线粒体内膜对 Na⁺ 的敏感性揭示了功能型辅酶Q池的部分区室化

本方案强调了钠离子作为第二信使的作用，同时揭示了部分分化泛酚池的存在。该技术为泛酚池的研究提供了一种极为简便的方法，而以往此类研究通常需要非常特定的细胞模型。该方法也可用于研究其他膜中的电子传递过程，特别是脂滴内酶的电子传递。

将样品分为四份，每份20微克，并标记为A至D。将样品A和B各自再分为两份，每份10微克，并标记为A1、A2、B1和B2。按照文本方案中所述配制C1/C2缓冲液，并预热至37摄氏度。在1毫升比色皿中，向每份亚样品加入30微升细胞色素c和10微升丙二酸。加入C1/C2缓冲液，使A1和B1比色皿中的总体积达到980微升，A2和B2比色皿中达到979微升。在A1和A2比色皿中各加入10微升1摩尔氯化钾，在B1和B2比色皿中各加入10微升1摩尔氯化钠。向A2和B2比色皿中各加入1微升1毫摩尔鱼藤酮。在测量前立即向所有比色皿中加入10微升10毫摩尔NADH。

将比色皿翻转三次后放入分光光度计中。在连接的软件中，点击“测量”，然后选择“参数”，进入“常规”设置，将测量参数设定为波长550纳米，读数时间4分钟。点击“确定”并点击“开始”以启动实验。

测量结束后，点击“文件”并选择“另存为”，保存吸光度线性增加阶段的斜率。将样品 C 和 D 各自分为两个 10 微克的子样品，并标记为 C1、C2、D1 和 D2。将每个子样品与 30 微升细胞色素 c 和 1 微升鱼藤酮在 1 毫升比色皿中混合。向 C1 和 D1 比色皿中加入预热至 37 摄氏度的 C1/C2 缓冲液，使体积达到 980 微升；向 C2 和 D2 比色皿中加入相同缓冲液，使体积达到 970 微升。在 C1 和 C2 比色皿中各加入 10 微升 1 摩尔氯化钾，在 D1 和 D2 比色皿中各加入 10 微升 1 摩尔氯化钠。在测量前立即向 C2 和 D2 比色皿中各加入 1 微升 1 毫摩尔抗霉素 A，并向所有比色皿中加入 10 微升 1 摩尔琥珀酸。将比色皿翻转三次，然后放入分光光度计中。

进行测量，并保存测量结束时吸光度线性增加的斜率。本方案用于研究钠离子对线粒体膜在添加NADH或琥珀酸后还原细胞色素c的影响。样品A和B在550纳米处获得的吸光度曲线已根据相应的抑制情况进行校正。

这些曲线显示出相似的斜率，表明NADH-细胞色素c还原酶活性相似。然而，样品C和D的曲线有所不同，显示样品C的琥珀酸-细胞色素c还原酶活性高于样品D。为了标准化该技术所测得的变化量，可进一步采用其他方法，如分离的复合物I活性、复合物II或复合物III活性测定。利用该技术，我们正在探索钠可能作为第二信使参与的生理环境。