标准化大鼠冠状动脉环制备及血管直径动态张力变化的实时记录

本方案详细介绍了大鼠冠状动脉的定位、分离以及肌环固定方法，为心血管疾病的各种机制研究和治疗提供了新途径。该系统适用于体外动脉张力动态变化的稳定记录，可测直径范围为60微米至10毫米。

我们建议初学者应首先准确理解每条血管的解剖位置，并可从稍大的血管开始，例如胸动脉和肠系膜动脉。在分离并取出心脏后，用医用塑料镊子轻轻挤压，将所有心腔内的残余血液排出。随后迅速将预处理后的心脏置于培养皿中，培养皿内含有95%氧气和5%二氧化碳饱和的生理盐溶液，温度为4°C，pH值为7.40。

为准确识别冠状动脉的解剖位置，根据示意图在体视显微镜下调整离体心脏的姿势。使用手术剪和镊子从肺动脉根部沿室间隔切开左心室和右心室腔。为将左、右冠状动脉从心肌组织中分离，需在光学解剖显微镜下解剖右心室，充分暴露右冠状动脉分支。

然后将心脏组织顺时针旋转45度，确定左冠状动脉的位置。去除周围黏连的心肌组织后，明确辨识搏动的左、右冠状动脉。立即从中间分离冠状动脉，并完全浸入4°C的生理盐溶液中。

使用解剖剪将离体动脉垂直切割，获取长约两毫米的动脉环，用于记录在不同刺激下的血管张力。准备两根两厘米长的不锈钢丝，并预先浸泡于4°C、饱和含95%氧气和5%二氧化碳的生理盐溶液中。在光学解剖显微镜下，将两根钢丝平行穿过动脉环，方向与血管走向一致，确保钢丝两端在血管腔外露出的长度相等。

将动脉环用钢丝前后固定在充满含95%氧气和5%二氧化碳混合气体的生理盐溶液的DMT浴槽中。旋转水平调节旋钮，调整前后间距至适当位置，使两根钢丝保持水平，动脉环处于自然松弛状态。将DMT浴槽安装至恒温装置后，打开数据采集软件，确保相应通道的信号被正常记录。

设置参数。通过沿血管直径施加适当的张力，达到动脉环的最佳初始张力。此时，将显示的血管张力值设为零。

随后，通过旋转浴槽的螺旋轴，对动脉环施加一个3毫牛顿的脉冲刺激。点击LCD面板，将其设置为0毫牛顿，并维持一小时。在37摄氏度、pH 7.40的含氧饱和生理盐溶液缓冲液中孵育一小时后，再次在导线显微图的张力控制面板上将张力值设为0毫牛顿。

采用丝状肌动描记技术测定冠状动脉环的收缩活性，并通过三次独立操作进行验证，每次操作均使用60毫摩尔的钾离子溶液刺激10分钟。每次刺激后，用氧气饱和的生理盐溶液冲洗浴槽，直至血管张力恢复至初始状态。向浴槽中加入0.3微摩尔的U46619，观察10分钟。

加入1 µM的芹菜素，观察血管效应。当血管扩张达到平台期时，加入下一个浓度。将1 µM的芹菜素加入60 mM氯化钾预收缩溶液中，以观察血管效应。

当舒张达到平台期时，加入下一浓度试剂。向静息的血管环中加入 28 毫摩尔的钾离子。当收缩达到平台期时，加入下一浓度试剂。

向静息的血管环中加入 0.01 微摩尔的 U46619。当收缩达到平台期时，加入下一个浓度。在动脉环上施加初始的 3 毫牛顿张力后，通过平行三次施加 60 毫摩尔的钾离子浓度，使其张力超过 2 毫牛顿。

因此，上述步骤获得了具有优良生理活性的离体冠状动脉环。向DMT620M浴槽中逐次加入累积浓度的钾离子或U46619，引起体外血管张力呈浓度依赖性升高。当前一浓度的钾离子或U46619引起的血管收缩效应达到平台期时，再加入下一浓度。

对于由钾离子和U46619收缩的离体冠状动脉环，测试药物芹菜素（apigenin）以出乎意料的浓度依赖方式引起血管舒张。将心脏沿室间隔从肺动脉根部切开，暴露并分离出长约两毫米的冠状动脉肌环。完成该操作后，我们可记录视网膜微血管、肾功能、肾动脉以及中脑动脉中的血管张力。

一个从 60 微米到 10 毫米的动态区域。