使用量子点介导的免疫标记，然后通过透射电子显微镜可视化心脏中蛋白质的亚细胞定位

确定蛋白质的亚细胞定位对于描述其正常功能和参与其中的机制至关重要。这种方法可以帮助我们在超结构水平上可视化蛋白质的亚细胞定位。量子点介导的免疫标记更稳定，抗光漂白，具有自己的发射光谱，产生高电子密度，并且在组织中表现出更高的效率和保留性，在组织中的渗透性更好。

该过程的多个步骤，即固定、蚀刻、阻塞和最佳量子点浓度，是优化具有挑战性的步骤。建议尝试所用试剂的多个时间点和浓度。另一个挑战是处理网格，只有耐心，当然还有练习才能解决。

展示该程序的将是邮政研究员Chowdhury Abdullah，我实验室的研究生Naznin Remex和我们电子显微镜服务的电子显微镜主管Brandon Hartman。麻醉小鼠并打开胸腔后，使用冰冷的3%戊二醛在0.1摩尔二甲胂酸钠缓冲液中大量注射心脏两分钟。使用5×8英寸的25号针，利用重力压力将固定剂引入心脏。

在心脏开始充满固定剂后，立即抬起心脏的顶点以缓解压力。在距离心脏一到两毫米的地方切开下面的血管，让液体排出。解剖心脏。

取出心房并将心室放入含有冰冷的3%戊二醛和0.1摩尔二甲胂酸钠的培养皿中。固定 30 到 60 分钟后切开蝴蝶，然后将心室放回培养皿中。使用一立方毫米的小立方体手术刀片切碎心脏。

将解剖的心脏组织固定并浸入戊二醛和二甲胂酸盐溶液中，在4摄氏度下24小时。固定24小时后，在0.1摩尔二甲胂酸钠缓冲液中洗涤组织两次，持续20分钟。从二甲胂酸钠缓冲液中取出组织，并在室温下浸入2%四氧化锇溶液中四小时。

渗透后，将组织在室温下浸入2%乙酸钠溶液中10分钟。接下来，将组织在室温下浸入2%乙酸铀酰溶液中一小时。乙酸铀酰染色后，通过分级醇和丙酮依次使组织脱水。

如手稿中所述，将脱水组织嵌入低粘度环氧树脂中。将纸巾放入8毫米微模具中的新鲜树脂中，并在70摄氏度下固化过夜。找到感兴趣的区域后，使用超45度刀，产生淡金色超薄切片。

将这些超薄部分放在 200 目铜网格的暗淡侧。通过将20微升蚀刻液中高碘酸盐放在干净的石蜡膜上来揭开抗原，从而开始染色。将带有组织切片的干燥网格放在蚀刻溶液的液滴上。

在室温下将截面网格留在溶液上30分钟。通过将蚀刻的组织切片放在蒸馏水滴上60秒来洗涤它们。通过在室温下将切片网格放在0.05摩尔甘氨酸溶液的液滴上10分钟来阻止残留醛。

在滤纸上吸干网格的边缘以去除残留的甘氨酸溶液。将切片网格置于室温下10至20微升封闭溶液中25分钟。在滤纸上吸干网格边缘，并将网格部分放在抗体稀释剂上，在室温下调节10分钟。

用一抗孵育网格切片在加湿室中孵育一小时30分钟。吸干网格并用抗体稀释剂洗涤网格部分两次，每次五分钟。用生物素化的二抗在加湿室中孵育网格部分一小时。

网格干燥后，用抗体稀释剂洗涤网格部分两次，每次五分钟。在室温下在市售链霉亲和素偶联QD中孵育网格部分一小时。用铝箔覆盖腔室来防止暴露在光线下。

使用滤纸吸干网格边缘后，通过将网格部分放在水滴上两分钟来清洗网格部分，然后吸干网格边缘以干燥。将标本支架插入显微镜柱中，接合泵开关以评估测角仪，然后将标本支架完全插入显微镜柱中。专注于所需的区域。

使用高速数码相机捕获图像并以tif格式保存文件。线粒体膜、溶酶体和内质网或肌质网膜线粒体界面显示存在 Sigmar1 标记的量子点。使用兔免疫球蛋白G和量子点作为抗Sigmar1兔一抗的同种型对照观察心脏切片。

在制定此协议时要考虑的一件重要事情是揭示抗原的暴露时间。如果组织切片蚀刻时间过长，偏高周期溶液将在薄组织切片中产生穿孔。量子点介导的标记在肿瘤检测、肿瘤分子和免疫状态分析以及组织成像方面受到关注，为医学诊断铺平了一条新途径。

量子点也可用于通过光动力疗法治疗肿瘤，并通过向眼睛输送药物来治疗眼科异常。