一种钙磷酸盐诱导的小鼠腹主动脉瘤模型

本方案描述了通过磷酸钙诱导的腹主动脉瘤（三A）小鼠模型，用于研究腹主动脉瘤分子机制中的病理特征。与血管紧张素泵模型和弹性蛋白酶诱导的腹主动脉瘤模型相比，磷酸钙诱导的腹主动脉瘤模型具有快速且成本较低的优势。本次实验操作将由本实验室的博士后研究员Zeyu Cai演示。

首先，裁剪无粉橡胶手套和纱布，制成宽0.3厘米的条状。然后购买8至10周龄的C57BL6J Mayo小鼠，并将动物饲养在具有12小时光照-黑暗循环的空调环境中，自由摄取食物和水。接下来，手术前对纱布、棉签、剪刀和镊子进行高压灭菌，并准备聚维酮碘、70%乙醇和抗菌洗手液。

使用电动剃毛器或脱毛膏去除麻醉小鼠腹部的毛发。然后用聚维酮碘棉球对剃毛区域进行环形擦拭消毒，再用70%乙醇重复擦拭数次。随后，用剪刀沿腹部中线在下腹部做一道长约1.5厘米的切口。

使用无菌棉签蘸取生理盐水，小心地移除肠管，直至露出肾下腹主动脉。接着，剥离肾下腹主动脉周围约0.5厘米长度的结缔组织和脂肪组织，注意避免损伤背侧的小血管。然后，将一条浸有生理盐水的橡胶手套条置于腹主动脉和腹主静脉下方，并用棉签擦去多余液体。

随后，将一块浸有0.5摩尔氯化钙的纱布覆盖于肾下腹主动脉外膜，持续10分钟。移除纱布后，再用另一块浸有PBS溶液的纱布覆盖5分钟，以在主动脉外膜的C2部位生成磷酸钙晶体。然后小心移除橡胶手套条和纱布。

小鼠肠道重置后，使用5-0缝线缝合腹部切口及皮肤。接着，将小鼠置于加热垫上，直至其恢复意识。术后继续饲养小鼠14天，并在手术后密切监测，此后至少每天观察一次。

手术后14天，腹侧切开安乐死小鼠的胸腔和腹腔，并剪开右心房。通过左心室灌注PBS缓冲液，以清除主动脉中的血液，随后按照文献所述方法灌注4%多聚甲醛。在体视显微镜下小心去除外膜组织和脂肪。

然后取材主动脉并将其放入含有5 mL 4%多聚甲醛的离心管中固定48小时。随后用昆虫针将主动脉固定在黑色石蜡板上，并进行主动脉图像采集。在应用磷酸钙14天后，对主动脉形态进行成像，以观察腹主动脉瘤的形成情况。

观察到磷酸钙可导致肾下腹主动脉扩张，并引起弹性纤维的显著降解，表现为弹性蛋白断裂。使用无菌棉签蘸取生理盐水移除肠道，直至暴露出肾下主动脉，随后剥离肾下主动脉周围的结缔组织和脂肪。总体而言，磷酸钙诱导的小鼠腹主动脉瘤模型是一种快速且经济有效的方法，可用于探索腹主动脉瘤的分子机制及治疗策略，并可与其他模型联合应用，以全面模拟人类腹主动脉瘤的特征。