Isolation of Whole Cell Protein Lysates from Mouse Facial Processes and Cultured Palatal Mesenchyme Cells for Phosphoprotein Analysis

Madison A. Rogers; Brenna J. C. Dennison; Katherine A. Fantauzzo

doi:10.3791/63834

JoVE Journal
Developmental Biology

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Isolation of Whole Cell Protein Lysates from Mouse Facial Processes and Cultured Palatal Mesenchyme Cells for Phosphoprotein Analysis

从小鼠面部过程和培养的腭间充质细胞中分离全细胞蛋白质裂解物以进行磷酸化蛋白分析

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07:26 min

April 1, 2022

DOI: 10.3791/63834-v

Madison A. Rogers*¹, Brenna J. C. Dennison*¹, Katherine A. Fantauzzo¹

¹Department of Craniofacial Biology, School of Dental Medicine,University of Colorado Anschutz Medical Campus

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该协议提出了一种从解剖的小鼠胚胎面部过程或培养的小鼠胚胎腭间充质细胞中分离全细胞蛋白裂解物并随后进行蛋白质免疫印迹以评估磷酸化蛋白水平的方法。

该协议可用于更深入地了解哺乳动物颅面发育过程中活性磷酸化蛋白的动力学和作用。该方案克服了从两个生理相关背景（小鼠面部过程和培养的小鼠胚胎腭间充质细胞）分离蛋白质过程中脱磷酸化的常见障碍。必须快速移动，同时将所有试剂和材料保持在冰上，并在所有裂解缓冲液中使用磷酸酶抑制剂，以保持磷酸化蛋白质的完整性。

首先，将小鼠身体放在腹侧朝上，并将小鼠腹部喷洒70%乙醇的解剖板上。然后用直的Semken镊子捏住并抬起阴道口前方的皮肤，以打开腹腔。接下来，用直刀片手术剪刀在两侧以45度角切割抬起的皮肤，以产生V形，该形状延伸到四肢和后肢之间大约一半的每个侧表面。

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