一种稳定建立的溶血磷脂酸胆碱诱导小鼠局灶性脱髓鞘两点注射模型

我们的模型与脱髓鞘疾病高度相关，尤其是多发性硬化症，并且有助于推动相关临床研究的发展。该方案是一种详细的实验操作流程，可通过手术方法在小鼠中快速、稳定地直接诱导严重的脱髓鞘病变。

初次尝试该技术时，请保持耐心，并确保坐标准确。首先将一根32号针头连接至5微升注射器上。抽取5 µL LPC溶液用于制备注射液。

接着，通过轻捏脚趾无反射且呼吸平稳来确认小鼠的麻醉深度。将小鼠置于立体定位仪中，背侧朝上，用鼻罩和门齿夹固定头部，并使用双侧耳杆将小鼠固定在立体定位装置上。

确保耳杆水平，头部保持水平且稳定。用碘伏擦拭头部皮肤进行消毒。然后使用手术刀沿头皮正中线切开一个约1.5厘米的小切口，暴露颅骨。

用浸有1%过氧化氢的棉签擦拭颅骨表面，直至暴露前囟、人字缝和后囟。将注射器置于立体定位仪上。确保动物头部处于水平位置，并定位胼胝体。

确定注射位点后，记录坐标，并用记号笔在颅骨上做标记。使用颅骨钻轻轻钻开标记部位，注意避免出血。

缓慢将针头移动至指定坐标。为诱导胼胝体脱髓鞘，以每分钟0.4微升的速度在每个注射位点注入2微升LPC溶液。注射完成后，将针头在每个位点额外留置10分钟。

最后，使用4-0缝线缝合皮肤，并在10分钟内等待动物苏醒。代表性图像显示了通过劳克坚牢蓝（Luxol fast blue）染色检测到的白质病灶。结果显示，在注射后10天和28天均可观察到胼胝体稳定的脱髓鞘现象。

不同时间点脱髓鞘区域的定量分析结果如图所示。通过免疫荧光染色检测降解的髓鞘碱性蛋白，可见LPC注射组在注射后第10天dMBP显著增加，表明胼胝体出现髓鞘丢失。对髓鞘碱性蛋白（MBP）表达的Western blot分析显示，注射LPC后MBP显著减少。

以β-actin作为上样对照，用于测定基础表达水平。透射电子显微镜图像证实，假手术组和LPC注射组的胼胝体均存在髓鞘的超微结构。GST-pi是少突胶质前体细胞（OPC）分化成熟过程的标志物。

鞘内注射 LPC 10 天后，GST-pi 较假手术组减少。同时，少突胶质细胞的增殖能力可通过增殖的少突胶质细胞与总少突胶质细胞系细胞的比例来反映。注射后第 10 天，该比例越高，表明少突胶质细胞的增殖越多。

代表性图像显示了各组小鼠在平台存在时以及移除平台后的游泳路径。结果表明，在两点LPC注射模型中，脱髓鞘小鼠的空间记忆能力显著受损。在进行该操作时，务必确保注射速率准确，并在每个注射位点额外留针10分钟。