用于下游无循环DNA应用的标准化液体活检前分析方案

液体活检彻底改变了我们的肿瘤学转化研究方法，样本收集、质量和储存是其成功临床应用的关键步骤。在这里，我们描述了一种标准化且经过验证的下游无循环DNA应用的方案，该协议可应用于大多数转化研究实验室。

这是处理和储存血液样本的标准方案，用于基于循环游离DNA的下游液体活检应用。这是第一个发布的标准协议，尽管该技术已经使用了好几年。大多数转化或科学实验室提供的标准设备很容易遵循。

该协议可由所有实验室工作人员执行。该协议有助于标准化我们收集和存储样本的方式，这将最终影响临床，并减少执行相同或相似下游分析的不同中心之间的变异性，其中精度是最重要的。这种方法在肿瘤学研究和临床应用中特别有用。

然而，它也可以应用于其他非癌症疾病，其中也使用液体活检。血液样本离心后，知道要去除多少血浆或血清可能很困难，但遵循此特定指南将有助于实现这一目标。协议的其余部分非常容易遵循，实验室经验有限。

演示该程序的将是来自我们实验室的技术人员豪尔赫。首先，将含有新鲜血液的试管在室温下以1600倍g离心10分钟，并施加最大休息时间。小心地从离心机中取出试管。

血清上清液的上层将呈现清澈和淡黄色。检查样本是否出现溶血迹象，并在适当时记录溶血情况。在II类生物安全柜中，将血清以250微升等分试样的形式转移到收集管中。

等分试样必须正确标记。立即将血清直立冷冻在零下80摄氏度的储存盒中，并记录样品储存时间。验证样品是否在所需的四小时内处理完毕。

将EDTA管在室温下以1600倍g离心10分钟，并施加最大断裂。离心后，血浆上清液将呈现清澈和淡黄色。检查样品是否出现溶血迹象，并使用一次性血清移液器将血浆转移到15毫升离心管中，而不会干扰细胞层。

在细胞层上方留下少量残留的血浆，大约五毫米。如果观察到溶血，请丢弃样品进行进一步分析。离心血浆和15毫升离心管，以去除从第一个离心步骤携带的任何残留的完整血细胞。

小心地从离心机中取出试管，而不是管底部的细胞沉淀，并使用一次性血清移液器将一到四毫升血浆转移到一到四毫升聚丙烯低温 BIOS 或 Eppendorfs 中。必须将残留体积的血浆留在管的底部，以避免血细胞污染血浆。立即将血浆直立冷冻在零下80摄氏度的储存盒中，并记录样品储存时间。

验证样品是否正确标记并在所需的四小时内处理。使用P1000和过滤尖端收集细胞层并将其转移到两毫升管中。立即冷冻并储存在零下80摄氏度。

此处显示了可用于下游应用的高质量cfDNA提取示例，而此图形图像表示具有高水平基因组污染的不合适样品的示例。血浆或血清级分必须是黄色。这可能因单个样品而异。

溶血的样本应丢弃。去除血浆部分时，请注意不要去除任何细胞沉淀。该协议还可用于其他基于核酸和蛋白质的应用，例如使用免疫检测技术检测血清和血浆样品中的非编码RNA或蛋白质。

这是许多实验室中使用的非常标准的技术。该协议可帮助研究人员标准化我们进行分析的方式，因为这是一个关键方面，是未来临床应用所必需的。