从临床样本中自动分离和收集癌症相关物质

我们的协议是用户友好的。使用这种技术，任何人都可以轻松地从血液中分离成分。污染可以最小化，材料可以准确分离。

通过自动化和该协议的建立，研究人员可以轻松获得高纯度的癌症相关物质，这对各种下游研究很有帮助。特别是，它有望为最终用户研究提供重要优势。展示他们的程序将是癌症基因组学研究所的高级研究员兼助理经理Jay Jeong。

首先，通过在仪器的触摸屏面板上选择墨盒类型来加载 LBx 1 墨盒。按箭头按钮更改样本数。然后，打开仪器门，按照墨盒支架上的编号顺序插入所有要使用的墨盒。

对于总共四个墨盒，请将虚拟墨盒放在墨盒支架的空白处。使用支撑轮安装墨盒并拧紧锁紧螺母以固定它。关上门，然后按触摸板屏幕上的运行按钮。

仪器关闭滤芯上的阀门，大约需要 30 秒。按照消息打开门。拆下支撑轮，然后从阀座上拆下阀门关闭的滤芯。

使用血清移液器最多移取10毫升全血样品。将移液器吸头深深插入滤芯的样品入口，然后缓慢注入全血样品。将墨盒插入仪器后，关闭仪器门并按 OK 按钮。

血浆和血沉棕黄层自动与全血分离，大约需要 30 分钟。一旦血浆和血沉棕黄层分开，屏幕上就会出现一条消息，并伴有警报声。通过打开门或按下停止按钮来停止警报。

开门。取出墨盒并将其放在桌子上。使用一毫升移液器吸头从血浆出口回收三毫升血浆。

然后，使用一毫升移液器吸头从血沉棕黄层出口回收三毫升血沉棕黄层。接下来，通过在仪器的触摸屏面板上选择墨盒名称来加载 LBx 2 墨盒。按箭头按钮更改样品数量，然后按照LBx 1小柱所示的相同步骤将小柱插入小柱支架。

插入墨盒并关闭门后，按触摸板屏幕上的运行按钮。按照前面显示的步骤从阀式墨盒支架上取下阀门关闭的滤芯并将其放在桌子上。使用血清移液器移液密度梯度溶液。

将移液器吸头深深插入墨盒的入口处，然后缓慢注入溶液。然后，移液全血样品并将其缓慢注入样品入口。插入并固定墨盒后，关闭盖并按 OK 按钮。

一旦血浆和PBMC自动从全血中分离出来，就会出现一条消息，并伴有警报声。打开盖并卸下墨盒。使用一毫升移液器吸头从血浆出口回收三毫升血浆，然后从PBMC出口回收三毫升PBMC。

同样，对于 FAST-auto 滤芯，从滤芯支架上取下阀门关闭的滤芯后，将 6 毫升 PBS 溶液注入滤芯的 PBS 入口。然后，移液三毫升从LBx 1获得的全血或血沉棕黄层，或从LBx 2获得的PBMC样品，并将样品缓慢注入样品盒的样品入口。插入墨盒并固定后，关闭门并按 OK 按钮。

CTC 的自动富集完成后，停止警报。卸下墨盒并将背板拆卸器（BPR）插入墨盒正面的四个孔中。用双手拇指按压深蓝色的机翼，然后按压浅蓝色的机身，直到它发出咔嗒声。

提起墨盒主体，小心地将其卸下。非常轻柔地，用镊子从边缘拿起滤膜，然后将膜放入1.5毫升管中进行核酸制备，或放在载玻片上进行染色。如有必要，使用一毫升移液器吸头将过滤后的血液回收到出血口。

使用生物分析仪评估提取的cfDNA，并将cfDNA筛选带与电子梯一起使用。绿线用于对齐梯子和样品。三角形标记表示DNA条带。

大多数cfDNA的长度为166个碱基对，有些以长度的整数倍存在。通常，cfDNA的浓度高达50至700个碱基对的大小。尽管从每个单独样品中获得的量存在差异，例如每毫升8.47纳克和每毫升5.2纳克，但cfDNA提取的结果在所有情况下的浓度和尺寸分布都很好。

这些结果表明，LBx 1方法可以准确分离含有cfDNA的血浆。在FAST-auto中，去除膜并用荧光抗体染色以检测CTC和白细胞。放置在载玻片上的染色膜在荧光显微镜下观察。

膜染色后，细胞以蓝色显示DAPI或核阳性信号，而EpCAM和CK或CTC阳性以绿色突出显示，CD45或WBC阳性以红色突出显示。去除膜并不困难。但是，有必要小心四氯化碳的损失和污染。

全血，PBMC和血沉棕黄层都有。相反，您只需要设置整个音量。也可以使用其他液体，但需要进行测试。

这种技术可以直接在医院操作，并且可以快速获得该物质。