Name: 相干反斯托克斯拉曼光谱（CARS）在脑切片中成像髓鞘形成的应用 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-07-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 8 s
Description: 了解相干反斯托克斯拉曼光谱技术如何用于脑切片髓鞘形成成像。该方法可与免疫荧光技术结合，帮助研究人员研究多发性硬化症等神经系统疾病中的髓鞘变化。

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由美国国立卫生研究院（NIH）R01 DC 17924、R01 DC 18401（Klug）以及 NIH 1R15HD105231-01、T32DC012280 和 FRAXA（McCullagh）项目资助。CARS 成像在科罗拉多大学安舒茨医学校区神经技术中心的先进光学显微镜核心设施完成，该设施部分由 NIH P30 NS048154 和 NIH P30 DK116073 项目支持。

所有实验均遵守所有适用的法律法规、美国国立卫生研究院指南，并已获得科罗拉多大学安舒茨分校机构动物护理和使用委员会的批准。
1. 动物
<ol>
	<li>使用来自杰克逊实验室的 C57BL/6J（货号 #000664）小鼠（Mus musculus）或最初来自查尔斯河的蒙古沙鼠（Meriones unguiculatus）。</li>
</ol>
2. 组织制备
<ol>
	<li>进行心脏灌注时，使用戊巴比妥钠（120 mg/kg 体重）对目标啮齿类动物实施过量麻醉，随后经心脏灌注磷酸盐缓冲液（PBS；137 mM NaCl，2.7 mM KCl，1.76 mM KH2PO4, 10 mM Na2HPO4），接着灌注4%多聚甲醛（PFA）24。
	<ol>
		<li>具体操作：使用剪刀打开腹部和肋骨 cage，并用凯利止血钳固定肋骨 cage，以暴露心脏。</li>
		<li>将连接至灌注泵的23号针头插入左心室，并用精细剪刀迅速剪开右心房。</li>
		<li>通过灌注泵和心脏中的针头灌注PBS，持续10分钟，以清除脑部和体内的血液。</li>
		<li>将灌注泵切换至4% PFA，继续灌注10分钟，并检查四肢和尾巴是否僵硬，以确认灌注成功。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>灌注完成后，将动物断头，取出脑组织。将脑组织在4% PFA中固定过夜，然后转移至PBS中。将脑干包埋于4%琼脂糖（溶于PBS中），使用振动切片机进行冠状面切片，厚度为200 µm。</li>
</ol>
3. 染色
<ol>
	<li>在抗体孵育液（AB 液：0.1 M 磷酸盐缓冲液（PB：50 mM KH2PO4，150 mM Na2HPO4），150 mM NaCl，3 mM Triton-X，1% 牛血清白蛋白（BSA））中对游离漂浮切片进行尼氏染色（1:100），以显示细胞体，在室温下于普通实验室摇床上孵育 30 分钟25。
	<ol>
		<li>使用铝箔和/或盖子保护切片免受光照。波长在 550 nm 及以下适用于 CARS 成像（图 1）。 
		注意：尽管我们认为 Triton-X 或其他试剂对脂质的 CARS 成像无显著影响，但仍建议针对特定抗体孵育液设置额外对照。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>暂停点：将游离漂浮切片（避光保存）置于 PBS 中，直至成像。切片完成后，应在两周内完成脑切片的成像。</li>
</ol>
<img alt="荧光发射光谱，660 nm，发射分析图，相对强度与波长关系。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64013/64013fig01.jpg" data-altupdatedat="1788282455000" data-alt="图1"> 
图1：CARS成像可与免疫荧光成像结合使用。 图中显示CARS成像发生在660/640 nm的红光信号光谱范围26。该波长与绿色、蓝色或紫外光范围相距足够远，因此可将CARS信号与这些波段的免疫荧光信号联合使用。具体而言，图中还标示了用蓝色荧光染料标记的尼氏体（Nissl）的激发和发射光谱，本研究在获取代表性结果时即结合了该标记与CARS成像。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64013/64013fig01large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
4. 成像
注意：CARS 激光系统包含一个提供 80 MHz 时钟的光纤激光器，以及一个可调谐范围为 770–990 nm 的 OPO（光学参量振荡器）激光器，斯托克斯光束固定在 1031 nm，这些是采集 CARS 信号所必需的。两个光束共用一个光阑。
<ol>
	<li>在将样品送至显微镜之前，打开CARS激光器并预热至少1小时，对CARS激光进行校准，并对显微镜的聚光镜光学系统和光圈进行科勒照明调节，以实现前向CARS成像。 
	注意：此步骤对CARS显微镜的正常运行至关重要。
	<ol>
		<li>为实现两束激光（泵浦光和斯托克斯光）的空间对准，通过CARS激光器的图形用户界面（GUI）访问两个内部位置敏感探测器（PSD）。</li>
		<li>利用CARS激光器GUI中的延迟功能实现时间对准，该功能可帮助重叠由于波长不同而具有不同色散特性的两束激光（泵浦光和斯托克斯光）的脉冲。因此，泵浦光和斯托克斯光的时空重叠均通过用户在GUI中的输入完成。</li>
		<li>调节外部潜望镜（装置的最后两个反射镜），将空间上重叠的两束激光对准显微镜扫描头的反射镜中心。</li>
		<li>为获得最佳的前向CARS非共聚焦检测效果，请确保聚光镜已完成科勒照明调节（即聚光镜已居中并对焦于光圈，以实现均匀照明）。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>对于免疫荧光共聚焦成像和CARS成像，将配备前向和背向CARS非共聚焦探测器（NDDs）的CARS激光器与一台带有可见光激光器的共聚焦显微镜整合使用，以进行荧光成像（图2）。</li>
	<li>将组织切片置于带有盖玻片的培养皿中（用于倒置显微镜观察），加入PBS以防止组织干燥，并使用玻璃压片使组织紧贴盖玻片。</li>
	<li>使用60倍、数值孔径（NA）为1.2的红外校正水浸物镜获取z轴层扫图像或单张图像，该物镜可用于收集背向CARS信号，并通过0.55 NA的聚光镜收集前向CARS信号，以成像如斜方体旁正中核（MNTB）等脑区。
	<ol>
		<li>通过CARS激光器GUI设置泵浦/探测光功率约为600 mW，斯托克斯光功率为300 mW。这些激光功率值由系统内部测量。两束激光在样品位置的实际功率均低于25 mW，对组织样品是安全的。</li>
		<li>实现泵浦光和斯托克斯光在空间和时间上的重叠。将OPO调谐至797.2 nm，从而产生650 nm的CARS波长。由于处于较高能级，返回基态时产生的信号为反斯托克斯散射（蓝移）信号。</li>
		<li>使用带通滤光片（640–680 nm）在背向或前向非共聚焦探测器中捕获CARS信号，随后依次检测免疫荧光标记（本例中为荧光标记的尼氏染色）。 
		注意：尼氏体神经元胞体标记物不会被CARS 640–680 nm带通滤光片捕获，因此可在下述图像中实现荧光与CARS成像的结合。</li>
		<li>CARS信号与荧光信号不共用光电倍增管（PMT）。使用这些设置可优化脂质信号，从而选择性地成像脑区的髓鞘化情况。 
		警告：必须对用户进行激光束防护</li>
	</ol>
	</li>
	<li>将图像保存为.oib文件格式，以便导入图像分析软件进行进一步定量分析（图3）。</li>
</ol>
<img alt="显示激光合束器、PMT 和非线性光学显微镜物镜的CARS装置示意图。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64013/64013fig02.jpg" data-altupdatedat="1788282455000" data-alt="图2"> 
图2：CARS仪器示意图，显示CARS激光（红色箭头）以及集成在激光扫描共聚焦显微镜上的非降扫描（NDD）反射和透射检测光路。 在透射NDD模式下，我们采集C-H键的CARS信号（深红色箭头）和515 nm的SHG（二次谐波生成）信号（橙色箭头）。在反射NDD模式下，我们采集C-H键的CARS信号（深红色箭头）和2PE（双光子发射）自发荧光信号（浅蓝色箭头）。依次地，可采集荧光共聚焦图像（可见光激光用绿色箭头表示，共聚焦检测用蓝色箭头表示）。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64013/64013fig02large.jpg" target="_blank">请点击此处查看该图的放大版本。</a>
<img alt="比较蒙古沙鼠和小鼠神经元结构的尼氏染色与CARS显微图像，z轴投影分析。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64013/64013fig03v2.jpg" data-altupdatedat="1788282455000" data-alt="图3"> 
图3：CARS可在脑组织（脑干）中显示髓鞘（品红色），同时成像尼氏物质（青色）或荧光标记物。 两个图组分别展示了蒙古沙鼠（单幅图像 M. unguiculatus，图3A、C、E）和小鼠（z轴最大投影 M. musculus，图3B、D、F）脑组织的代表性结果，表明该技术可跨物种应用。图3A、B 显示青色的尼氏物质，C、D 显示品红色的CARS信号，E、F 分别将沙鼠和小鼠的尼氏物质与CARS信号合并显示。两组图像均显示脑干中斜方体内侧核（MNTB）的一个切片。MNTB中的神经元接收来自高度髓鞘化轴突的输入，这些轴突终止于 Held 大终端，这是一种巨型突触27。比例尺为 20 µm。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64013/64013fig03largev2.jpg" target="_blank">请点击此处查看此图的放大版本。</a>

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</ol>

作者声明无利益冲突。

越来越多的研究文献强调了髓鞘在大脑功能中的重要作用13,16,21,28。此外，我们知道髓鞘的厚度和分布模式在多种神经系统疾病中会发生改变，例如多发性硬化（综述见29）、衰老（综述见30）、自闭症20,31以及其他许多疾病。因此，越来越多的研究人员需要在不同的医学状况、动物模型以及日益增多的实验条件下评估脑组织中的髓鞘化情况，这并不令人意外。传统上用于脑组织髓鞘成像的方法包括抗体标记后进行光学显微镜观察，以及电子显微镜（EM）技术。这两种方法均耗时较长，且需要多步骤的组织制备流程，而这些流程可能引入误差并改变组织成分。我们展示了一种替代方法，该方法能够更快地成像髓鞘，从而在...

动作电位是大脑中信息的基本单位，动作电位在轴突中的传导构成了信息处理的一个重要基础1,2,3。神经元通常从多个其他神经元接收传入输入，并在特定的短暂时间窗口内整合这些输入4,5。因此，轴突中动作电位传导的机制受到了研究者的广泛关注。
动作电位在轴突中传导时，会沿着轴突反复再生，以确保可靠传播6。在有颌脊椎动物（gnathostomes）的大多数神经元中，轴突被髓鞘包裹，髓鞘是一种富含脂质的物质，由邻近的少突胶质细胞或施万细胞（均为胶质细胞类型）产生（综述见7,8）。这种髓鞘对轴突具有电绝缘作用，可降低其电容，从而使动作电位的传导更高效、更快速，并减少能量消耗。髓鞘并非均匀覆盖整个轴突，而是以节段形式包裹轴突，节段之间存在短小的间隙，称为郎飞结（综述见9,10）。髓鞘的厚度（控制轴突电绝缘程度）以及郎飞结的间距（控制动作电位沿轴突再生的频率）均会影响动作电位的传导速度（综述见11）。
大量文献表明，髓鞘厚度会影响轴突中动作电位的传导速度12,13,14。此外，轴突髓鞘化的改变可能导致多种中枢神经系统功能障碍15,16,17,18,19,20,21。因此，许多研究工作的重点集中在轴突髓鞘化的测量与表征上也就不足为奇了。髓鞘厚度的测量通常采用电子显微镜技术，但该方法需要大量的组织制备步骤，且难以与免疫组织化学联合使用。然而，还存在一种更快、更简便的测量轴突髓鞘化的方法，即基于相干反斯托克斯拉曼散射光谱（Coherent Anti-Stokes Raman Spectroscopy, CARS）的技术。CARS 激光可调节至不同频率，当调至适合激发脂质的频率时，无需任何额外标记即可实现髓鞘成像22。脂质成像可与标准免疫组织化学相结合，从而实现脂质信号与多个荧光通道的同时成像23。利用 CARS 进行髓鞘成像的速度显著快于电子显微镜，其分辨率虽低于电镜，但已足以检测同类型轴突中细微的髓鞘化差异。

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;麻醉剂：&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 mL 一次性带针注射器，27 GA × 0.5&quot;</td><td>Exel int</td><td>260040</td><td></td></tr><tr><td>致命剂量 +</td><td>Vortech</td><td></td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;手术：&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>弹簧剪刀 - 8 mm 切割刃</td><td>Fine Science Tools</td><td>15024-10</td><td></td></tr><tr><td>标准镊子</td><td>Fine Science Tools</td><td>11027-12</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;灌注：&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>4% 多聚甲醛</td><td>Fisher Chemical</td><td>SF994 (CS)</td><td></td></tr><tr><td>精细剪刀 - 锐利型</td><td>Fine Science Tools</td><td>14063-11</td><td></td></tr><tr><td>凯利止血钳</td><td>Fine Science Tools</td><td>13019-14</td><td></td></tr><tr><td>Millipore H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>针头尖端，23 GA × 1&quot;</td><td>BD precision glide</td><td>305193</td><td></td></tr><tr><td>磷酸盐缓冲液（PBS）：</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>氯化钾</td><td>Sigma</td><td>P9333</td><td></td></tr><tr><td>磷酸二氢钾</td><td>Sigma</td><td>P5655</td><td></td></tr><tr><td>带可变流速的泵或等效设备</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>氯化钠</td><td>Fisher Chemical</td><td>s271-1</td><td></td></tr><tr><td>磷酸氢二钠</td><td>Sigma</td><td>S7907</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;解剖：&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>含 4% PFA 的 50 mL 瓶</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Bochem 化学勺，180 mm</td><td>Bochem</td><td>230331000</td><td></td></tr><tr><td>精细剪刀 - 锐利型</td><td>Fine Science Tools</td><td>14063-11</td><td></td></tr><tr><td>Noyes 弹簧剪刀</td><td>Fine Science Tools</td><td>15011-12</td><td></td></tr><tr><td>一对精细（Graefe）镊子</td><td>Fine Science Tools</td><td>11050-10</td><td></td></tr><tr><td>浅玻璃或塑料托盘，约 10&quot; × 10&quot;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>标准镊子</td><td>Fine Science Tools</td><td>11027-12</td><td></td></tr><tr><td>外科剪刀 - 钝头型</td><td>Fine Science Tools</td><td>14000-20</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;切片：&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>琼脂，植物来源</td><td>RPI</td><td>9002-18-0</td><td></td></tr><tr><td>振动切片机</td><td>Leica</td><td>VT1000s</td><td></td></tr><tr><td>多孔板</td><td>Alkali Sci.</td><td>TPN1048-NT</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;染色：&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>AB 培养基：</td><td></td><td></td><td>1n 1,000 mL Millipore H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td></tr><tr><td>磷酸缓冲液（PB）：</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>磷酸二氢钾</td><td>Sigma</td><td>P5655</td><td></td></tr><tr><td>磷酸氢二钠</td><td>Sigma</td><td>S7907</td><td></td></tr><tr><td>牛血清白蛋白（BSA）</td><td>Sigma life science</td><td>A2153-100g</td><td></td></tr><tr><td>氯化钠</td><td>Fisher Chemical</td><td>s271-1</td><td></td></tr><tr><td>吐温 X-100</td><td>Sigma - Aldrich</td><td>x100-500ml</td><td></td></tr><tr><td>Nissl 435/455</td><td>Invitrogen</td><td>N21479</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;CARS：&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>APE&amp;nbsp;皮秒翡翠激光器</td><td>Angewandte Physik &amp;amp; Elektronik&amp;nbsp;GmbH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>带通滤光片（420–520 nm）</td><td>Chroma Technology</td><td>HQ470/100m-2P</td><td></td></tr><tr><td>带通滤光片（500–530 nm）</td><td>Chroma Technology</td><td>HQ515/30m-2P</td><td></td></tr><tr><td>带通滤光片（640–680 nm）</td><td>Chroma Technology</td><td>HQ660/40m-2P</td><td></td></tr><tr><td>共聚焦显微镜</td><td>Olympus</td><td>FV1000</td><td></td></tr><tr><td>切片转移移液管</td><td>Fisher</td><td>13-711-7M</td><td></td></tr><tr><td>二向色长通滤光片 565 nm</td><td>Chroma Technology</td><td>565dcxr</td><td></td></tr><tr><td>二向色长通滤光片 585 nm</td><td>Chroma Technology</td><td>585dcxr</td><td></td></tr><tr><td>二向色短通滤光片 750 nm</td><td>Chroma Technology</td><td>T750spxrxt</td><td></td></tr><tr><td>玻璃底培养皿</td><td>MatTek</td><td>P35G-0-10-C</td><td></td></tr><tr><td>玻璃压片（10 mm × 10 mm 硼硅玻璃棒）</td><td>Allen Scientific Glass Inc</td><td></td><td></td></tr><tr><td>多光子短通发射滤光片 680 nm</td><td>Chroma Technology</td><td>ET680sp-2p8</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

相干反斯托克斯拉曼光谱（cars）在脑切片髓鞘成像中的应用

Coherent Anti-Stokes Raman Spectroscopy (CARS) Application for Imaging Myelination in Brain Slices

相干反斯托克斯拉曼光谱技术（CARS）是一种经典上由化学家和物理学家使用的技术，用于产生分子特征振动的相干信号。然而，这些振动特征同样存在于脑等解剖组织内的分子中，因此该技术在神经科学领域的应用正变得越来越广泛和实用。例如，CARS 可通过特异性激发这些分子内部的化学键来检测脂质，从而实现对组织不同方面的定量分析，如参与神经传导的髓鞘。此外，与其他常用于髓鞘定量的技术相比，CARS 还可被设置为与免疫荧光技术兼容，从而实现与其他标记物（如钠离子通道或突触传递的其他组分）的共标记。髓鞘化变化在多发性硬化等脱髓鞘疾病，以及脆性 X 染色体综合征或自闭症谱系障碍等其他神经系统疾病中的研究正成为一个新兴的重要领域。总之，CARS 可以以创新的方式被用于解答神经科学中的紧迫问题，并为多种不同神经系统疾病的潜在机制提供证据。

相较于其他技术，CARS显微成像最大的优势之一是其与荧光成像的兼容性23。图1展示了CARS光谱与使用免疫荧光标记的尼氏染色光谱的对比，显示两者光谱重叠极少或无重叠。图2展示了CARS与共聚焦显微成像结合时的激光系统设置。图3展示了两个代表性图像，分别为来自沙鼠和小鼠的单层图像和z轴层扫最大投影图像，这些图像可通过CARS成像获得，显示了细胞体（青色）和髓鞘信号（品红色）。

可视化髓鞘化是许多研究神经系统研究人员的重要目标。CARS 是一种可与免疫荧光兼容的技术，能够直接对脑组织等样本中的脂质进行成像，从而揭示髓鞘等特化结构。

相干反斯托克斯拉曼光谱（CARS）在脑切片髓鞘成像中的应用

相干反斯托克斯拉曼光谱（CARS）是一种经典上由化学家和物理学家采用的技术，用于产生具有特征性的相干信号……

该技术可用于对脑组织切片中的髓鞘进行成像。髓鞘形成在动作电位的传导过程中起着重要作用，了解髓鞘有助于我们理解大脑功能。与电子显微镜等技术相比，CARS 技术的主要优势在于它是一种光学显微技术，可轻松与其他荧光成像技术（如免疫组织化学中所用的荧光成像）结合使用。多种医学状况与髓鞘形成的变化有关，例如多发性硬化症、衰老和自闭症。理解这些变化将有助于我们认识潜在的医学问题。在此情况下，CARS 激光被调谐用于成像脂质，或特异性地成像 CH2 键。在大脑中，脂质的最大来源是髓鞘。因此，本技术用于对脑组织中的髓鞘进行成像。当需要对其他类型组织中的脂质进行成像时，也可采用相同的方法。调谐和校准CARS激光器需要相当的专业知识，最好由激光或光学显微镜专家来完成。按照文稿中所述方法制备组织后，对游离切片进行尼氏（Nissl）染色和抗体介质染色以显示细胞体，然后将切片置于标准实验室摇床上，在室温下孵育30分钟。在将样品送至显微镜前，需提前至少一小时开启CARS激光器并进行预热，随后通过空间重叠泵浦光与斯托克斯光激光束来校准CARS激光器，并调节两束激光之间的时间延迟。为前向CARS成像，对显微镜的聚光镜光学元件和光圈进行调色，然后调节外部反射镜系统，使空间上重叠的两束激光准确对准显微镜扫描头的反射镜。为了实现最佳的前向CARS非共轭检测，务必确保聚光镜已完成调色。进行免疫荧光、共聚焦成像和相干反斯托克斯拉曼散射（CARS）成像时，通过配备可见光激光器用于荧光成像的共聚焦显微镜，将CARS激光器连接至前向和背向CARS非扫描探测器。现在，将切片置于底部带有盖玻片的培养皿中，并加入磷酸盐缓冲液（PBS）以防止组织干燥。同时，使用玻璃压片使组织紧贴盖玻片。使用图形用户界面设置共聚焦成像中CARS和荧光信号的图像采集参数。将样品放置在显微镜载物台上，对样品进行聚焦，并采集图像。CARS信号的波长范围为640至660纳米，其光谱与尼塞尔标记的免疫荧光标记物之间无明显重叠，表明CARS信号可与免疫荧光信号同时使用。采用Nisel染色法对蒙古沙鼠和小鼠脑组织中的细胞体进行可视化，同时利用CARS成像技术对髓鞘进行可视化，表明该技术可跨物种应用。两组图像均显示脑干中斜方体旁正中核的一个切面。CARS的分辨率低于电子显微镜，约为数百纳米量级。可以使用标准的图像分析软件（如 ImageJ）对图像进行分析，以量化感兴趣的参数，例如髓鞘厚度或长度。

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相干反斯托克斯拉曼光谱（CARS）在脑切片中成像髓鞘形成的应用

采用三种单波长短脉冲激光的组合来产生相干反斯托克斯拉曼散射（CARS）和双共振CARS（DR-CARS）。这两种信号的差异可显著增强原本难以检测的相干拉曼信号的灵敏度，从而实现对弱拉曼散射体的成像。...

双共振相干反斯托克斯拉曼散射（CARS）对生物结构的差异成像

来源： Espinoza, R., et al．利用实时双色受激拉曼散射成像技术对小鼠脑组织进行组织学诊断． J. Vis. Exp. (2022)．...

双色受激拉曼散射成像小鼠脑组织

来源：McCullagh, E. A., 等。相干反斯托克斯拉曼光谱（CARS）在脑切片髓鞘成像中的应用。J. Vis. Exp.

利用相干反斯托克斯拉曼光谱成像小鼠脑组织中的髓鞘化神经元

基于分子键固有振动的相干反斯托克斯拉曼散射（CARS）显微技术，能够实现无需标记的化学选择性活细胞成像。本文介绍了在基于飞秒钛宝石激光器和OPO激光器的标准多光子激光扫描显微镜上，实现一种互补显微技术的方法。...

在基于钛宝石和光参量振荡器激光器的标准激光扫描显微镜上实现相干反斯托克斯拉曼散射（CARS）系统

本文介绍了一种从小鼠小脑制备脑片器官型培养物的方法，并通过免疫组织化学染色显示髓鞘，适用于研究中枢神经系统中髓鞘形成及再髓鞘化的机制。...

制备及髓鞘化器官型小脑切片培养物的免疫染色

受激拉曼散射（SRS）显微技术能够实现对特定化学基团的选择性、无标记成像，已被有效用于体内脂质分子的成像。本文简要介绍SRS显微技术的原理，并描述其在秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis...

无需标记的脂质储存动态成像：利用受激拉曼散射显微镜对秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans）的研究

受激拉曼散射（SRS）显微技术是一种强大、无损且无需标记的成像技术。其中一个新兴应用是受激拉曼组织学，该方法利用蛋白质和脂质拉曼跃迁处的双色SRS成像生成类似苏木精和伊红染色的图像。本文中，我们展示了一种用于组织诊断的实时双色SRS成像方案。...

小鼠脑组织诊断的实时双色受激拉曼散射成像

本文直接比较了集成在同一显微镜平台上的受激拉曼散射（SRS）和相干反斯托克斯拉曼散射（CARS）在分辨率、灵敏度和成像对比度方面的性能。结果表明，CARS 具有更高的空间分辨率，SRS...

高光谱受激拉曼散射与相干反斯托克斯拉曼散射显微成像在化学成像中的直接比较

我们提出了一种利用宽带受激拉曼散射（SRS）显微技术获取化学图像的实验方案。该方案基于采用多通道差分锁相检测的SRS显微镜，详细描述了样品制备、SRS仪器调节以及化学计量学方法，用于解析化学非均质样品中不同组分的成分信息。...

基于宽带受激拉曼散射显微技术的多重化学成像

利用结合无标记光学成像模式的多模态平台，我们开发了一种用于可视化和定量分析细胞动态与代谢的方案。通过多光子荧光、二次谐波生成和受激拉曼散射显微成像，我们能够获得细胞和分子环境的整体概览。...

用于研究细胞代谢的多模态光学成像平台

了解相干反斯托克斯拉曼光谱技术如何用于脑切片髓鞘形成成像。该方法可与免疫荧光技术结合，帮助研究人员研究多发性硬化症等神经系统疾病中的髓鞘变化。

相干反斯托克斯拉曼光谱（CARS）在脑切片髓鞘成像中的应用

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