf = 65 °C 过夜孵育后酸混合物的最终体积（相当于酸体积加上干组织体积，单位为 mL；若样品重量差异不显著，可假设为恒定体积 ≈ 1 mL） 
	Vstd = 铁标准液体积（表 2 中 WISS 的体积，换算为 mL） 
	Vrv = 最终反应体积（表 2 中总体积，换算为 mL）</li>
</ol>

<ol><li>Muckenthaler, M. U., Rivella, S., Hentze, M. W., Galy, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+red+carpet+for+iron+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A red carpet for iron metabolism.</a> Cell. 168, 344-361 (2017).</li>
<li>Pagani, A., Nai, A., Silvestri, L., Camaschella, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hepcidin+and+anemia%3A+A+tight+relationship%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Hepcidin and anemia: A tight relationship.</a> Frontiers in Physiology. 10, 1294(2019).</li>
<li>Weiss, G., Ganz, T., Goodnough, L. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anemia+of+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Anemia of inflammation.</a> Blood. 133 (1), 40-50 (2019).</li>
<li>Altamura, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+iron+homeostasis%3A+Lessons+from+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Aspects+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Regulation of iron homeostasis: Lessons from mouse models.</a> Molecular Aspects of Medicine. 75, 100872(2020).</li>
<li>Torrance, J. D., Bothwell, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+technique+for+measuring+storage+iron+concentrations+in+formalinised+liver+samples%5BTitle%5D)+AND+%22South+African+Journal+of+Medical+Sciences%22%5BJournal%5D)">A simple technique for measuring storage iron concentrations in formalinised liver samples.</a> South African Journal of Medical Sciences. 33 (1), 9-11 (1968).</li>
<li>Torrence, J. D., Bothwell, T. H. Tissue iron stores. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aTorrence%2C+JD+%22Methods+in+Haematology%22">Methods in Haematology</a>. Cook, J. D. , Churchill Livingston Press. New York. 104-109 (1980).</li>
<li>Rebouche, C. J., Wilcox, C. L., Widness, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microanalysis+of+non-heme+iron+in+animal+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biochemical+and+Biophysical+Methods%22%5BJournal%5D)">Microanalysis of non-heme iron in animal tissues.</a> Journal of Biochemical and Biophysical Methods. 58 (3), 239-251 (2004).</li>
<li>Lesbordes-Brion, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+disruption+of+the+hepcidin+1+gene+results+in+severe+hemochromatosis%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Targeted disruption of the hepcidin 1 gene results in severe hemochromatosis.</a> Blood. 108, 1402-1405 (2006).</li>
<li>Jumbo-Lucioni, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systems+genetics+analysis+of+body+weight+and+energy+metabolism+traits+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Systems genetics analysis of body weight and energy metabolism traits in Drosophila melanogaster.</a> BMC Genomics. 11, 297(2010).</li>
<li>Mandilaras, K., Pathmanathan, T., Missirlis, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iron+Absorption+in+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Nutrients%22%5BJournal%5D)">Iron Absorption in Drosophila melanogaster.</a> Nutrients. 5, 1622-1647 (2013).</li>
<li>Grundy, M. A., Gorman, N., Sinclair, P. R., Chorney, M. J., Gerhard, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+non-heme+iron+assay+for+animal+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biochemical+and+Biophysical+Methods%22%5BJournal%5D)">High-throughput non-heme iron assay for animal tissues.</a> Journal of Biochemical and Biophysical Methods. 59, 195-200 (2004).</li>
<li>Adrian, W. J., Stevens, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wet+versus+dry+weights+for+heavy+metal+toxicity+determinations+in+duck+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Wildlife+Diseases%22%5BJournal%5D)">Wet versus dry weights for heavy metal toxicity determinations in duck liver.</a> Journal of Wildlife Diseases. 15, 125-126 (1979).</li>
</ol>

作者无利益冲突。

本文提供了一种测定动物组织中非血红素铁含量的实验方案，该方法基于Torrance和Bothwell最初描述的邻菲罗啉比色法5,6，并进行了适当改进。该方法的关键步骤包括：组织样本的干燥；通过酸水解使蛋白质变性并释放无机铁；在还原剂巯基乙酸存在下，将三价铁（Fe3+）还原为二价亚铁状态（Fe2+），随后与邻菲罗啉试剂发生显色反应（生色反应）；测定生成的亚铁离子-邻菲罗啉粉红色复合物的吸光度；最后计算组织中的铁含量。
本研究展示了如何将原有的比色皿法方案改进为基于96孔板的高通量形式，同时不降低检测的灵敏度。值得注意的是，这种改进可显著节省时间，原因如下：1）利用多通道移液器可在96孔板中同时制备更多的显色反应；2）使用酶标仪读取吸光度的速度远快于分光光度计。基于微孔板的检测另一重要优势在于可调整显色反应的体积，从而显著降低试剂成本（尤其是邻菲罗啉试剂）。整个实验流程可在4天内完成。样品干燥（在65 °C烘箱中进行时最长可达4...

铁是一种必需的微量营养素，是参与氧气运输、能量生成和DNA合成等关键生物过程的蛋白质发挥功能所必需的。重要的是，铁过量和铁缺乏均对人体健康造成严重危害，机体组织中的铁水平受到精密调控。异常的膳食铁吸收、缺铁饮食、反复输血以及慢性炎症是全球数十亿人铁相关疾病常见的病因1,2,3。
铁过载或铁缺乏的实验动物模型在推动我们理解系统性和细胞水平铁稳态调控机制方面发挥了重要作用4。尽管过去二十年取得了显著进展，但仍有许多关键方面尚不明确。在未来几年中，准确测定动物组织中的总铁含量仍将是推进铁生物学领域研究的关键步骤。
大多数实验室采用原子吸收光谱法（AAS）、电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）或基于非血红素铁与邻二氮杂菲试剂显色反应的比色法来定量组织中的铁含量。后者基于Torrance和Bothwell在50多年前首次描述的方法5,6。尽管此后有研究开发了以菲啰嗪替代邻二氮杂菲的改进方法7，但邻二氮杂菲仍是文献中引用最广泛的显色试剂。
选择何种方法通常取决于现有的专业知识和基础设施。虽然原子吸收光谱法（AAS）和电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）具有更高的灵敏度，但比色法仍被广泛使用，因其具备以下重要优势：i）排除了红细胞中血红蛋白所含血红素铁的干扰；ii）无需复杂的分析技能或昂贵的仪器设备；iii）原始的比色皿法可改装为微孔板形式，从而提高样本通量。本文所介绍的比色法已被常规用于定量多种实验动物模型（从小鼠、鱼类到果蝇）在铁过载或铁缺乏状态下组织中非血红素铁水平的变化。本文提供了一种使用简单且成熟可靠的比色法测定动物组织中非血红素铁含量的实验方案，大多数实验室均可轻松实施。

<table><tbody><tr><td>96 孔紫外透明板</td><td>Sarstedt</td><td>82.1581.001</td><td></td></tr><tr><td>分析天平</td><td>Kern</td><td>ABJ 220-4M</td><td></td></tr><tr><td>无水乙酸钠</td><td>Merck</td><td>106268</td><td></td></tr><tr><td>邻菲罗啉二磺酸钠（4,7-二苯基-1,10-菲啰啉二磺酸）</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B1375</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6 小鼠（&lt;em&gt;Mus musculus&lt;/em&gt;）</td><td>Charles River Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>羰基铁粉，&amp;ge;99.5%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>44890</td><td></td></tr><tr><td>聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）一次性比色皿</td><td>VWR</td><td>634-0678P</td><td></td></tr><tr><td>双蒸灭菌水</td><td>B. Braun</td><td>0082479E</td><td></td></tr><tr><td>荧光酶标仪</td><td>BioTek Instruments</td><td>FLx800</td><td></td></tr><tr><td>盐酸，37%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>258148</td><td></td></tr><tr><td>微波消解炉及白色聚四氟乙烯消解杯</td><td>CEM</td><td>MDS-2000</td><td></td></tr><tr><td>硝酸</td><td>Fisher Scientific</td><td>15687290</td><td></td></tr><tr><td>烘箱</td><td>Binder</td><td>ED115</td><td></td></tr><tr><td>啮齿类动物饲料</td><td>Harlan Laboratories</td><td>2014S</td><td>含铁量为 175 mg/kg 的 Teklad Global 14% 蛋白啮齿类维持饲料</td></tr><tr><td>海鲈鱼（&lt;em&gt;Dicentrarchus labrax&lt;/em&gt;）</td><td>Sonrionansa</td><td></td><td></td></tr><tr><td>海鲈鱼饲料</td><td>Skretting</td><td>L-2 Alterna 1P</td><td></td></tr><tr><td>单光束紫外-可见分光光度计</td><td>Shimadzu</td><td>UV mini 1240</td><td></td></tr><tr><td>巯基乙酸</td><td>Merck</td><td>100700</td><td></td></tr><tr><td>三氯乙酸</td><td>Merck</td><td>100807</td><td></td></tr></tbody></table>

基于浴铜灵的比色法测定组织非血红素铁含量

Measurement of Tissue Non-Heme Iron Content using a Bathophenanthroline-Based Colorimetric Assay

铁是一种必需的微量营养素。铁过载和铁缺乏均对人体有严重危害，机体组织中的铁水平受到精密调控。利用铁过载或铁缺乏的实验动物模型，对于深入理解系统性和细胞水平铁稳态调控机制起到了关键作用。动物组织总铁含量的测定通常采用原子吸收光谱法，或基于非血红素铁与浴菲咯啉试剂反应的比色法。多年来，比色法已被广泛用于多种动物组织中非血红素铁含量的测定。与原子吸收光谱法不同，该方法可排除红细胞中血红蛋白所含血红素铁的干扰。此外，该方法无需复杂的分析技术或昂贵的仪器设备，因此可在大多数实验室中便捷实施。最后，比色法既可采用比色皿法，也可适配于微孔板格式，从而实现更高通量的样本检测。本文提供了一种成熟可靠的实验方案，适用于多种铁过载或铁缺乏实验动物模型中组织铁水平变化的检测。

比色皿与96孔微孔板的比较 
通过Torrance和Bothwell最初描述的邻菲罗啉试剂反应测定组织非血红素铁含量的方法5,6，依赖于分光光度计进行吸光度读数。因此，显色反应所用体积需与常规分光光度计比色皿的尺寸相匹配。本研究描述了一种方法学改进，即将显色反应直接在96孔微孔板中进行，并使用微孔板读板仪测定吸光度，从而减少试剂用量并提高检测通量。
为比较两种方法的灵敏度，首先配制工作铁标准溶液（WISS）的系列稀释液，并根据指示在1.5 mL离心管或96孔板中进行显色反应。 表 2吸光度分别使用分光光度计（带比色皿）或微孔板读板仪进行测定。两种方法生成的代表性标准曲线如图所示。 图1A. 在两种情况下，线性度均非常高（r2 = 0.9996 且 r2 分别为微孔板和比色皿在所测试的铁浓度范...

本文提供了一种利用简单且成熟的比色法测定动物组织中非血红素铁含量的实验方案，该方法可在大多数实验室中轻松实施。

铁是一种必需的微量元素。铁过载和铁缺乏均对人体有严重危害，组织中的铁含量受到精密调控。

本文提供了一种测定动物组织中非血红素铁含量的实验方案。该方法采用一种简单且成熟的比色法，可在大多数实验室中轻松实施。基于浴铜灵的比色法无需复杂操作技能或昂贵仪器，且可适配于微孔板形式，以提高样品通量并降低成本。本方案适用于检测多种铁过载或铁代谢异常实验动物模型中组织铁水平的变化。首先使用手术刀切取10至100克的组织样本，并将其置于一小片Parafilm上，用分析天平准确称重。使用塑料镊子将组织样本放入24孔板中。在65摄氏度的标准培养箱中干燥48小时。或者，使用镊子将组织样本放入无铁的聚四氟乙烯杯中，并在实验室微波消解炉中进行干燥。将每块干燥的组织置于分析天平上的一小块对苯二甲醛上，准确称重。将每块干燥的组织转移至一个1.5毫升微量离心管中。向管中加入一滴酸混合液，并盖紧管盖。除不加入组织外，其余步骤相同，制备酸空白对照。将试管在65摄氏度下孵育20小时以消化组织。冷却至室温后，使用配有塑料吸头的微量移液器，将500微升澄清的酸性提取液转移至新的1.5毫升微量离心管中。将显色反应直接加入平底96孔透明未处理聚苯乙烯微孔板中。室温孵育15分钟。使用酶标仪在535纳米波长下，以去离子水为参比，测定样品的吸光度。此处展示了基于比色杯和96孔微孔板的比色法测定非血红素铁的实验方法。图中显示了来自六只六个月大雄性黑鼠的55个组织样本（包括肝脏、脾脏、心脏、肺和骨髓）中，比色杯法与微孔板法测定的非血红素铁水平之间的相关性。两种方法之间高度相关，表明基于微孔板的方法是传统比色杯法的有效替代方案。最后，采用基于微孔板的方法对来自相同组织的样本进行酸消化后，测定非血红素铁含量，消化液为盐酸与三氯乙酸的混合液或单独盐酸。高相关性表明三氯乙酸可从酸消化步骤中省略。代表性图像显示了通过基于浴铜灵的比色法测定的雄性C57BL/6野生型小鼠及雄性Hepcidin基因敲除小鼠（C57BL/6遗传背景）肝脏、脾脏、心脏和胰腺中的非血红素铁水平。铁调素的破坏会导致类似血色病的铁沉积表型，表现为严重的肝脏、胰腺和心脏铁蓄积以及脾脏铁耗竭。此处展示了实验性铁调节后幼年雌性欧洲海鲈的肝脏非血红素铁水平。经铁处理的动物其肝脏铁水平显著升高。而贫血仅导致肝脏铁储存量轻度降低。代表性图像显示了使用基于浴铜灵的比色法测定的1月龄果蝇中的非血红素铁水平。结果显示每20只果蝇为一组的非血红素铁含量，或每只果蝇的估计铁含量。以每只果蝇平均重量为0.64毫克计算。在进行此操作时，请务必彻底清洁所有玻璃器皿，并避免金属制实验材料与任何试剂或溶液接触，以防污染。

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医学

使用基于菲咯啉的比色法测量组织非血红素铁含量

在本视频中，我们介绍一种基于比色法测定小鼠肝组织中非血红素铁含量的方法。在还原剂存在下，以邻菲啰啉磺酸钠作为显色底物，可将三价铁还原为可螯合的二价铁。...

基于浴酚蒽啉磺酸盐的比色法检测：一种简单快速测定小鼠肝组织中非血红素铁含量的方法

本视频展示了一种用于评估复杂食物来源中铁生物利用度的体外技术。该技术结合了人体消化过程的模拟与分化后的Caco-2细胞对铁的吸收。细胞内铁蛋白的形成作为细胞摄取铁的标志物。...

Caco-2 细胞生物测定法：一种用于测定复杂食物来源中铁生物可利用性的体外方法

细胞内血红素水平的改变与癌症等常见疾病相关。因此，有必要在多种细胞中测定血红素生物合成水平。本实验方案旨在提供一种快速且灵敏的方法，用于测定和比较不同细胞中血红素合成的水平。...

哺乳动物细胞中血红素合成水平的测定

我们介绍一种利用比色普鲁士蓝法测定植物组织中铁含量的简单且可靠的实验方案。...

一种测定植物中铁含量的比色法

我们介绍了一种简便的检测方法，用于定量分析通过固定化金属亲和层析制备的样品中引入的金属。该方法采用羟基萘酚蓝作为比色金属指示剂，并以紫外-可见分光光度计作为检测器。...

固定化金属亲和色谱中金属浸出的定量分析

该铁氧化还原形态分析方法基于毛细管电泳-电感耦合等离子体质谱，结合样品堆积技术和单次运行中的快速分析。该方法可快速分析多种组织和生物流体样品中的铁氧化还原形态，并提供较低的定量限。...

毛细管电泳-电感耦合等离子体质谱联用（CE-ICP-MS）系统构建用于铁氧化还原形态（Fe(II)、Fe(III)）的定量分析

本文演示了如何制备和施用转铁蛋白结合的非放射性同位素铁，用于小鼠妊娠期间铁转运的研究。同时描述了定量胎盘胎儿各部分中同位素铁含量的方法。...

定量测定小鼠胎盘中的铁转运 在体 内 使用非放射性铁同位素

用于评估铁（Fe）生物可利用度的Caco-2细胞生物测定法是一种经济且用途广泛的手段，可用于评估来自食物、食品制品、补充剂、膳食乃至饮食方案中铁的生物可利用度。该方法已通过与人体研究的充分验证，代表了铁生物可利用性研究领域的先进水平。...

测定食物铁生物利用度的Caco-2细胞生物测定法

我们描述了一种荧光检测方法，可快速且低成本地验证新化合物是否具有螯合铁的能力。该方法通过检测化合物能否竞争性地取代弱铁螯合荧光探针钙黄绿素（Calcein）与铁的结合，从而在发生螯合反应时产生可量化的荧光增强信号。...

一种可量化且低成本的无细胞荧光方法，用于验证新型化合物的铁螯合能力

本方案介绍了评估组织（尤其是脑组织）中铁沉积分布和含量的方法。方案详细说明了样本制备、普鲁士蓝/DAB染色、图像采集和数据分析的操作步骤。...

通过普鲁士蓝/DAB染色法评估5xFAD小鼠脑内铁沉积

本研究阐述了设计和开发一种E-Eye-Enable即时检测（POCT）设备的实验方案，用于检测环境样品、生物样品以及食品和饮料中的铁（Fe）、铬（Cr）、砷（As）和氟（F）。已检测近2000个样品，检测结果与金标准技术相符。...

基于TD-DFT引导的先进E-Eye传感技术用于环境、生物及食品样品中Fe、Cr、F和As的现场定量检测

学习使用基于菲咯啉的比色法测量动物组织非血红素铁含量。该方法操作简便、成本低廉，可适配微孔板格式实现高通量分析，适用于多种实验动物模型的铁代谢研究。

基于浴铜灵的比色法测定组织非血红素铁含量

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