一种用于研究机械应力在克罗恩病发病机制中作用的TNBS诱导啮齿类动物模型

因此，在我们的实验方案中，经结肠灌注TNBS会在灌注部位引起透壁性炎症，并导致炎症近端肠段的机械性扩张。这一过程模拟了狭窄型克罗恩病。由于近端肠段虽存在机械性扩张但无明显炎症表现，通过比较近端肠段与炎症部位，有助于判断机械应力是否在克罗恩结肠炎的发生中起作用。

以往的研究仅关注炎症部位。本方案通过在模型的不同部位进行操作，强调了机械应力在克罗恩病，特别是狭窄型克罗恩病中的关键作用。首先，将大鼠仰卧位放置于麻醉台上。

为诱导结肠炎，将医用级开放式聚氨酯导管经肛门插入，深度约为距肛缘七至八厘米，缓慢注入TNBS。对照组假手术大鼠给予250微升生理盐水。为促进TNBS或生理盐水在结肠内的分布并防止外溢，将大鼠保持仰卧位，头部向下倾斜约30度，同时闭合肛门持续两分钟。

使用外科手术剪和镊子打开大鼠腹部。仔细分离并取出肛管上方的整个结肠，立即将结肠转移至预冷的1× HBSS缓冲液中。在缓冲液中将结肠展直，并用直尺测量结肠长度。

取一根尼龙线，围绕结肠测量对照组和TNBS处理组大鼠结肠节段的外部周长。取全层组织用于组织学检查。沿肠系膜缘将结肠剪开，并用HBSS缓冲液彻底清洗结肠。

根据预设标准并稍作修改，对结肠进行宏观炎症评分。从经TNBS处理的大鼠结肠组织中采集P、I和D三个部位的样本。P部位位于炎症部位近端（口腔侧）2至3厘米处。I部位为TNBS灌注的炎症部位，通常距离结肠末端4至6厘米。

最后，D部位位于炎症部位口侧边缘远端一至两厘米处。在大鼠中经结肠内灌注TNBS可诱导出约两厘米长的局限性透壁性炎症，表现为远端结肠灌注部位肠壁增厚和管腔狭窄。TNBS灌注部位称为I部位。由于透壁性炎症和狭窄的存在，I部位同时存在炎症和机械应力。I部位的狭窄导致TNBS灌注部位近端肠段显著管腔扩张，该区域称为P部位。与假手术对照组结肠相比，P部位和I部位的结肠周长均显著增加。

在机械性扩张的情况下，P部位未表现出明显的炎症。相反，TNBS灌注部位远端的结肠段（称为D部位）既无炎症，也无机械性扩张。与假手术对照组相比，TNBS处理组大鼠I部位的炎症宏观评分显著升高，而结肠炎大鼠P和D部位则无此现象。

与假手术组相比，P点和D点的炎症评分未见显著升高。因此，在该模型中不仅需要研究I点，还应研究P点和D点，这有助于认识机械应力在克罗恩病中的致病意义。为了进一步确定机械应力是否为肠道炎症的致病因素，还可以尝试通过仅给予动物液体饮食来解除机械性扩张，观察其是否有助于改善炎症和肠道功能。