Name: 一种改进的袖带技术用于小鼠颈椎异位心脏移植模型 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-02-07T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 45 s
Description: 学习改良袖套技术用于小鼠颈椎异位心脏移植手术，简化血管吻合操作并提高移植物存活率。该方法有助于研究心脏移植排斥反应机制，为改善患者长期生存提供实验基础。

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本工作由国家自然科学基金（81870304）资助李俊。

所有动物实验均按照美国国家研究委员会（US）2011年发布的《实验动物护理与使用指南》（第八版）的规定进行。涉及动物实验的操作均已获得中国重庆大学附属肿瘤医院动物护理与使用委员会的批准。&#160;实验采用来自商业来源（见材料表）的雄性BALB/c和C57BL/6小鼠，体重为20–30 g，用于同种异体心脏移植研究。C57BL/6小鼠作为供体及同基因型受体，而BALB/c小鼠则作为同种异体受体。实验方案示意图见图1。 
注意：&#160;手术过程中使用的所有物品，包括手术器械和溶液，均为无菌。手术操作遵循&#160;无菌操作技术的原则。
1. 受体操作步骤
<ol>
	<li>诱导全身麻醉 通过 通过连接通风橱的15 x 10 x 10 cm诱导室吸入5%异氟烷（见 材料表).</li>
	<li>将受体小鼠固定在带有加热垫的手术台上，通过覆盖口鼻的面罩持续吸入2%异氟烷以维持麻醉状态。 
	&#8203;注意：呼吸频率和节律减慢、角膜反射消失以及脚趾屈曲反射缺失表明麻醉有效。</li>
	<li>剃除毛发后，用聚维酮碘溶液和酒精交替进行三次消毒：先用聚维酮碘擦洗，再用酒精脱碘。然后，&#160;切开皮肤&#160;1.5-2 厘米&#160;从右侧下颌角平行于颈中线至尾端。</li>
	<li>使用电凝器和显微镊分离右侧颈外静脉约1厘米。用无创微血管夹夹闭近端，远端结扎。</li>
	<li>将静脉远端穿过一个22 G聚氨酯倒刺套管（参见 材料表）并带有斜面末端和浅表沟槽。使用微血管夹具夹住袖带手柄以固定血管。</li>
	<li>移除远端的8-0结扎缝线，将管腔翻转至内侧倒钩所钩住的套管上，外翻固定，并用10-0外科缝线在表面的凹槽处缝合固定。</li>
	<li>切除右侧舌下腺以形成容纳心脏移植物的窝槽，保留下颌下腺右叶及右侧胸锁乳突肌。</li>
	<li>用显微镊分离右侧颈总动脉约1厘米，在近端用无创微血管夹夹闭动脉；在远端结扎并切断动脉。</li>
	<li>将动脉远端穿过一个26 G聚氨酯带刺套管（参见 材料表）并带有斜面末端和表面凹槽。使用微血管夹具通过套管的手柄固定动脉。</li>
	<li>移除远端结扎缝线，将管腔翻转至套管外侧，并用10-0外科缝线通过浅层倒刺和凹槽固定。</li>
	<li>制备受体血管后，在血管上滴加100 IU/mL肝素化生理盐水，以防止血栓形成。用无菌湿盐水纱布覆盖颈部切口，以备后续移植使用。</li>
</ol>
2. 供体操作步骤
<ol>
	<li>对供体小鼠采用相同的麻醉程序（步骤 1.1）。</li>
	<li>使用电动剃刀剃除腹部毛发，并用聚维酮碘溶液和酒精交替擦拭三遍，对术区进行消毒。</li>
	<li>沿腹中线从耻骨联合至剑突下切开腹部（2–3 cm），并用牵开器扩大切口区域。</li>
	<li>使用电凝器和显微镊子游离腹主动脉和下腔静脉约 1 cm，然后通过下腔静脉注射 1 mL 含 250 IU/mL 肝素的生理盐水进行肝素化处理。随后，切除腹主动脉和下腔静脉。</li>
	<li>使用手术剪沿两侧腋前线剪开胸腔，分离胸壁。用 8-0 手术缝线结扎上腔静脉。</li>
	<li>将头皮针插入膈肌上方的下腔静脉，然后从该处注入含 100 IU/mL 肝素的冰冻生理盐水，灌注供体心脏直至血液颜色消失。</li>
	<li>使用头皮针从主动脉弓注入 2–3 mL 含 100 IU/mL 肝素的冰冻组氨酸-色氨酸-酮戊二酸盐（HTK）溶液（见材料表），对供体心肌进行再灌注保护。平均热缺血时间为 5 分钟。</li>
	<li>用 5-0 手术缝线结扎上腔静脉、下腔静脉&#160;和肺静脉&#160;。在供体主动脉和肺动脉分叉前将其游离并切断。随后，切断上腔静脉、下腔静脉&#160;和肺静脉&#160;，取出供体心脏。</li>
</ol>
3. 植入
<ol>
	<li>将供体心脏以倒置位置植入受体小鼠的颈部皮袋中。</li>
	<li>将翻转的受体颈外静脉套入供体肺动脉腔内，完成供体肺动脉与受体颈外静脉的端对端吻合。利用套管表面的凹槽，以10-0外科缝线结扎固定吻合口。</li>
	<li>采用类似方法完成供体主动脉与受体颈总动脉的端对端吻合。</li>
	<li>依次松开颈外静脉和颈总动脉上的无创微血管夹，恢复供体心脏的血液灌注。平均冷缺血时间为15分钟。</li>
	<li>固定心脏移植物，并妥善缝合，防止移植物扭曲。</li>
	<li>使用5-0单丝聚酰胺缝线连续缝合关闭颈部切口（参见材料表）。 
	注意：待伤口完全愈合后拆除缝线。&#160;</li>
	<li>将受体小鼠置于温暖、干燥且洁净的笼内，直至其从麻醉中恢复。 
	注意：恢复时间通常为5–10分钟。</li>
	<li>术后48小时内，每6小时对受体小鼠皮下注射一次布托啡诺（0.05 mg/kg），以提供镇痛。 
	注意：本研究已优化镇痛剂量。然而，若根据机构动物使用指南发现动物有疼痛迹象，可延长或调整镇痛方案。&#160;&#160;</li>
</ol>

<ol><li>Khush, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+International+thoracic+organ+transplant+registry+of+the+international+society+for+heart+and+lung+transplantation%3A+Thirty-sixth+adult+heart+transplantation+report+-+2019%3B+focus+theme%3A+Donor+and+recipient+size+match%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Heart+and+Lung+Transplantation%22%5BJournal%5D)">The International thoracic organ transplant registry of the international society for heart and lung transplantation: Thirty-sixth adult heart transplantation report - 2019; focus theme: Donor and recipient size match.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 38 (10), 1056-1066 (2019).</li>
<li>Stehlik, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+registry+of+the+international+society+for+heart+and+lung+transplantation%3A+29th+official+adult+heart+transplant+report--2012%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Heart+and+Lung+Transplantation%22%5BJournal%5D)">The registry of the international society for heart and lung transplantation: 29th official adult heart transplant report--2012.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 31 (10), 1052-1064 (2012).</li>
<li>Huang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+intrathymic+and+intravenous+injection+of+mesenchymal+stem+cells+can+prolong+the+survival+of+rat+cardiac+allograft+associated+with+decrease+in+miR-155+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Combined intrathymic and intravenous injection of mesenchymal stem cells can prolong the survival of rat cardiac allograft associated with decrease in miR-155 expression.</a> Journal of Surgical Research. 185 (2), 896-903 (2013).</li>
<li>Eggenhofer, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Features+of+synergism+between+mesenchymal+stem+cells+and+immunosuppressive+drugs+in+a+murine+heart+transplantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Immunology%22%5BJournal%5D)">Features of synergism between mesenchymal stem cells and immunosuppressive drugs in a murine heart transplantation model.</a> Transplant Immunology. 25 (2-3), 141-147 (2011).</li>
<li>Sula Karreci, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brief+treatment+with+a+highly+selective+immunoproteasome+inhibitor+promotes+long-term+cardiac+allograft+acceptance+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Brief treatment with a highly selective immunoproteasome inhibitor promotes long-term cardiac allograft acceptance in mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (52), 8425-8432 (2016).</li>
<li>Liu, F., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+heart+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Heterotopic heart transplantation in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. 6, 238(2007).</li>
<li>Lin, C. M., Gill, R. G., Mehrad, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+natural+killer+cell+activating+receptor%2C+NKG2D%2C+is+critical+to+antibody-dependent+chronic+rejection+in+heart+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">The natural killer cell activating receptor, NKG2D, is critical to antibody-dependent chronic rejection in heart transplantation.</a> American Journal of Transplantation. 21 (11), 3550-3560 (2021).</li>
<li>Ito, H., Hamano, K., Fukumoto, T., Wood, K. J., Esato, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bidirectional+blockade+of+CD4+and+major+histocompatibility+complex+class+II+molecules%3A+An+effective+immunosuppressive+treatment+in+the+mouse+heart+transplantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Heart+and+Lung+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Bidirectional blockade of CD4 and major histocompatibility complex class II molecules: An effective immunosuppressive treatment in the mouse heart transplantation model.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 17 (5), 460-469 (1998).</li>
<li>Zhou, Y. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+rejection+correlates+with+expression+of+major+histocompatibility+complex+class+I+antigens+on+peripheral+blood+CD3%28%2B%29CD8%28%2B%29+T-lymphocytes+following+skin+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+International+Medical+Research%22%5BJournal%5D)">Acute rejection correlates with expression of major histocompatibility complex class I antigens on peripheral blood CD3(+)CD8(+) T-lymphocytes following skin transplantation in mice.</a> Journal of International Medical Research. 39 (2), 480-487 (2011).</li>
<li>Oberhuber, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+cervical+heart+transplantation+model+using+a+modified+cuff+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique.</a> Journal of Visualized Experiments. (92), e50753(2014).</li>
<li>Cui, D., Tan, C., Liu, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+alternative+technique+of+arterial+anastomosis+in+mouse+heart+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Transplantation%22%5BJournal%5D)">An alternative technique of arterial anastomosis in mouse heart transplantation.</a> Clinical Transplantation. 32 (6), 13264(2018).</li>
<li>Plenter, R. J., Zamora, M. R., Grazia, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Four+decades+of+vascularized+heterotopic+cardiac+transplantation+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigative+Surgery%22%5BJournal%5D)">Four decades of vascularized heterotopic cardiac transplantation in the mouse.</a> Journal of Investigative Surgery. 26 (4), 223-228 (2013).</li>
<li>Fang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+two-stitch+sleeve+technique+for+arterial+anastomosis+of+cervical+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Translational+Research%22%5BJournal%5D)">A simplified two-stitch sleeve technique for arterial anastomosis of cervical heterotopic cardiac transplantation in mice.</a> American Journal of Translational Research. 5 (5), 521-529 (2013).</li>
<li>Matsuura, A., Abe, T., Yasuura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simplified+mouse+cervical+heart+transplantation+using+a+cuff+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Simplified mouse cervical heart transplantation using a cuff technique.</a> Transplantation. 51 (4), 896-898 (1991).</li>
<li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primarily+vascularized+allografts+of+hearts+in+mice.+The+role+of+H-2D%2C+H-2K%2C+and+non-H-2+antigens+in+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection.</a> Transplantation. 16 (4), 343-350 (1973).</li>
<li>Fensterer, T. F., Miller, C. J., Perez-Abadia, G., Maldonado, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+cuff+design+to+facilitate+anastomosis+of+small+vessels+during+cervical+heterotopic+heart+transplantation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Novel cuff design to facilitate anastomosis of small vessels during cervical heterotopic heart transplantation in rats.</a> Comparative Medicine. 64 (4), 293-299 (2014).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

小鼠心脏移植模型有助于研究心脏移植后的排斥反应机制，从而推动开发独特的方法以提高心脏同种异体移植物受者的长期存活率。然而，小鼠心脏移植是一项复杂且具有挑战性的操作，尤其在血管吻合方面，需要高水平的显微外科技术11,12,13。小鼠腹部异位心脏移植模型通过将供体主动脉和肺动脉分别与受体主动脉和下腔静脉进行缝合吻合来完成。在此手术过程中，需要阻断受体的主动脉和下腔静脉，因此可能导致受体小鼠下半身缺血以及下腔静脉血栓形成，增加其致残率和死亡率。为了降低移植过程中血管吻合的难度，Matsuura 等人于1991年首次引入了采用套管技术的小鼠颈部心脏移植模型14。该模型通过套管结扎实现血管外翻的套袖样吻合，提高了吻合效率。与腹部心脏移植模型中使用缝线进行血管吻合相比，该方法降低了术后出血的发生概率。因此，吻合效率的提升缩短了心肌缺血时间，提高了心脏移植物的存活率。此外，与腹部移植相比，供体心脏的颈部植入不会中断受体...

心脏移植已成为终末期心力衰竭的标准治疗方法。每年在全球国际心肺移植学会注册机构中进行的心脏移植手术超过5500例。在同种异体心脏移植受者中，术后1年排斥反应发生率仍&#62;10%，而术后3年排斥反应发生率上升至36%1,2。然而，目前尚缺乏针对心脏移植物排斥反应的有效预防性治疗手段。因此，有必要开展动物模型研究，以阐明心脏移植物免疫学与病理学排斥反应背后的生理机制。此类研究将有助于发现新的治疗靶点，推动高效药物的开发，从而预防心脏移植物排斥反应，并提高这些患者群体的生存率。
最近，在小鼠异位心脏移植模型研究中提出了一些心脏移植物排斥反应的潜在免疫学和病理生理学机制3,4,5。因此，由于小鼠与人类基因具有高度同源性，小鼠异位心脏移植已成为研究心脏移植后心脏移植物免疫排斥和病理损伤机制的理想临床前模型。目前普遍采用的方法是在受体小鼠腹腔内通过缝合技术将供体心脏的主动脉和下腔静脉分别与受体的主动脉和下腔静脉进行端对端吻合，以模拟正常的人体解剖结构。然而，该手术方法可能干扰受体下半身的血液供应和静脉回流6。因此，本文提出一种改良的小鼠异位心脏移植手术方法。
采用改良套管技术，通过端对端颈部分吻合将供体心脏与受体的颈总动脉和颈静脉连接。该改良手术方法提高了操作可行性，并确保了心脏移植物的存活，同时不影响下肢的血液供应和静脉回流。

<table><tbody><tr><td>&amp;nbsp;5-0 聚酰胺单丝缝合线</td><td>B.Braun Medical Inc.</td><td>C3090954</td><td></td></tr><tr><td>&amp;nbsp;8-0 聚酰胺单丝缝合线</td><td>B.Braun Medical Inc.</td><td>C2090880</td><td></td></tr><tr><td>10-0 聚酰胺单丝缝合线</td><td>B.Braun Medical Inc.</td><td>G0090781</td><td></td></tr><tr><td>22 G 聚氨酯套管</td><td>B.Braun Medical Inc.</td><td>4251628-02</td><td></td></tr><tr><td>26 G 聚氨酯套管</td><td>苏州林华医疗器械有限公司</td><td>REF383713</td><td></td></tr><tr><td>麻醉诱导舱</td><td>瑞沃德生命科学有限公司</td><td>V100</td><td></td></tr><tr><td>无创微血管夹</td><td>碧云天</td><td>FS500</td><td></td></tr><tr><td>BALB/c 和 C57BL/6 小鼠（20&amp;ndash;30 g）</td><td>陆军军医大学实验动物中心（中国重庆）</td><td></td><td></td></tr><tr><td>丁丙诺啡</td><td>US Biological Life Sciences</td><td>352004</td><td></td></tr><tr><td>电凝器</td><td>广州润迈医疗设备有限公司</td><td>ZJ1099</td><td></td></tr><tr><td>纱布</td><td>河南飘安集团有限公司</td><td>10210402</td><td></td></tr><tr><td>加热垫</td><td>广州德威生物科技有限公司</td><td>DK0032</td><td></td></tr><tr><td>肝素</td><td>华北制药股份有限公司</td><td>2101131-2</td><td></td></tr><tr><td>HTK 溶液</td><td>深圳长盈医药有限公司</td><td>YZB/闽8263-2013</td><td></td></tr><tr><td>注射器（10 mL）</td><td>山东威高集团医用高分子制品股份有限公司</td><td>20211001</td><td></td></tr><tr><td>异氟烷</td><td>瑞沃德生命科学有限公司</td><td>21070201</td><td></td></tr><tr><td>生理盐水</td><td>西南药业股份有限公司</td><td>H50021610</td><td></td></tr><tr><td>头皮针</td><td>宏宇医疗集团</td><td>20183150210</td><td></td></tr><tr><td>剃毛器</td><td>碧云天</td><td>FS600</td><td></td></tr><tr><td>小动物麻醉机</td><td>瑞沃德生命科学有限公司</td><td>R500</td><td></td></tr><tr><td>手术显微镜</td><td>北京天诺翔仪器有限公司</td><td>SZX-6745</td><td></td></tr><tr><td>棉签</td><td>渝北医疗器械材料有限公司</td><td>21080274</td><td></td></tr></tbody></table>

一种改良的套管法小鼠颈部异位心脏移植模型

A Modified Cuff Technique for Mouse Cervical Heterotopic Heart Transplantation Model

心脏同种异体移植物排斥反应限制了心脏移植术后患者的长期生存。由于小鼠与人类基因具有高度同源性，小鼠心脏移植模型是临床前研究中探讨心脏同种异体移植物排斥机制的理想模型。深入了解该机制将有助于开发独特策略，以改善接受心脏同种异体移植物治疗患者的长期生存率。在小鼠模型中，通常采用端对端&#160;吻合的方式，通过缝合将供体心脏与受体的腹主动脉和下腔静脉连接。而在本模型中，采用改良套管技术，将供体心脏通过端对端吻合连接至受体的颈动脉和颈外静脉。该移植手术无需缝合，因此可能提高受体的存活率，因为不会干扰下肢的血液供应和静脉回流。该小鼠模型将有助于研究心脏同种异体移植物免疫学及病理学（急性和慢性）排斥反应的潜在机制。

在小鼠颈部异位心脏移植模型中，受体小鼠的存活率约为95.2%（21只小鼠中有20只存活）。主要死亡原因为术后出血。移植供体心脏存活的指标表现为心跳快速且节律规则。
在此模型中，C57BL/6 和 BALB/c 小鼠分别为 MHC（H-2b）和 MHC（H-2d）类型7,8。这两种品系在 H-2 上存在差异，从而导致急性 T 细胞介导的排斥反应9。在所有心脏同种异体移植物中，62.5% 在移植后 7 天内因触诊无法感知心跳而丧失。所有心脏同种异体移植物在移植后 8 天内均完全丧失。相比之下，所有同基因型心脏移植均存活超过 4 周（图 2）。存活超过 4 周的小鼠通过吸入 CO2&#160;实施安乐死。
<p class="jove_content biglegend" fo:keep-together.within-page="1"...

在本实验方案中，采用小鼠心脏移植模型来研究心脏同种异体移植物排斥反应的机制。在此异位心脏移植模型中，通过改良的套管技术进行颈部端对端吻合式心脏移植，可提高手术效率，并确保心脏移植物的存活。

心脏移植物排斥反应限制了心脏移植术后患者的长期生存。小鼠心脏移植模型是……

小鼠心脏移植模型有助于研究心脏同种移植物的免疫反应及旁矢状面排斥机制。这些研究将有助于开发独特的方法，以提高患者的长期生存率。该颈部移植手术采用套管法，无需缝合即可完成。因此，该方法降低了血管吻合的复杂性，并避免了对下肢血液供应和静脉回流的干扰。本次操作将由本实验室的外科医生Dr.Xin Mao进行演示。首先，将受体小鼠置于手术台上的加热垫上，并剃除手术区域的毛发。消毒手术区域后，从右侧下颌角至尾端沿颈部正中线做一条1.5至2厘米的切口。使用电凝器和显微镊子游离约1厘米长的右侧颈外静脉。用无创微血管夹夹闭静脉近端，并在远端结扎。将静脉远端穿过带有斜面端和浅表沟槽的22号聚氨酯带刺套管。使用套管手柄并通过微血管夹固定静脉。拆除远端的8-0结扎缝线，将管腔翻转至套管外，利用套管内侧的浅表倒刺钩住并外翻，然后用10-0外科缝线在套管表面的沟槽内固定。切除右侧舌下腺，形成用于植入心脏移植物的凹窝，并保留下颌下腺的右叶及右侧胸锁乳突肌。使用显微镊子游离右侧颈总动脉约一厘米，并在近端用无创性微血管夹夹闭该动脉。结扎并切断该动脉。将动脉远端穿过带有斜面端和表面沟槽的26号聚氨酯带刺套管。使用微血管夹通过套管的手柄固定动脉。移除远端的结扎缝线，将管腔翻转覆盖在套管上，并用10-0外科缝线固定于浅层刺状突起和沟槽处。制备受体血管后，在血管上滴加含有100国际单位/毫升肝素的生理盐水，以防止血栓形成。用湿的生理盐水纱布覆盖颈部切口，以备后续移植手术使用。使用电动剃须刀剃除腹部毛发。消毒手术区域后，从耻骨联合至剑突下沿正中线切开腹腔，并使用牵开器扩大切口区域。使用电凝器和显微镊子游离腹主动脉和下腔静脉各约1厘米，然后通过下腔静脉注射1毫升生理盐水（含250国际单位/毫升肝素）进行肝素化处理。切除腹主动脉和下腔静脉。使用手术剪沿双侧前腋线切开胸廓，分离胸壁，然后用8-0手术缝线结扎上腔静脉。将头皮针插入肝上段下腔静脉，随后经头皮针从肝上段下腔静脉注入含100单位/毫升肝素的冰生理盐水，灌注供体心脏，直至流出液颜色变浅。从主动脉弓灌注2至3毫升冰冻的组氨酸-色氨酸-酮戊二酸盐溶液，以保护供体心肌。使用5-0外科缝线结扎上腔静脉、下腔静脉和肺静脉。在分支前游离并切断供体主动脉和肺动脉。然后切断上、下腔静脉和肺静脉，以摘除供体心脏。将供体心脏以倒置位置植入受体小鼠的颈部皮下囊袋中。将翻转的受体颈静脉套管拉入供体肺动脉管腔内，完成端对端吻合。利用表面的凹槽，通过10-0外科缝线将套管结扎，以固定吻合口。采用类似方法将供体主动脉与受体颈动脉进行端对端吻合。随后依次松开颈静脉的无创微血管夹，再松开颈动脉的夹子，以恢复供体心脏的血液灌注。固定心脏移植物并妥善缝合，以防止移植物扭曲。使用5-0单丝聚酰胺缝线连续缝合关闭颈部切口。采用小鼠颈部异位心脏移植模型，受体小鼠的存活率约为95.2%。所有心脏同种异体移植物在移植后8天内均发生排斥丢失。相比之下，所有同基因型心脏移植均存活超过四周。采用带凹槽和套管的设计可更好地固定外翻的血管，避免对血管进行重复操作。本手术中改良的套管法血管吻合技术也可应用于其他器官移植动物模型中的不同吻合术。

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Medicine

医学

一种改进的袖带技术用于小鼠颈椎异位心脏移植模型

小鼠异位心脏移植模型已被众多研究者证实为研究排斥反应和免疫应答机制的重要方法。然而，相关技术操作仍具挑战性。通过改进标准技术，我们已成功完成超过1000例移植手术。...

小鼠异位心脏移植

小鼠颈部心脏移植模型非常适合用于免疫学以及缺血再灌注损伤的研究。我们采用了一种无缝线套管技术对该手术方法进行了改良，并利用该技术成功完成了1000多例移植手术。<br...

采用改良套管技术的小鼠颈部心脏移植模型

本文演示了一种小鼠心脏异位移植的显微外科技术，包括简化的供体心脏获取和受体血管吻合方法。...

一种改良的小鼠异位心脏移植方法

套管技术通过避免对小血管进行技术难度较高的缝合吻合，从而缩短并简化了小鼠异位颈部心脏移植模型的建立过程。本视频论文中展示的技术细节应有助于研究人员在其实验室中成功建立该模型。...

小鼠异位颈部心脏移植

本文介绍了一种在小鼠颈部分异位主动脉移植模型中应用无缝合套管技术的小鼠异位主动脉移植方案。该模型可用于研究慢性移植物血管病变（CAV）的潜在病理机制，并有助于评估新的治疗药物以预防其发生。...

采用改良无缝合套管技术的小鼠颈动脉主动脉移植模型

我们介绍一种内管辅助的套管技术，用于小鼠颈部异位心脏移植，以帮助将血管外翻覆盖在套管上。我们发现，两名经验丰富的外科医生相互配合可显著缩短手术时间。...

小鼠心脏移植袖套法的技术优化

介绍了一种在异位腹部小鼠心脏移植模型中进行血路重建的新技术。...

腹部小鼠心脏移植模型中的血液回路重建

小鼠心脏移植模型是研究移植免疫学的重要研究工具。本方案详细介绍了小鼠异位颈部心脏移植技术，该技术涉及在受体的颈总动脉和供体的肺动脉干上放置套管，以实现层流血流。...

利用血管套环的小鼠异位颈部心脏移植

本方案介绍了一种无需使用套管、基于缝合的鼠类颈部异位心脏移植技术，旨在通过生理条件下最小化异物材料干扰，可靠地植入第二个异位心脏移植物，以评估供体特异性免疫耐受。...

用于评估小鼠供体特异性免疫耐受的免套管缝合式颈部异位心脏移植模型

本方案介绍了一种简化的、端对侧缝合吻合技术，用于小鼠颈部心脏移植，为研究移植免疫学提供了一个稳定且可重复的模型。...

采用端侧吻合技术进行颈部异位小鼠心脏移植以研究移植免疫学

学习改良袖套技术用于小鼠颈椎异位心脏移植手术，简化血管吻合操作并提高移植物存活率。该方法有助于研究心脏移植排斥反应机制，为改善患者长期生存提供实验基础。

一种改良的套管法小鼠颈部异位心脏移植模型

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