从临床样本中自动分离与收集癌症相关物质

我们的方案操作简便。采用此技术，任何人都能轻松地从血液中分离出目标组分。可将污染降至最低，并实现材料的精确分离。

通过自动化及本实验方案的建立，研究人员可轻松获得高纯度的癌症相关物质，这有助于开展多种下游研究。特别是，该方法有望为终端用户的研究提供重要优势。本实验操作将由癌症基因组学研究所的高级研究员兼助理经理 Jay Jeong 进行示范。

首先，在仪器的触摸屏面板上选择卡匣类型，以加载 LBx 1 卡匣。按下箭头按钮以更改样本数量。然后，打开仪器门，按照卡匣架上的编号顺序插入所有要使用的卡匣。

总共四个 cartridge 时，将 dummy cartridge 放入 cartridge holder 的空位中。使用支撑轮安装 cartridge，并拧紧锁紧螺母以固定。关闭门，然后按下触摸屏上的运行按钮。

仪器会关闭试剂盒上的阀门，此过程大约需要30秒。根据提示打开门，取下支撑轮，并从试剂盒支架中取出已关闭阀门的试剂盒。

使用血清学移液管吸取最多10毫升的全血样本。将移液管尖端深入 cartridge 的样本入口，缓慢注入全血样本。将 cartridge 插入仪器后，关闭仪器门并按下 OK 按钮。

血浆和白细胞层会从全血中自动分离，整个过程大约需要30分钟。当血浆和白细胞层分离完成后，屏幕将显示提示信息并伴随警报声。通过打开门或按下停止按钮来关闭警报。

打开门。取出 cartridge 并将其放在桌面上。使用 1 mL 移液器吸头从血浆出口收集 3 mL 血浆。

然后，使用1毫升移液枪头从血沉棕黄层出口回收3毫升血沉棕黄层。接下来，在仪器的触摸屏面板上选择 cartridge 名称，以加载 LBx 2 cartridge。按下箭头按钮以更改样本数量，并按照与 LBx 1 cartridge 相同的操作步骤，将 cartridge 插入 cartridge 支架中。

插入 cartridge 并关闭门后，按下触摸屏上的运行按钮。按照先前展示的步骤，将阀门关闭的 cartridge 从 cartridge 持架中取出并放置在桌面上。使用血清移液管吸取密度梯度溶液。

将移液器吸头深入插入 cartridge 的进样口，缓慢注入溶液。然后吸取全血样本，缓慢注入样本进样口。插入并固定 cartridge 后，关闭门并按下 OK 按钮。

当血浆和外周血单个核细胞（PBMC）从全血中自动分离后，将出现一条伴随警报声的消息。打开门并取出 cartridge。使用1毫升移液枪头从血浆出口回收3毫升血浆，然后从PBMC出口回收3毫升PBMC。

同样，对于 FAST-auto 试剂盒，从试剂盒支架中取出阀门已关闭的试剂盒后，将六毫升 PBS 溶液注入试剂盒的 PBS 加样口。然后，用移液器吸取三毫升来自 LBx 1 的全血或白膜层，或来自 LBx 2 的 PBMC 样本，并缓慢注入试剂盒的样本加样口。插入试剂盒并固定后，关闭门并按下“确定”按钮。

自动富集循环肿瘤细胞（CTCs）完成后，关闭警报。取出 cartridge，将背板移除器（BPR）插入 cartridge 前端的四个孔中。用双手拇指按压深蓝色翼状部分，然后按压浅蓝色主体，直至听到咔嗒声。

轻轻抬起移除滤芯外壳。使用镊子极为轻柔地夹住滤膜边缘，将滤膜放入1.5毫升离心管中用于核酸提取，或置于载玻片上进行染色。如有需要，使用1毫升移液枪头将过滤后的血液回收至血液出口。

采用 Bioanalyzer 对提取的 cfDNA 进行评估，并使用 cfDNA 筛选胶带配合电子标记 ladder。绿色线条用于对齐标记 ladder 与样本。三角形标记指示 DNA 条带。

大多数cfDNA的长度为166个碱基对，部分cfDNA的长度为其整数倍。通常，cfDNA的浓度范围可达50至700个碱基对。尽管不同个体样本中获得的cfDNA含量存在差异，例如分别为8.47纳克/毫升和5.2纳克/毫升，但在所有情况下，cfDNA提取结果在浓度和片段大小分布方面均表现良好。

这些结果表明，LBx 1 方法能够准确分离含有 cfDNA 的血浆。在 FAST-auto 中，将膜取出后用荧光抗体染色，以检测循环肿瘤细胞（CTCs）和白细胞。将染色后的膜置于载玻片上，在荧光显微镜下观察。

膜染色后，细胞显示蓝色的 DAPI 或核阳性信号，而 EpCAM 和 CK 或循环肿瘤细胞（CTCs）阳性信号呈绿色，CD45 或白细胞（WBC）阳性信号呈红色。去除膜并不困难，但需注意避免循环肿瘤细胞的丢失和污染。

全血、外周血单个核细胞（PBMC）以及血沉棕黄层均可使用。您只需设定总体积即可。也可使用其他液体，但需进行测试验证。

该技术可直接在医院中操作，且能快速获得物质。