Name: 富血小板血浆裂解物用于治疗眼表疾病 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-08-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 57 s
Description: 了解富血小板血浆裂解物的制备与储存方法，用于眼表疾病治疗。该方案涵盖采集、生长因子检测及长期保存技术，为临床提供标准化指导。

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作者感谢&#34;Casa del Dono di Reggio Emilia&#34;提供供体来源的血小板浓缩物。

用于生长因子定量评估的PRP-L是在一项更广泛的PRP产品表征研究中采集的，该研究旨在用于再生医学目的，由雷焦艾米利亚AUSL-IRCCS开展，并于2019年1月10日获得艾米利亚诺尔德广大地区伦理委员会批准（协议编号2019/0003319）。捐献者均根据《赫尔辛基宣言》签署了知情同意书。收集用于评估眼表疾病指数（OSDI）问卷的汇总性匿名数据无需伦理审批，该问卷为临床医生常规用于监测干眼综合征症状的工具。图1A展示了所遵循的实验流程示意图，而图1B中的图片则展示了该操作的主要步骤。
1. 富血小板血浆（PRP）的采集
<ol>
	<li>PRP 单采
	<ol>
		<li>根据意大利法律选择本方案的血小板供者：供者年龄应在 18 至 65 岁之间，血压和血常规参数正常，血小板计数不低于 180 × 109 血小板/L23。合格供者在献血前 1 周内不得服用抗血小板药物或抗凝药物。</li>
		<li>使用自动化血液采集系统，按照制造商说明和国家法规23 进行血浆-血小板单采，以获得 1 个单位的单供者富血小板血浆（PRP）。使用腺嘌呤枸橼酸葡萄糖溶液 A（ACD-A）抗凝剂收集 PRP。 
		注：血小板单采为连续性操作过程，采集时间通常在 40 至 90 分钟之间。供者所接受的 ACD 用量及操作时间取决于供者个体特征，例如红细胞压积和针头规格。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>PRP 单位的特性 
	注：以下步骤通常由自动化血液采集系统在血浆-血小板单采过程中自动完成。请查阅制造商的操作手册。
	<ol>
		<li>将单采收集的 PRP 单位用适量保存液重悬，残留血浆量应尽可能少，以确保在整个保存期间 pH 值维持在 &#62; 6.4 以上，最终净体积平均为 180 mL（不含约 40 mL 抗凝剂溶液）。 
		注：根据意大利法律，质量控制需确认血小板（PLTs）计数至少为 2.0 × 1011 PLTs/单位，残余白细胞数应低于 1 × 106 个细胞/单位。</li>
		<li>将去白细胞并经辐照处理的 PRP 在 22 °C ± 2 °C 条件下，置于血小板震荡器上保存，最长不超过 5 天，之后再进行进一步操作23。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>PRP 稀释
	<ol>
		<li>开始稀释 PRP 前，立即通过穿刺采血袋主袋获取样本，并使用血细胞计数器进行血小板计数。 
		注：后续操作应在 II 级生物安全柜内无菌条件下进行。操作过程中需穿戴个人防护装备（实验服、手套和护目镜）。</li>
		<li>用适量无菌 0.9% NaCl 溶液稀释 PRP，使最终浓度达到 0.32 × 109 ± 0.03 × 109 PLTs/mL，以模拟外周血中平均血小板浓度。</li>
		<li>利用血袋专用穿刺针，将稀释后的 PRP 分装至 300 mL 空收集袋中，每袋净体积达到 190 mL。</li>
		<li>取少量剩余稀释 PRP（通常为 1 mL）进行质量控制，检测可能的微生物污染。在微生物学实验室按照制造商说明进行无菌检测（见 材料表）。 
		注：应使用专用于需氧血培养的培养瓶，能够从小体积血液样本中定性培养并回收需氧微生物（主要是细菌和酵母菌）。</li>
		<li>将稀释后的 PRP 分装袋在 −80 °C 条件下保存，解冻前最长保存时间为 2 个月。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. 富血小板血浆裂解物（PRP-L）的制备
<ol>
	<li>解冻
	<ol>
		<li>开始解冻程序前，确保已将水浴锅预热至 37 °C。将富血小板血浆（PRP）袋放入水浴中，等待其完全解冻。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>PRP-L 收集
	<ol>
		<li>在室温下以 3000 x g 离心 PRP 袋 30 分钟。 
		&#8203;注意：后续步骤应在 II 级生物安全柜内无菌条件下进行。</li>
		<li>利用转移袋的穿刺针，将离心后的 PRP 袋与一个空的无菌 300 mL 转移袋连接。小心地将 PRP-L 上清液转移至新袋中，避免转移沉淀物。如有可能，使用血袋压挤器辅助转移。</li>
		<li>使用血袋封口机密封 PRP-L 单元的连接管。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>PRP-L 分装 
	注意：一个起始单元含 190 mL PRP（见步骤 1.3.3.）足以填充两套滴眼液套装（有关用于血液成分制备和保存滴眼液的具体医疗器械的详细信息，请参见材料表）。应在 II 级生物安全柜内打开滴眼液套装，将整条串联小瓶置于预连接注射器上方，并将三通阀中央箭头指向左侧，以避开细菌过滤器。
	<ol>
		<li>使用无菌注射器收集 30–60 mL PRP-L，并将注射器连接至灌装管路上的鲁尔锁接头。</li>
		<li>根据制造商说明，将三通阀旋转半圈，打开 PRP-L 注射器与预连接注射器之间的通路。用 PRP-L 填充预连接注射器。</li>
		<li>断开 PRP-L 注射器，关闭鲁尔锁接头的管帽，并将三通阀旋转回原始位置。使用滴眼液套装的注射器将 PRP-L 分装至各小瓶中。</li>
		<li>重复步骤 2.3.1.–2.3.3.，直至所有给药小瓶均被填满。确保每个给药器均正确填充后，使用血袋封口机单独密封。</li>
		<li>使用新的滴眼液套装重复上述分装程序。</li>
		<li>取少量残留的稀释 PRP-L 样本，检测可能的微生物污染（见步骤 1.3.4.）。 
		注意：若液体意外到达串联末端的细菌过滤器，吸液注射器可能会遇到阻力，从而阻碍填充过程。为继续分装，可将串联末端部分抬高约 5–6 个分装量，远离末端的疏水性细菌过滤器。在此位置，使用一个已装满空气的新的 30 mL 无菌注射器，连接至细菌过滤器的雌性鲁尔锁接口，用力并反复推动注射器活塞，以清除所有血液成分残留，使细菌过滤膜脱离液体。移除注射器后，继续填充剩余小瓶。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>PRP-L 储存
	<ol>
		<li>正确标记每个给药器，并将其放入塑料袋中。同时标记塑料袋，注意标明供体的血型。</li>
		<li>根据意大利法律23和指南24，在 −80 °C 下储存，最长可保存 24 个月，直至分配给患者。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. PRP-L 的配制
<ol>
	<li>建议根据PRP-L血型进行患者分配。使用冷藏箱运送PRP-L给药瓶，并确保每瓶含有1.45 mL PRP-L，约相当于45滴。指导患者，给药瓶可在家中于−15 °C条件下保存最长1个月。</li>
</ol>

<ol><li>Everts, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet-rich+plasma+and+platelet+gel%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Extra-Corporeal+Technology%22%5BJournal%5D)">Platelet-rich plasma and platelet gel: A review.</a> The Journal of Extra-Corporeal Technology. 38 (2), 174(2006).</li>
<li>Giannaccare, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+derived+eye+drops+for+the+treatment+of+cornea+and+ocular+surface+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion+and+Apheresis+Science%22%5BJournal%5D)">Blood derived eye drops for the treatment of cornea and ocular surface diseases.</a> Transfusion and Apheresis Science. 56 (4), 595-604 (2017).</li>
<li>Bernabei, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood-based+treatments+for+severe+dry+eye+disease%3A+The+need+of+a+consensus%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Medicine%22%5BJournal%5D)">Blood-based treatments for severe dry eye disease: The need of a consensus.</a> Journal of Clinical Medicine. 8 (9), 1478(2019).</li>
<li>Findlay, Q., Reid, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dry+eye+disease%3A+When+to+treat+and+when+to+refer%5BTitle%5D)+AND+%22Australian+Prescriber%22%5BJournal%5D)">Dry eye disease: When to treat and when to refer.</a> Australian Prescriber. 41 (5), 160-163 (2018).</li>
<li>Clayton, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dry+eye%5BTitle%5D)+AND+%22New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Dry eye.</a> New England Journal of Medicine. 378 (23), 2212-2223 (2018).</li>
<li>Jones, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TFOS+DEWS+II+management+and+therapy+report%5BTitle%5D)+AND+%22The+Ocular+Surface%22%5BJournal%5D)">TFOS DEWS II management and therapy report.</a> The Ocular Surface. 15 (3), 575-628 (2017).</li>
<li>Holland, E. J., Darvish, M., Nichols, K. K., Jones, L., Karpecki, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+topical+ophthalmic+drugs+in+the+treatment+of+dry+eye+disease%3A+A+systematic+literature+review%5BTitle%5D)+AND+%22The+Ocular+Surface%22%5BJournal%5D)">Efficacy of topical ophthalmic drugs in the treatment of dry eye disease: A systematic literature review.</a> The Ocular Surface. 17 (3), 412-423 (2019).</li>
<li>Shih, K. C., Lun, C. N., Jhanji, V., Thong, B. Y. H., Tong, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systematic+review+of+randomized+controlled+trials+in+the+treatment+of+dry+eye+disease+in+Sjogren+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Inflammation%22%5BJournal%5D)">Systematic review of randomized controlled trials in the treatment of dry eye disease in Sjogren syndrome.</a> Journal of Inflammation. 14, 26(2017).</li>
<li>Rusciano, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+dry+eye+lactoferrin+and+lactobionic+acid%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmic+Research%22%5BJournal%5D)">Age-related dry eye lactoferrin and lactobionic acid.</a> Ophthalmic Research. 60 (2), 94-99 (2018).</li>
<li>Craig, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((TFOS+DEWS+II+definition+and+classification+report%5BTitle%5D)+AND+%22The+Ocular+Surface%22%5BJournal%5D)">TFOS DEWS II definition and classification report.</a> The Ocular Surface. 15 (3), 276-283 (2017).</li>
<li>Drew, V. J., Tseng, C. L., Seghatchian, J., Burnouf, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reflections+on+dry+eye+syndrome+treatment%3A+Therapeutic+role+of+blood+products%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">Reflections on dry eye syndrome treatment: Therapeutic role of blood products.</a> Frontiers in Medicine. 5, 33(2018).</li>
<li>Giannaccare, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+derived+eye+drops+for+the+treatment+of+cornea+and+ocular+surface+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion+and+Apheresis+Science%22%5BJournal%5D)">Blood derived eye drops for the treatment of cornea and ocular surface diseases.</a> Transfusion and Apheresis Science. 56 (4), 595-604 (2017).</li>
<li>Acebes-Huerta, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet-derived+bio-products%3A+Classification+update%2C+applications%2C+concerns+and+new+perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion+and+Apheresis+Science%22%5BJournal%5D)">Platelet-derived bio-products: Classification update, applications, concerns and new perspectives.</a> Transfusion and Apheresis Science. 59 (1), 102716(2020).</li>
<li>Quartieri, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolomics+comparison+of+cord+and+peripheral+blood-derived+serum+eye+drops+for+the+treatment+of+dry+eye+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion+and+Apheresis+Science%22%5BJournal%5D)">Metabolomics comparison of cord and peripheral blood-derived serum eye drops for the treatment of dry eye disease.</a> Transfusion and Apheresis Science. 60 (4), 103155(2021).</li>
<li>Badami, K. G., McKellar, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allogeneic+serum+eye+drops%3A+Time+these+became+the+norm%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Allogeneic serum eye drops: Time these became the norm.</a> British Journal of Ophthalmology. 96 (8), 1151-1152 (2012).</li>
<li>Hwang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+clinical+efficacies+of+autologous+serum+eye+drops+in+patients+with+primary+and+secondary+Sj%C3%B6gren+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">Comparison of clinical efficacies of autologous serum eye drops in patients with primary and secondary Sjögren syndrome.</a> Cornea. 33 (7), 663-667 (2014).</li>
<li>Chiang, C. C., Lin, J. M., Chen, W. L., Tsai, Y. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allogeneic+serum+eye+drops+for+the+treatment+of+severe+dry+eye+in+patients+with+chronic+graft-versus-host+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">Allogeneic serum eye drops for the treatment of severe dry eye in patients with chronic graft-versus-host disease.</a> Cornea. 26 (7), 861-863 (2007).</li>
<li>Jonsdottir-Buch, S. M., Lieder, R., Sigurjonsson, O. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+lysates+produced+from+expired+platelet+concentrates+support+growth+and+osteogenic+differentiation+of+mesenchymal+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Platelet lysates produced from expired platelet concentrates support growth and osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells.</a> PLoS One. 8 (7), 68984(2013).</li>
<li>Altaie, A., Owston, H., Jones, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+platelet+lysate+for+bone+regeneration+-+Are+we+ready+for+clinical+translation%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Use of platelet lysate for bone regeneration - Are we ready for clinical translation.</a> World Journal of Stem Cells. 8 (2), 47-55 (2016).</li>
<li>Vesaluoma, M., Teppo, A. M., Grönhagen-Riska, C., Tervo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet-derived+growth+factor-BB+%28PDGF-BB%29+in+tear+fluid%3A+A+potential+modulator+of+corneal+wound+healing+following+photorefractive+keratectomy%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">Platelet-derived growth factor-BB (PDGF-BB) in tear fluid: A potential modulator of corneal wound healing following photorefractive keratectomy.</a> Current Eye Research. 16 (8), 825-831 (1997).</li>
<li>Zheng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+transforming+growth+factor+%CE%B2+activity+in+normal+and+dry+eye+human+tears+by+CCL-185+cell+bioassay%5BTitle%5D)+AND+%22Cornea%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the transforming growth factor β activity in normal and dry eye human tears by CCL-185 cell bioassay.</a> Cornea. 29 (9), 1048(2010).</li>
<li>Zamani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+therapeutic+approaches+in+utilizing+platelet+lysate+in+regenerative+medicine%3A+Are+we+ready+for+clinical+use%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Novel therapeutic approaches in utilizing platelet lysate in regenerative medicine: Are we ready for clinical use.</a> Journal of Cellular Physiology. 234 (10), 17172-17186 (2019).</li>
<li>Ministro della Salute. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disposizioni+relative+ai+requisiti+di+qualit%C3%A0+e+sicurezza+del+sangue+e+degli+emocomponenti%5BTitle%5D)+AND+%22Italian+Ministry+of+Health%22%5BJournal%5D)">Disposizioni relative ai requisiti di qualità e sicurezza del sangue e degli emocomponenti.</a> Italian Ministry of Health. , DECRETO 2 Novembre 2015 (2015).</li>
<li>Aprili, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Raccomandazioni+SIMTI+sugli+emocomponenti+per+uso+non+trasfusionale%5BTitle%5D)+AND+%22Societ%C3%A0+Italiana+di+Medicina+Trasfusionale+e+Immunoematologia%22%5BJournal%5D)">Raccomandazioni SIMTI sugli emocomponenti per uso non trasfusionale.</a> Società Italiana di Medicina Trasfusionale e Immunoematologia. , (2012).</li>
<li>Schiroli, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+two+alternative+procedures+to+obtain+packed+red+blood+cells+for+%CE%B2-thalassemia+major+transfusion+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Biomolecules%22%5BJournal%5D)">Comparison of two alternative procedures to obtain packed red blood cells for β-thalassemia major transfusion therapy.</a> Biomolecules. 11 (11), 1638(2021).</li>
<li>Pulcini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apheresis+platelet+rich-plasma+for+regenerative+medicine%3A+An+in+vitro+study+on+osteogenic+potential%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Science%22%5BJournal%5D)">Apheresis platelet rich-plasma for regenerative medicine: An in vitro study on osteogenic potential.</a> International Journal of Molecular Science. 22 (16), 8764(2021).</li>
<li>Ohashi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Presence+of+epidermal+growth+factor+in+human+tears%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+Ophthalmology+%26+Visual+Science%22%5BJournal%5D)">Presence of epidermal growth factor in human tears.</a> Investigative Ophthalmology & Visual Science. 30 (8), 1879-1882 (1989).</li>
<li>Vitale, S., Goodman, L. A., Reed, G. F., Smith, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+NEI-VFQ+and+OSDI+questionnaires+in+patients+with+Sj%C3%B6gren%27s+syndrome-related+dry+eye%5BTitle%5D)+AND+%22Health+Quality+of+Life+Outcomes%22%5BJournal%5D)">Comparison of the NEI-VFQ and OSDI questionnaires in patients with Sjögren's syndrome-related dry eye.</a> Health Quality of Life Outcomes. 2, 44(2004).</li>
<li>Schiffman, R. M., Christianson, M. D., Jacobsen, G., Hirsch, J. D., Reis, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reliability+and+validity+of+the+Ocular+Surface+Disease+Index%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Reliability and validity of the Ocular Surface Disease Index.</a> Archives of Ophthalmology. 118 (5), 615-621 (2000).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristics+of+platelet+lysate+compared+to+autologous+and+allogeneic+serum+eye+drops%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Vision+Science+and+Technology%22%5BJournal%5D)">Characteristics of platelet lysate compared to autologous and allogeneic serum eye drops.</a> Translational Vision Science and Technology. 9 (4), 24(2020).</li>
<li>Henschler, R., Gabriel, C., Schallmoser, K., Burnouf, T., Koh, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+platelet+lysate+current+standards+and+future+developments%5BTitle%5D)+AND+%22Transfusion%22%5BJournal%5D)">Human platelet lysate current standards and future developments.</a> Transfusion. 59 (4), 1407-1413 (2019).</li>
<li>Samarkanova, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+evaluation+of+allogeneic+eye+drops+from+cord+blood+platelet+lysate%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Transfusion%22%5BJournal%5D)">Clinical evaluation of allogeneic eye drops from cord blood platelet lysate.</a> Blood Transfusion. 19 (4), 347-356 (2021).</li>
<li>Strunk, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((International+Forum+on+GMP-grade+human+platelet+lysate+for+cell+propagation%3A+Summary%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sanguinis%22%5BJournal%5D)">International Forum on GMP-grade human platelet lysate for cell propagation: Summary.</a> Vox Sanguinis. 113 (1), 80-87 (2018).</li>
<li>Schiroli, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+impact+of+COVID-19+outbreak+on+the+Transfusion+Medicine+Unit+of+a+Northern+Italy+Hospital+and+Cancer+Centre%5BTitle%5D)+AND+%22Vox+Sanguinis%22%5BJournal%5D)">The impact of COVID-19 outbreak on the Transfusion Medicine Unit of a Northern Italy Hospital and Cancer Centre.</a> Vox Sanguinis. 117 (2), 235-242 (2021).</li>
<li>Klatte-Schulz, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+different+platelet+lysates+and+platelet+rich+preparations+to+stimulate+tendon+cell+biology%3A+An+in+vitro+study%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Science%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of different platelet lysates and platelet rich preparations to stimulate tendon cell biology: An in vitro study.</a> International Journal of Molecular Science. 19 (1), 212(2018).</li>
<li>Fea, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+autologous+platelet+lysate+eye+drops%3A+An+in+vivo+confocal+microscopy+study%5BTitle%5D)+AND+%22BioMed+Research+International%22%5BJournal%5D)">The effect of autologous platelet lysate eye drops: An in vivo confocal microscopy study.</a> BioMed Research International. 2016, 8406832(2016).</li>
<li>Abu-Ameerh, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+lysate+promotes+re-epithelialization+of+persistent+epithelial+defects%3A+A+pilot+study%5BTitle%5D)+AND+%22International+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Platelet lysate promotes re-epithelialization of persistent epithelial defects: A pilot study.</a> International Ophthalmology. 39 (7), 1483-1490 (2019).</li>
<li>Geremicca, W., Fonte, C., Vecchio, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blood+components+for+topical+use+in+tissue+regeneration%3A+evaluation+of+corneal+lesions+treated+with+platelet+lysate+and+considerations+on+repair+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Blood+Transfusion%22%5BJournal%5D)">Blood components for topical use in tissue regeneration: evaluation of corneal lesions treated with platelet lysate and considerations on repair mechanisms.</a> Blood Transfusion. 8 (2), 107-112 (2010).</li>
<li>De Paiva, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+TGF-%CE%B2+signaling+improves+ocular+surface+epithelial+disease+in+experimental+autoimmune+keratoconjunctivitis+sicca%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Disruption of TGF-β signaling improves ocular surface epithelial disease in experimental autoimmune keratoconjunctivitis sicca.</a> PLoS One. 6 (12), 29017(2011).</li>
</ol>

作者声明无利益冲突。

近年来，基于血小板的产品在眼表疾病治疗中的临床应用日益增多，但其推广受到科学依据不足的限制。这主要是由于供体来源和制备方案存在较大异质性，且这些信息常常未被充分披露，或未针对具体临床用途进行专门设计。特别是通过单采法收集的血小板制品的相关信息仍较为缺乏。因此，本研究旨在详细描述通过单采法获取富血小板血浆裂解物（PRP-L）并用于干眼症（DED）治疗的逐步制备流程。
PRP-L 是制备滴眼液的理想来源，因其生长因子含量高于其他血液制品22,&#160;，且与血清或 PRP 相比，其制备和储存成本更低、操作更简便。制备 PRP-L 时，需对血小板进行裂解（通常通过一次或多次冻融循环），以释放其内含物。该过程可确保获得富含活性分子的溶液，从而促进组织再生22,26。目前已有越来越多的疾病采用 PRP-L 进行治疗22，但在眼科领域的应用指征仍较弱，主要原因是血小板采集和 PRP...

血液来源的产品被广泛应用于伤口护理1、颌面外科和骨科手术，以及多种眼表疾病2（如干眼症（DED）3）的治疗。在 DED 中，由于参与泪液生成和维持眼表完整性的多种因素功能异常，导致泪膜稳态受到破坏4,5。
干眼症（DED）的病因和严重程度具有异质性6,7,8，可能由多种因素引起，如衰老、性别9、佩戴隐形眼镜、局部或全身用药10，以及干燥综合征等原有疾病10。尽管症状较轻，干眼症仍影响全球数百万人，对其生活质量及医疗系统均造成影响6。
针对该病理已报道多种治疗方法，但目前对于最有效的治疗方案仍无共识12。迄今为止，人工泪液作为一线治疗手段，旨在恢复泪膜的水相成分，但这些替代品并不含有天然泪液中的主要生物活性溶质6,11。基于血小板的产品被视为人工泪液的一种有效替代方案12,13，然而其临床疗效、使用建议以及制备方法仍存在争议3。
血液制品与泪液在代谢物14、蛋白质、脂质、维生素、离子、生长因子（GFs）、抗氧化化合物11以及渗透压（300 mOsm/L）11方面的组成相似。通过其组分的协同作用，血液制品可促进角膜上皮再生，抑制炎性细胞因子的释放，并增加结膜中杯状细胞的数量及黏蛋白的表达2,3。
迄今为止，文献中已记录了眼科血液来源产品的异质性；这些产品可根据血液供体的来源进行分类，即自体来源或同种异体来源，以及根据血液来源进行分类，即外周血、脐带血、血清或血小板。
尽管自体产品曾是最广泛使用的类型3，但同种异体产品现正逐渐成为首选，因其能提供更高的疗效和安全性标准15，同时显著降低使用成本16,17。事实上，既往研究已证实，从患有自身免疫性和/或系统性疾病患者体内获取的血液制品，其质量和功能可能存在异常6,16,17。尽管基于血清的眼药水目前应用最为广泛，但基于血小板的产品近年来正被确立为一种有效的替代方案，因其制备简便且能维持显著的治疗效果3,11。目前可用的血小板来源产品主要包括富血小板血浆（PRP）、富血小板血浆裂解物（PRP-L）以及富含生长因子的血浆（PRGF）3。
其中，PRP-L 的优势在于其为一种可长期冷冻保存的产品。PRP-L 可通过单采法、白膜层制备，甚至可利用即将过期的血小板（PLTs）制备18,19，从而有效减少资源浪费。分装后的 PRP-L 可在血站于 −80 °C 下保存数月，或在患者家中于 −15 °C 下短期保存。
PRP-L 富含生长因子（GFs），已被证实可促进眼表再生12,20,21。然而，该领域报道的临床研究较少，且所有研究均采用自体来源3,22。由于目前尚无标准化的制备、分装和储存指南，PRP-L 在常规用于治疗眼表疾病之前仍需进一步验证和表征3。
本文分享了意大利雷焦艾米利亚AUSL-IRCCS输血医学科制备用于治疗干眼症（DED）患者PRP-L的详细操作方案。我们旨在帮助科学界建立标准化的制备方法，以提高全球范围内相关研究和临床实践的一致性与可比性。

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;仪器设备&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CompoSeal Mobilea II</td><td>Fresenius Kabi, Germany</td><td></td><td>血袋封口机</td></tr><tr><td>HeraSafe 通风柜</td><td>Heraeus Instruments, Germany</td><td></td><td>II级生物安全柜</td></tr><tr><td>MCS+ 9000 移动式血小板采集系统</td><td>Haemonetics, Italy</td><td></td><td>用于捐献血小板、红细胞、血浆或组合血液成分的自动化血浆及多组分采集设备</td></tr><tr><td>血小板振荡器，PF396i</td><td>Helmer, USA</td><td></td><td>血小板振荡器</td></tr><tr><td>Raycell X射线血液辐照仪</td><td>MDS Nordion, Canada</td><td></td><td>X射线血液辐照仪</td></tr><tr><td>ROTIXA 50RS</td><td>Hettich Zentrifugen, Germany</td><td></td><td>高速离心机</td></tr><tr><td>Sysmex XS-1000i</td><td>Sysmex Europe GMBH, Germany</td><td></td><td>用于血小板计数的血细胞分析仪</td></tr><tr><td>恒温水浴箱，WB-M15</td><td>Falc Instruments, Italy</td><td></td><td>恒温水浴箱</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;材料&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ACD-A 抗凝剂溶液 A</td><td>Fenwal Inc., USA</td><td>DIN 00788139</td><td>用于血小板分离的抗凝剂溶液（1000 ml）</td></tr><tr><td>BD BACTEC Peds Plus/F 培养瓶</td><td>BD Biosciences, USA</td><td>BD 442020</td><td>无菌检测</td></tr><tr><td>BD BACTEC Peds Plus/F 培养瓶</td><td>BD Biosciences, USA</td><td>442020</td><td>至少2个培养瓶用于无菌检测</td></tr><tr><td>BD Luer Lok 注射器</td><td>BD Plastipack, USA</td><td>300865</td><td>至少4个无菌注射器（50 ml）</td></tr><tr><td>Bio-Plex 人癌症检测面板1</td><td>BioRad Laboratories, USA</td><td>171AC500M</td><td>用于PDGF亚型评估的标准面板</td></tr><tr><td>Bio-Plex 人癌症检测面板2</td><td>BioRad Laboratories, USA</td><td>171AC600M</td><td>用于EGF评估的标准面板</td></tr><tr><td>Bio-Plex MAGPIX 多重检测仪</td><td>BioRad Laboratories, USA</td><td>Magpix</td><td>该仪器利用功能化磁珠实现多种免疫检测</td></tr><tr><td>Bio-Plex Pro TGF-b 检测试剂盒</td><td>BioRad Laboratories, USA</td><td>10024984</td><td>用于TGFb亚型评估的试剂盒及标准品</td></tr><tr><td>BioRet</td><td>ARIES s.r.l., Italy</td><td>A2DH0020</td><td>至少4个用于血袋穿刺的穿刺针</td></tr><tr><td>血液采集管</td><td>BD Vacutainer, USA</td><td>367835</td><td>1支，用于进行血小板计数</td></tr><tr><td>滴眼液套件。COL 医疗器械，用于从血液成分中制备和保存滴眼液</td><td>Biomed Device s.r.l., Italy</td><td>COLC50</td><td>滴眼液套件。每采集一份富血小板血浆（PRP）至少需要2套</td></tr><tr><td>人癌症PDGF-AB/BB 检测试剂盒 1x96孔</td><td>BioRad Laboratories, USA</td><td>171BC511</td><td>用于PDGF亚型评估的试剂盒</td></tr><tr><td>人癌症2 EGF 检测试剂盒 1x96孔</td><td>BioRad Laboratories, USA</td><td>171BC603M</td><td>用于EGF评估的试剂盒</td></tr><tr><td>0.9% 氯化钠无菌溶液</td><td>Baxter S.p.A., Italy</td><td>B05BB01</td><td>1000 ml</td></tr><tr><td>OSDI 问卷</td><td>Allergan Inc., USA</td><td>OSDI</td><td>眼表疾病指数问卷</td></tr><tr><td>穿刺针</td><td>BioRet ARIES s.r.l., Italy</td><td>BS051004</td><td>穿刺针</td></tr><tr><td>血小板添加剂溶液 A+ T-PAS+</td><td>TERUMO BCT Inc., Italy</td><td>40842</td><td>血小板浓缩物的保存溶液（1000 ml）</td></tr><tr><td>Excel 软件</td><td>Microsoft, USA</td><td>Excel</td><td>数据分析软件</td></tr><tr><td>Teruflex 转移袋 1000 ml</td><td>TERUMO BCT Inc., Italy</td><td>BB*T100BM</td><td>用于PRP稀释，1个</td></tr><tr><td>Teruflex 转移袋 300 ml</td><td>TERUMO BCT Inc., Italy</td><td>BB*030CM</td><td>每采集一份PRP至少需要6个</td></tr></tbody></table>

用于治疗眼表疾病的富血小板血浆裂解物

Platelet-Rich Plasma Lysate for Treatment of Eye Surface Diseases

多种眼表疾病采用血液来源的眼药水进行治疗。由于此类眼药水中含有促进眼表再生的代谢物和生长因子，其已在临床实践中得到应用。血液来源的眼药水可从不同来源（例如全血或血小板单采捐献）制备，并可通过不同方案（例如不同的稀释比例和冻融循环次数）进行生产。这种多样性阻碍了临床方案的标准化，从而影响对其临床疗效的评估。详细描述并共享方法学流程有助于制定通用指南。近年来，异体来源产品逐渐推广，作为自体治疗的替代方案，因其可提供更高的疗效标准；其中，富血小板血浆裂解物（PRP-L）眼药水的制备工艺较为简便。在意大利雷焦艾米利亚AUSL-IRCCS输血医学科，PRP-L来源于血小板单采捐献。该产品最初用0.9% NaCl将血小板浓度稀释至0.3 × 109 血小板/mL（起始平均浓度为1 × 109 血小板/mL）。稀释后的血小板经过冷冻-解冻处理，随后离心以去除碎片。最终产物分装为每份1.45 mL，于−80 °C保存。在发放给患者前，需对眼药水进行无菌检测。患者可将血小板裂解物在−15 °C保存最多1个月。此外，还对随机选取的分装样品进行生长因子成分分析，其平均值在本文中予以报告。

使用血清来源的眼药水（这是治疗眼表疾病最常用的血液制品）的理论依据在于其含有生长因子（GFs），这些生长因子几乎完全来源于循环中的血小板。与外周血清相比，富血小板血浆（PRP）含有显著更高数量的血小板（因此也含有更高浓度的血小板来源生长因子），其血小板浓度范围为 0.15 x 109-0.45 x 109 PLTs/mL。根据意大利法规，PRP 制品中的血小板计数应至少达到 0.9 x 109-1 x 109 PLTs/mL。因此，为了获得能够模拟血清眼药水疗效的产品，在制备裂解物之前，应将 PRP 稀释至生理水平的血小板含量。
然而，由于组织修复主要由血小板来源的生长因子（GFs）驱动，仅凭血小板计数可能对眼表疾病的治疗效果产生误导。在干眼病（DED）中，泪液分泌和泪膜稳态功能受损，而DED是目前最常使用血液来源滴眼液治疗的眼病。因此，用于治疗DED的血小板制剂还应模拟泪液的生理成分。
为了确定最适合治疗眼表疾病的PRP-L（如本方案步骤...

血小板裂解物是治疗眼表疾病的一种新兴工具。本文提出一种从血小板捐献者采集的血小板裂解物的制备、分装、储存及表征方法。

多种眼表疾病采用血液来源的眼药水进行治疗。由于其含有代谢物……，这类眼药水已被引入临床实践。

PRP 裂解物是一种新兴的基于血小板的产品，用于治疗眼表疾病。本文旨在分享并详细阐述我们的制备方案，以促进通用方法学指南的建立。异体来源产品已逐渐扩散，成为自体治疗的一种替代选择。由于其能保证更高的功效标准。富血小板血浆（PRP）裂解物含有高浓度的生长因子。其制备成本低廉且操作简便，并可长期保存。关于使用血液制品治疗眼部或面部疾病的文献记载较为丰富。然而，其应用至今仍未达成共识。原因之一在于血液制品制备方法的多样性。我们的目标是分享本方案，以建立通用的方法学。首先，通过穿刺针从主袋中采集样本，使用血球计数板进行血小板计数。用适量无菌0.9%氯化钠溶液稀释富含血小板的血浆。将稀释后的富血小板血浆分装至300毫升的空收集袋中，每袋净体积达到190毫升。取少量剩余的稀释富血小板血浆用于质量控制，评估可能的微生物污染。按照生产商说明书制备无菌检测样本，送至微生物学实验室进行检测。将稀释后的富血小板血浆袋在负80摄氏度下保存，最长不超过两个月，之后进行解冻。确保将水浴温度设置为37摄氏度。将富血小板血浆袋放入水浴中，等待其完全解冻。将富含血小板的血浆袋在室温下以3000 × g离心30分钟。利用转移袋的穿刺针头，将离心后的血浆袋与一个无菌的300毫升空转移袋连接。小心地将PRP裂解物上清液转移至新袋中，避免混入沉淀物。使用封口机密封PRP裂解物装置的连接管。用无菌注射器收集30至60毫升PRP裂解物，并将注射器连接至灌装管路上的鲁尔锁接头。根据制造商说明，将旋塞阀旋转半圈，以打开含有PRP裂解物的注射器与预连接注射器之间的管路。用PRP裂解物填充预先连接的注射器。断开PRP裂解物注射器。关闭鲁尔锁接头的管帽，并将旋塞转回原始位置。使用滴眼液套件中的注射器将 PRP 裂解物填充到小瓶中。确保每个给药器均被正确填充，然后使用封口机将其单独密封。使用新的滴眼液套装重复该步骤。取少量残留的稀释后PRP裂解物以评估可能的微生物污染。正确标记每个涂抹器，并将其放入塑料袋中。同时标记塑料袋，注意突出显示供体的血型。根据意大利法律和指南，在患者分配前，于零下80摄氏度保存，最长不超过24个月。对两名不同供体的PRP裂解物中表皮生长因子、血小板源性生长因子以及转化生长因子β亚型进行定量评估，结果显示，每毫升0.3×10⁹血小板浓度稀释后的成分与泪液组成最为相似。经过六个月的PRP裂解物治疗后，眼表疾病指数评分从56±21下降至45±21，表明患者的生活质量有所改善。不同制备同种异体PRP裂解物的方法之间的方法学差异，并未对在其他组织上测试的PRP裂解物的再生能力产生不利影响。用氯化钠稀释血浆以及储存富血小板血浆时需谨慎操作，因为这可能会改变PRP裂解物的成分。有必要进行比较分析以研究这些步骤中的差异。

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Medicine

医学

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用于治疗眼表疾病的富血小板血浆裂解物

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