Name: 侵入斑马鱼大脑的胶质母细胞瘤细胞微管动力学的实时成像 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-07-29T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 29 s
Description: 了解胶质母细胞瘤细胞微管动力学的实时成像方法，利用斑马鱼模型进行原位正位注射和高分辨率活体成像。该技术可在体内高时空分辨率下分析细胞骨架动态，为研究脑癌侵袭机制提供新工具。

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我们非常感谢法国巴斯德研究所P. Herbomel博士及其实验室，特别是Valérie Briolat和Emma Colucci-Guyon，为我们提供了斑马鱼品系和显微注射板用的塑料模具，并在斑马鱼实验操作方面提供了宝贵的专业指导。我们谨向UtechS光子生物成像平台（C2RT，法国巴斯德研究所，受法国国家科研署France BioImaging及ANR-10-INBS-04项目“未来投资计划”资助）致以诚挚谢意。本研究得到了抗癌联盟（EL2017.LNCC）、法国国家科学研究中心、巴斯德研究所以及Mrs. 的慷慨捐赠支持。&#160;玛格丽特·米歇尔（Marguerite MICHEL）和波奎先生（Mr. Porquet）

作者声明无利益冲突。

以单细胞分辨率成像肿瘤异种移植模型有望成为深入理解胶质母细胞瘤（GBM）生物学特性的不可或缺工具。在小鼠PDX模型中进行的活体成像已为揭示GBM细胞集体侵袭脑组织的机制带来了重要发现。18然而，迄今为止，时空分辨率尚不足以揭示调控胶质母细胞瘤（GBM）侵袭的蛋白质动态过程。我们推测，通过将GBM细胞原位移植到透明的斑马鱼幼鱼中，并结合高分辨率的活体成像技术，可对微管（MTs）等细胞骨架蛋白进行足够精细的分析，从而研究其在侵袭过程中的动态变化 原位 胶质母细胞瘤浸润
该方法的关键步骤在于GBM细胞的制备和显微注射操作。不健康或解离不充分的细胞会相互聚集或黏附于毛细管壁，从而阻塞注射液流。此外，细胞在毛细管中需达到足够浓度，以最小化注射体积并实现细胞的大批量植入。若注射体积过大且细胞浓度过低，则可能导致多个有时相互混杂的肿瘤病灶，使其侵袭指数难以测量。在我们操作经验中，手动操控油压式显微注射仪相比此前类似模型中使用的气压驱动电子显微注射仪，能够更精确地控制注射流速19。这对...

细胞运动是一个程序化的过程，需要建立极性轴以及产生驱动力的细胞骨架重排。肌动蛋白的聚合及其与肌球蛋白的相互作用被认为是细胞运动所需突出力和收缩力的主要来源1。微管被认为在细胞极化和迁移过程中的方向持久性中起主要作用2。近年来的研究还表明，微管能够在三维环境中形成并稳定细胞突起，以支持细胞侵袭过程中的力学压缩力3。更近的研究发现，微管还直接参与了黏着斑处的力传导以及力学敏感性迁移4。微管正端动态所表现出的动态不稳定性，表现为反复发生的聚合（生长）和解聚（缩短）阶段，这一过程受到多种微管结合蛋白和细胞内信号通路（如由RHO-GTP酶调控的信号通路）的共同调控5,6,7。微管网络在细胞迁移与侵袭中的重要作用，使得对微管动态的研究成为深入理解免疫细胞归巢、伤口愈合以及癌症侵袭机制的关键环节。
癌细胞逃离原发性肿瘤核心、在组织中扩散并形成继发性肿瘤的能力，是阻碍50年前宣布的抗癌战争取得全球性成功的关键步骤8,9。其中最大的挑战之一在于理解癌细胞如何主动侵袭组织。关键的侵袭机制依赖于与非肿瘤细胞迁移相同的原理10。然而，癌细胞迁移具有其特异性11，这促使人们需要更深入地表征此类迁移行为。特别是由于肿瘤微环境在癌症进展中起着关键作用12，因此在相关的生理背景下观察和分析癌细胞的侵袭过程，对于揭示癌细胞扩散的机制至关重要。
微管在癌症进展中起核心作用，可同时维持细胞增殖和侵袭。对微管动态进行精确分析 原位 有助于识别两种过程中微管改变剂（MTA）。微管动力学会在环境变化时发生显著改变。 体外，当细胞在三维凝胶中嵌入时，使用诺考达唑等微管去稳定剂处理可抑制细胞突起的形成，而在二维细胞迁移中则影响甚微13,14尽管技术上具有挑战性，但活体成像技术的进步使得 体内 分析癌细胞侵袭过程中微管动力学的变化。例如，在小鼠皮下异种移植的纤维肉瘤细胞中观察微管发现，肿瘤相关巨噬细胞会影响肿瘤细胞中的微管动力学15然而，这些小鼠模型需要复杂的手术操作，对于较难接近的癌症（如高度侵袭性的脑肿瘤胶质母细胞瘤，GBM）而言，仍不尽如人意。
尽管平均生存期仅为15个月16，关于胶质母细胞瘤（GBM）在脑实质内的播散模式，以及维持GBM细胞在脑组织中侵袭的关键分子机制，目前仍知之甚少。小鼠原位异种移植（PDX）模型的改进以及颅窗技术的建立，为研究GBM细胞侵袭提供了新的前景17,18然而，由于成像质量欠佳，该模型目前主要仅能用于浅表异种移植瘤的纵向成像，尚无法成功应用于细胞骨架蛋白的亚细胞成像研究。此外，在后续的 &#34;3Rs&#34; 为减少啮齿类动物的使用并以低等脊椎动物替代，已建立了多种替代模型。
利用斑马鱼（Danio rerio）幼鱼中观察到的原始免疫特性，已建立将胶质母细胞瘤（GBM）细胞原位注射至鱼脑的方法19,20,21。在发育中的中脑脑室附近注射，可重现大多数人类GBM的病理生理特征21，并观察到与人类相同的GBM侵袭模式——血管共选项22。得益于鱼体幼体的透明特性，该模型可实现对GBM细胞从脑室周围区域（即大多数GBM被认为起源的部位）向脑组织侵袭过程的可视化观察23。
因为微管（MTs）对胶质母细胞瘤（GBM）细胞的侵袭至关重要 体外24,25，需要更深入地表征微管动力学，并鉴定细胞侵袭过程中的关键调控因子。然而，迄今为止，利用斑马鱼原位模型产生的数据尚未包含对侵袭过程中微管动力学的亚细胞水平分析。本文提供了一种研究微管动力学的实验方案 体内 并确定其在脑癌侵袭过程中的作用。在对微管进行稳定标记后，将胶质母细胞瘤（GBM）细胞在受精后3天（3 dpf）显微注射至斑马鱼幼鱼脑内，并在细胞于脑组织中迁移过程中以高时空分辨率进行实时成像。活体荧光微管成像可实现对微管正端动态的定性与定量分析。此外，该模型还可用于实时评估微管靶向药物（MTAs）对微管动态性及GBM细胞侵袭特性的影响。该方法具有较低侵入性，可同时处理大量幼鱼，且药物可通过鱼水直接施加，操作简便，因此在临床前药物测试中具有重要应用价值。

<table><tbody><tr><td>&lt;强&gt;胶质母细胞瘤细胞培养&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>胎牛血清</td><td>Eurobio</td><td>CVFSVF00-01</td><td>试剂</td></tr><tr><td>MEM NEAA</td><td>Gibco</td><td>11140-050</td><td>试剂</td></tr><tr><td>改良型伊格尔培养基</td><td>Eurobio</td><td>CM1MEM18-01</td><td>试剂</td></tr><tr><td>青霉素&amp;ndash;链霉素</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td>试剂</td></tr><tr><td>U-87 MG</td><td>ECACC</td><td>89081402-1VL</td><td>细胞</td></tr><tr><td>&lt;强&gt;慢病毒生产&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD FACSAria III</td><td>BD生物科学</td><td></td><td>仪器</td></tr><tr><td>BD FACSDiva 软件 v8.0</td><td>BD生物科学</td><td></td><td>软件</td></tr><tr><td>HEK-293T</td><td>默克</td><td>12022001</td><td>细胞</td></tr><tr><td>pMD2.G</td><td>Addgene</td><td>质粒 #12259</td><td>试剂</td></tr><tr><td>psPAX2</td><td>Addgene</td><td>质粒 #12260</td><td>试剂</td></tr><tr><td>超速离心机 Optima XPN-80</td><td>贝克曼库尔特</td><td></td><td>仪器</td></tr><tr><td>&lt;强&gt;细胞传代与染色&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>dPBS</td><td>Gibco</td><td>14190-094</td><td>化学</td></tr><tr><td>&lt;em&gt;Hoechst 34580&lt;/em&gt;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>63493</td><td>化学</td></tr><tr><td>胰蛋白酶-EDTA（0.05%）</td><td>Gibco</td><td>25300-054</td><td>试剂</td></tr><tr><td>&lt;强&gt;斑马鱼养殖&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>荧光体视显微镜 LEICA M165FC</td><td>LEICA</td><td>https://www.leica-microsystems.com/fr/produits/stereomicroscopes-et-macroscopes/informations-detaillees/leica-m165-fc/</td><td>仪器</td></tr><tr><td>亚甲蓝水合物</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M4159</td><td>化学</td></tr><tr><td>N-苯基硫脲（PTU）</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7629-25G</td><td>化学</td></tr><tr><td>细尖移液管</td><td>萨姆科科学公司</td><td>232</td><td>仪器设备</td></tr><tr><td>大球泡移液管 3 mL</td><td>萨姆科科学公司</td><td>225</td><td>仪器设备</td></tr><tr><td>三卡因（氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐）</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>货号：A5040</td><td>化学</td></tr><tr><td>Volvic 水源水</td><td>DUTSCHER DOMINIQUE SAS</td><td>999556</td><td>试剂</td></tr><tr><td>&lt;强&gt;异种移植&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>24孔板</td><td>TPP</td><td>92024</td><td>仪器设备</td></tr><tr><td>硼硅酸盐玻璃毛细管（1.0 OD×0.58 ID×150 L mm）</td><td>哈佛仪器</td><td>#30-0017 GC100-15</td><td>仪器设备</td></tr><tr><td>CellTram oil vario 显微注射仪</td><td>Eppendorf</td><td>5176000.025</td><td>仪器</td></tr><tr><td>微量上样移液器吸头（Microloader）20&amp;micro;L</td><td>Eppendorf</td><td>&amp;nbsp;5242956003</td><td>仪器设备</td></tr><tr><td>显微操作仪</td><td>NARISHIGE</td><td>https://products.narishige-group.com/group1/injection/chinese.html</td><td>仪器设备</td></tr><tr><td>矿物油</td><td>Sigma</td><td>M8410-100ml</td><td>仪器设备</td></tr><tr><td>体视显微镜</td><td>奥林巴斯</td><td>KL 2500 LCD</td><td>仪器</td></tr><tr><td>通用毛细管架</td><td>Eppendorf</td><td>5176190002</td><td>仪器设备</td></tr><tr><td>垂直式移液器拉制仪</td><td>KOPF (Roucaire)</td><td>Model 720</td><td>仪器</td></tr><tr><td>&lt;强&gt;活体成像&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>3.5 cm 玻璃底视频成像培养皿</td><td>MatTek Life Sciences，马萨诸塞州，美国</td><td>P35G-1,5-14-C</td><td>仪器设备</td></tr><tr><td>采集软件：NIS-Elements-AR 版本 5.21</td><td>尼康</td><td></td><td>软件</td></tr><tr><td>加热块</td><td>特尼</td><td>DRI-BLOCK DB-2D</td><td>仪器设备</td></tr><tr><td>显微镜主机 Nikon Ti2E</td><td>尼康</td><td></td><td>仪器</td></tr><tr><td>sCMOS 相机 Prime 95B</td><td>光度测量</td><td></td><td>仪器</td></tr><tr><td>sCMOS相机Orca Flash 4</td><td>Hammatsu</td><td></td><td>仪器</td></tr><tr><td>超纯低熔点琼脂糖</td><td>Invitrogen</td><td>16520-050</td><td>化学</td></tr><tr><td>Yokagawa CSU-W1 转盘装置</td><td>滨松</td><td></td><td>仪器</td></tr><tr><td>&lt;强&gt;药物处理&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D2650-100ML</td><td>化学</td></tr><tr><td>诺考达唑</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1404-2MG</td><td>化学</td></tr><tr><td>&lt;强&gt;图像分析&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Imaris 9.5.1 软件</td><td>Oxford Instruments</td><td></td><td>软件</td></tr><tr><td>ImarisFileConverter 9.5.1</td><td>Oxford Instruments</td><td></td><td>软件</td></tr></tbody></table>

活体成像斑马鱼脑内侵袭性胶质母细胞瘤细胞中微管的动态变化

Live Imaging of Microtubule Dynamics in Glioblastoma Cells Invading the Zebrafish Brain

在真实人群中，胶质母细胞瘤（GBM）的中位生存时间极低，仅为6至15个月，是破坏性最强的恶性脑肿瘤。治疗失败主要归因于GBM细胞的侵袭性，这凸显了深入理解GBM运动特性的迫切需求。为了研究支持GBM侵袭的分子机制，亟需建立新的生理模型，以实现对侵袭过程中蛋白质动态的深入表征。这些观察结果将为发现阻断肿瘤浸润、改善患者预后的新型治疗靶点铺平道路。本文介绍了将GBM细胞原位移植至斑马鱼脑内，从而实现亚细胞水平的活体实时成像的方法。聚焦于微管（MTs），我们描述了一套实验流程：包括在GBM细胞中标记微管、将GBM细胞显微注射至受精后3天（dpf）斑马鱼幼鱼的透明脑组织中、对播散性异种移植瘤中的微管进行活体成像、调控微管动态以评估其在GBM侵袭过程中的作用，以及对获取的数据进行分析。

分析微管在过程中所起的作用 在体 GBM侵袭，本文介绍了通过慢病毒感染在GBM细胞中实现稳定微管标记的主要步骤、将GBM细胞原位异种移植至3 dpf斑马鱼幼鱼、微管动态的高分辨率活体成像、微管靶向药物（MTA）处理及其对GBM侵袭的影响，以及微管动态的图像分析 体内 侵袭（图1). 通过沿生长和缩短的微管构建明场图像来测量微管动力学（图3C）或通过随时间手动追踪单个微管末端图3D）。在幼虫培养基中施加药物处理及其对微管网络结构可逆影响的示例见于 图4低剂量诺考达唑（200 nM）处理4小时后，微管网络逐渐收缩，胶质母细胞瘤细胞突起消失图4A）。洗脱药物后，胶质母细胞瘤细胞形成突起的能力得以恢复。洗脱12小时后，细胞重新沿血管迁移。图...

我们报道了一种可在胶质母细胞瘤（GBM）细胞侵袭脊椎动物脑组织过程中实现微管动态活体成像的技术。通过将荧光标记的GBM细胞正位注射至透明的斑马鱼脑中，并结合高分辨率的活体成像，可实现对细胞骨架动态变化的观测 原位 癌症侵袭

中位生存期在真实人群中仅为6至15个月，胶质母细胞瘤（GBM）是最具破坏性的恶性脑肿瘤。治疗……

该方法通过将脑癌细胞异位注射到斑马鱼体内，并结合亚细胞水平的活体成像，专门用于研究微管在脑癌侵袭过程中的作用。该技术的主要优势在于能够以高时空分辨率获取微管细胞骨架的动态图像。此方法在体内脑癌侵袭模型中具有独特性，可实现对微管动态行为的深入分析。原位脑癌细胞侵袭的亚细胞成像可用于分析任何可能参与癌症侵袭的靶蛋白。首先，用 PBS 清洗在 37 摄氏度下培养的胶质母细胞瘤细胞。通过加入一毫升 0.05% 胰蛋白酶 EDTA，并在细胞培养箱中于 37 摄氏度孵育 5 至 10 分钟，直至所有细胞完全脱落，从而使细胞脱离。 将细胞重悬于50毫升离心管中的5毫升完全胶质母细胞瘤细胞培养基中。加入45毫升预冷的磷酸盐缓冲液（PBS），在4°C下以134 × g离心5分钟。弃去上清液，通过反复吹打，用1毫升预冷的PBS将细胞彻底重悬。再加入49毫升冰冻的PBS，于134 × g离心5分钟。弃去上清液，将细胞重悬于200微升冰冻的PBS中。在移植操作期间始终置于冰上保存。为了将胶质母细胞瘤细胞微量注射到斑马鱼幼鱼的中脑，需在显微注射用琼脂糖板中加入6毫升E3培养基，并添加160毫克/升的三卡因。将约十二只已脱膜的幼鱼转移至显微注射板中。待幼鱼完全麻醉且对触碰无任何反应后，使用00号画笔将其侧向排列于凹槽内，头部朝上，并将卵黄囊轻推至凹槽壁一侧固定。然后使用微量上样吸头将五微升胶质母细胞瘤细胞加入到微毛细管中，并将毛细管插入通用毛细管架。将含有麻醉后幼虫的显微注射板放置在体视显微镜载物台上。使用显微操作仪旋钮，将微毛细管的尖端置于显微注射板的边缘处。然后用手术刀将其切开，形成一个大小约等于细胞直径的锐利入口。通过轻轻推动显微注射器中的油并使针尖插入培养基，观察是否有细胞从毛细管中流出，以确认细胞流出情况。将细胞集中在毛细管尖端，以最大限度提高每单位注射体积内的细胞数量，避免将PBS注入脑组织中。手动将油注入注射器时，仔细观察从微毛细管中流出的细胞。通过经验确定手动旋钮需要旋转的圈数，以递送20至50个细胞。通常情况下，如果细胞浓度足够高，轻轻旋转一圈即可推出约10个细胞。将毛细管尖端靠近中脑静脉上方的左侧视顶盖。轻轻按压毛细管，直至幼鱼皮肤膜破裂。当到达视顶盖的合适位置后，注入细胞。仔细观察毛细管尖端，以观察细胞流入动物体内的流况，从而确保注射成功。根据需要对尽可能多的动物重复此操作。根据实验人员注射速度的不同，每注射10至20个幼虫可能就需要更换一次针头，因为细胞在毛细管中会迅速发生聚集。异种移植完成后，将幼虫从显微注射板中取出，并转移至含有矿物源水、PTU 和亚甲蓝培养基的 24 孔板中单独培养。配制 1% 低熔点 AH-KROH 溶液。取 500 微升煮沸后的 1% 低熔点 AH-KROH 溶液转移至 1.5 毫升离心管中，置于 37 摄氏度的加热块上冷却。向AH-KROHS中加入160微克/升的三卡因，并充分混匀。将1至4条移植了异源组织的幼鱼转移至一个直径为3.5厘米、盛有含PTU和亚甲基蓝的矿物源水的培养皿中，该培养皿中的液体已补充160微克/升的三卡因。待幼鱼完全麻醉且对触碰无任何反应后，使用细尖移液枪小心地将其转移至含有AH-KROHS和三卡因的离心管中。将幼虫与AH-KROHS轻轻混匀。使用一个大型球状移液器，将混有AH-KROHS的幼虫转移至3.5厘米玻璃底视频成像培养皿的中央。在体视显微镜下，迅速将幼虫调整至背侧朝上的位置。使用微量加样吸头去除多余的AH-KROHS，以保持尽可能薄的AH-KROHS层。待AH-KROHS凝固后，加入2.5毫升成像培养基。为进行体内活体成像以观察侵袭性胶质母细胞瘤细胞中的微管动态，将含有AH-KROHS包埋的异种移植幼虫的成像培养皿置于倒置共聚焦显微镜的环境培养箱中，温度设置为32摄氏度。使用电动XY载物台和10倍物镜在成像培养皿中找到幼虫。按下 Esc 键以降低物镜转盘，然后在 60 倍油镜上滴加矿物油，再按 Esc 键返回初始焦平面位置。在红色通道中观察侵袭的胶质母细胞瘤细胞，设置参数为 561 纳米激光源、20% 激光功率和 200 毫秒曝光时间。随后选择一个具有伸展的微管网络且微管丝状结构清晰可辨的细胞。设置Z系列参数。使用200微米范围的压电载物台，选择微管网络的顶部和底部位置，其中10至30微米深度的Z堆栈足以以0.3微米的Z切片步长可视化迁移细胞突起中的微生物网络。设置延时成像采集参数，以在采集速度、Z堆栈深度和荧光信号之间实现最佳平衡，避免快速光漂白。每隔五到十秒获取一次微管图像，持续数分钟，并保存5D超堆栈。通过沿生长和缩短的微管构建明场图像，并随时间手动追踪单个微管边缘，来测量微管动态。通过在幼虫培养基中施加200纳米浓度的诺考达唑处理，评估药物处理对微管网络结构的影响及其可逆效应。这导致微管网络逐渐收缩，并在四小时后胶质母细胞瘤细胞突起消失。洗去药物后，胶质母细胞瘤细胞恢复了形成突起的能力。在洗脱药物12小时后，细胞重新沿血管系统迁移，表明200纳米摩尔剂量的诺考达唑足以破坏微管网络，并迅速阻断体内胶质母细胞瘤细胞的侵袭。为期三天的相同处理对整体胶质母细胞瘤细胞侵袭的分析显示，与对照组相比，诺考达唑在体内抑制了胶质母细胞瘤细胞的长期侵袭，且未影响鱼类的整体健康状况。请务必从受精后三天的健康幼鱼开始操作，将细胞浓缩至毛细管中，尽量减少注入脑部的体积，以形成单一的肿瘤团块，并尽量避免将细胞注入脑室。

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侵入斑马鱼大脑的胶质母细胞瘤细胞微管动力学的实时成像

在本视频中，我们演示了一种利用共聚焦显微镜在单细胞分辨率下对活体斑马鱼胚胎中发育中的脊椎动物大脑进行分析的方法。该方法包括对单细胞斑马鱼胚胎进行显微注射，随后对发育中的大脑进行固定和成像的技术流程。...

活体斑马鱼胚胎大脑的共聚焦显微镜成像

本方案描述了在活体斑马鱼胚胎中对单个神经元或神经嵴细胞进行成像的方法。该方法利用荧光共聚焦延时显微镜观察细胞行为及肌动蛋白的定位。...

斑马鱼胚胎中单个神经元和神经嵴细胞的活体成像及肌动蛋白细胞骨架观察

理解塑造早期胚胎的形态发生过程的关键在于能够以高分辨率对细胞进行成像。本文介绍一种在完整斑马鱼胚胎中利用膜定位的绿色荧光蛋白对单个细胞或少量细胞簇进行标记的技术。...

斑马鱼后脑中细胞的标记与成像

尽管周围神经系统（PNS）在损伤后具有显著的修复能力，但调控这一现象的细胞和分子机制仍知之甚少。通过使用活体转基因斑马鱼和可重复的神经横断实验，我们能够研究神经变性和再生过程中胶质细胞的动态行为。...

运动神经切断及活体斑马鱼中胶质细胞行为的延时成像

癌症细胞移植是研究癌症机制和治疗反应的重要工具。目前的技术依赖于免疫缺陷型动物。本文介绍一种将斑马鱼肿瘤细胞移植到免疫健全胚胎中的方法，用于长期分析肿瘤细胞行为 体内...

将斑马鱼儿童脑肿瘤移植到免疫健全宿主中以长期研究肿瘤细胞行为和药物反应

在此，我们展示了构建细胞电位报告斑马鱼品系的过程，以可视化胚胎发育、运动及斑马鱼肿瘤细胞 体内.

斑马鱼早期胚胎和肿瘤中细胞电活动的可视化

本文介绍了活细胞成像技术，用于在不同处理条件下，随时间定量测量胶质母细胞瘤脑肿瘤干细胞的迁移和侵袭能力。...

活细胞成像实验用于研究胶质母细胞瘤脑肿瘤干细胞的迁移与侵袭

活体成像是一种强大的工具，可用于研究神经系统发育背后的细胞机制。本文介绍了一种利用延时共聚焦显微镜实时观察斑马鱼发育过程中大量多色Brainbow标记细胞的技术。...

利用Brainbow技术和活体斑马鱼延时共聚焦成像可视化大脑发育过程

本文介绍一种对斑马鱼胚胎大脑进行活体成像的方法，可观察至幼虫期和稚鱼期。该方法借鉴电生理学技术，属于微创操作，能够获取成熟神经元的细胞及亚细胞结构细节，并可与光遗传学及神经药理学研究相结合，用于表征脑功能及药物干预效果。...

通过去除头骨和皮肤实现清醒斑马鱼幼虫和幼鱼全脑组织的活体成像

本文介绍了一种实验方案 体内...

体内全脑成像斑马鱼幼鱼使用三维荧光显微镜

我们展示了一种利用快速扫描共聚焦显微镜对发育中斑马鱼视顶盖内的小胶质细胞进行活体成像的方法，从而实现对这些细胞动态行为的分析 体内.

活体成像与斑马鱼胚胎小胶质细胞动态的表征

了解胶质母细胞瘤细胞微管动力学的实时成像方法，利用斑马鱼模型进行原位正位注射和高分辨率活体成像。该技术可在体内高时空分辨率下分析细胞骨架动态，为研究脑癌侵袭机制提供新工具。

活体成像斑马鱼脑内侵袭性胶质母细胞瘤细胞中微管的动态变化

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