调查低成本方法，以测量秀丽隐杆线虫的寿命和健康寿命

该协议提出了用于在海秀丽隐杆线虫中老化的最低成本和最低技术方法。衰老生物学中有影响力的模式生物。这些方法的最大优点是易于实施，使用低成本的设备和材料。

使它们适合任何研究人员，无论经验或可用资金如何。随着老龄化研究，人群中的健康状况存在自然差异。因此，在健康、吃得饱和紧密同步的动物身上进行实验至关重要。

为了确保撕裂残疾 开始准备一升线虫生长培养基或 NGM 螺旋钻板。将 2.5 克 pep 调、3.0 克氯化钠和 20 克螺旋钻加入带搅拌棒的一升烧瓶中，并加入蒸馏水至最终体积为 970 毫升。使用标准高压灭菌器或培养基灭菌器在一升烧瓶中对NGM螺旋钻溶液进行灭菌。

让溶液搅拌直至冷却至 60 至 75 摄氏度。当溶液冷却时，将珠浴加热到 65 至 70 摄氏度。一旦 NGM 螺旋钻溶液冷却到 60 至 75 摄氏度。

加入液体添加剂，让溶液完全混合五分钟。然后将烧瓶浸入65至70摄氏度的珠浴中，以防止介质在倒入板中时凝固。将9至11毫升的溶液移入每个60毫升的平板中。

完成后，将移液器放回加热的溶液中以保持温度并防止任何介质在移液器中凝固。对所有板重复该过程，并让NGM a板凝固过夜。固化后，使用它们将细菌播种板，或在四摄氏度下将板存放在密封容器中长达三个月，以通过漂白同步蠕虫。

通过将少量M9溶液倒入含有蠕虫的平板上来收集线虫，而不会使培养皿过满。然后轻轻旋转M 9溶液，使蠕虫从细菌草坪上松开。接下来，用血清移液管将成年妊娠蠕虫收集到15毫升管中。

避免用移液器吸头刺穿螺旋钻。通过以1100倍G离心30秒沉淀动物，并吸出上清液。在蠕虫颗粒中加入五毫升新鲜制备的漂白溶液，每隔几分钟在解剖显微镜下检查蠕虫，并间歇性剧烈摇晃，直到所有成虫体溶解，只剩下卵留在混合物中。

接下来，通过将鸡蛋漂白剂混合物以 1100 倍 G 旋转 30 秒并吸出漂白溶液来沉淀鸡蛋。然后通过加入多达15毫升的M9溶液并倒置试管四到五次来洗涤颗粒状的鸡蛋，以分散鸡蛋和溶液。再次，以1100倍G离心管30秒以沉淀鸡蛋并吸出M9溶液。

进行四次洗涤以消除鸡蛋混合物中的任何漂白剂。第四次洗涤离心后，根据漂白蠕虫的总数，将M9溶液从100微升吸出到2毫升。彻底摇动鸡蛋以分解团块，并确保鸡蛋完全重悬在 M9 溶液中。

或者，通过在15毫升编年史管中的蛋丸中加入10至12毫升M9溶液，可以将L一逮捕动物以实现更紧密的时间同步。让蠕虫在 24 摄氏度的旋转器中旋转长达 20 小时。为了近似鸡蛋或L一浓度移液器将四微升鸡蛋混合物移液到装有细菌的NGM板上。

然后计算并计算每微升培养基存在的鸡蛋。重复计数三到四次以提高近似值，基于近似板，将适当数量的卵或L一只被捕的动物放到接种有所选细菌的NGM螺旋钻板上。通过捶打来测量蠕虫的机车行为。

在解剖范围内将少量第一天成虫从NGM螺旋钻板移动到10至20微升M9溶液上。然后一次专注于一个蠕虫，并计算标本在 15 秒内从凹形变为凸形的次数。使用手动计数器和计时器，对 10 到 15 条蠕虫重复该过程。

将蠕虫老化到所需年龄，并在所有所需年龄重复捶打测量。如所见，较老的蠕虫以明显较慢的速度跳动。用于数量和生育率测量。

在 10 到 15 条秀丽隐杆线虫中，将 L 个蠕虫挑出到单独的 NGM 螺旋钻板中，接种有所选细菌。让动物在 20 摄氏度下生长过夜，并确保新播种的一批板为第二天做好准备。为了测量秀丽隐杆线虫产下的卵量，每12至24小时将成虫转移到新鲜的NGM螺旋钻叶片中，每12至24小时接种一次掠夺的细菌，持续7至8天或直到卵不再可见并计算产在盘子上的卵数。

为了测量秀丽隐杆线虫的育雏大小，每12至24小时或7至8天或直到后代不再可见，将成虫转移到接种有细菌的新鲜NGM螺旋钻板上。将所有装有鸡蛋的盘子保持在 20 摄氏度。转移蠕虫两天后。

在盘子上计算发育的后代。计算L四期或更早的所有活蠕虫和发育中的蠕虫，以确保F第二代不会混淆结果。计数时从盘子中取出所有蠕虫。

在再次评分之前，将板再保持一到两天，以确保不会错过任何孵化或发育延迟的动物。灭菌方法对野生型N2线虫寿命的影响表明，生长在NGM螺旋钻板上的蠕虫寿命变化与在NGM螺旋钻FUDR板上生长的蠕虫或生长在NGM螺旋钻板上的glp 4 BN2突变动物相似。短命的HSF一击倒动物在所有条件下的寿命都显着下降。

与野生型对照相比，HSF一的产卵数量和育雏大小显著减少。一些HSF一过表达的动物表现出完全不育，表明生殖健康与寿命呈负相关。捶打率提供了一种测量衰老期间健康状况的可靠方法，通过与年轻动物相比，老年动物的捶打显着减少来衡量。

应激生存是测量机体健康的可靠测定，与DMSO对照相比，引起网状应激的图尼霉素导致寿命缩短，无论浓度如何。高浓度百草枯会显著缩短使用寿命，而低浓度百草枯则因激素效应而延长了使用寿命。在耐热性测定中，HSF one的过表达增加了所有寿命和老化实验在37摄氏度下的耐热性。

重要的是要记住，灭菌技术会对机体健康产生多效性作用，从而影响结果。如果设备和基础设施可用，则存在许多其他补充方法来测量健康跨度，包括转录，翻译蛋白聚集，细胞器，形态和代谢功能的测量。