Name: 使用碎裂、均质化和连续过滤的组合从牛卵巢中分离小的前窦卵泡 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-09-27T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 11 s
Description: 学习从牛卵巢中高效分离早期窦前卵泡的机械方法，采用切碎、均质化和连续过滤技术。该方法可提高卵泡存活率，为卵泡发生学研究和多种物种的生育力保存提供新机会。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

本项目部分由美国农业部多州项目 W4112 和加州大学戴维斯分校 Jastro Shields 奖学金资助，授予 SM。
作者谨向 Central Valley Meat, Inc. 致以诚挚谢意，感谢其提供本研究所用实验中的牛卵巢。作者同时感谢 Olivia Silvera 在卵巢处理及卵泡分离过程中提供的协助。

作者无任何利益冲突需要披露。

本方案详细描述了一种可重复的方法，用于从牛卵巢中分离早期前腔卵泡，特别是初级和早期次级阶段的卵泡。该方案在既往研究20,25,30,34,35,36的基础上进行了优化，能够从单个卵巢中分离出数量可观的卵泡。采用此方法分离得到的前腔卵泡具有活性，可用于后续实验，如蛋白质免疫定位分析以及RNA提取以进行基因表达研究。本研究未尝试对分离的卵泡进行培养。然而，目前正在进行相关研究，旨在实现小牛前腔卵泡的长期体外培养。这一后续应用将有助于深入理解卵巢卵泡发生过程、开展毒理学检测，并探索卵泡操控以实现生育力保存的有效策略。
这些实验的数据表明，6分钟的匀浆对于卵巢皮质组织的充分分散和卵泡释放至关重要（<...

卵巢卵泡是卵巢的功能单位，负责配子（卵母细胞）的产生以及对生殖功能和整体健康至关重要的激素分泌。原始卵泡在胎儿发育期或出生后早期（取决于物种）于卵巢中形成1，并构成了女性的卵巢储备。卵泡生长始于原始卵泡的激活，这些卵泡离开静止池并进入生长期。卵泡发生中的前窦状卵泡阶段（即窦状卵泡形成之前的所有卵泡阶段）是一个高度动态的过程，需要卵母细胞及其周围颗粒细胞在形态和代谢上的同步变化，这一过程由这两类细胞之间的紧密通讯所驱动2,3。前窦状卵泡在任一时间点均占卵巢中卵泡单位的大多数4。据估计，卵泡发生过程中前窦状阶段的发育时间比窦状卵泡阶段长约数周5,6，这段时期对于卵母细胞和体细胞获得足够的成熟度以进入最终发育阶段（即窦状卵泡阶段），并为排卵、受精及胚胎发育做好准备至关重要7,8,9。
目前关于卵巢前腔卵泡发生的大部分知识来源于小鼠模型10,11,12,13，部分原因是从体积更小且纤维较少的卵巢中回收大量此类卵泡较为容易。尽管从牛卵巢中分离大量前腔卵泡的报道可追溯至约30年前14，对调控这些早期卵泡发育过程的更全面理解仍未实现，这主要归因于缺乏优化、高效且可重复的方法来获取足量的、具有活性的原始卵泡，尤其是处于发育早期阶段的卵泡。随着人类辅助生殖中对保存卵巢储备功能以供未来使用的需求日益增加，牛因其卵巢结构与人类更为相似而成为一个有吸引力的模型15然而，与小鼠卵巢相比，牛卵巢中的胶原蛋白含量显著更高16，使得采用小鼠相关方法进行机械分离的效率极低。拓展生育力保存技术的研究工作包括完整 体外 原始卵泡发育至有腔卵泡阶段，随后 体外 卵母细胞的体外成熟（IVM） 体外 体外受精（IVF）以及胚胎的制备与移植17迄今为止，这一完整过程仅在小鼠中实现18在牛中，卵泡生长的进展 体外 仅限于少数研究报告，这些研究在培养开始时卵泡阶段不一，且不同方案之间的培养时间长短也存在差异17,19.
文献中描述的从牛卵巢中采集前腔卵泡的方法，主要采用机械法和酶解法，可单独使用或联合使用2,14,17,20。首个关于牛前腔卵泡分离的实验方案报道使用组织匀浆器结合连续过滤法处理整个卵巢20。随后的研究则报道了结合机械法与使用胶原酶的酶解法的联合操作流程14。在利用胶原酶消化卵巢组织时，一个反复出现的问题是可能损伤卵泡基底膜，从而影响卵泡的存活能力14,21,22,23。因此，研究人员已尝试采用不同的机械方法组合，例如使用组织切片器结合反复吹打，或组织切片器与匀浆法联合使用20,24,25,26。另一种已报道的机械法是利用针头直接从卵巢组织中解剖前腔卵泡，该方法特别适用于分离较大的（&#62;200 µm）次级卵泡。然而，该过程耗时较长，对分离较小的前腔卵泡效率较低，且在牛卵巢中操作时对技术人员的操作技能要求较高19,27,28。
借鉴文献中描述的不同技术，本实验方案旨在以一种简单、稳定且高效的方法优化从单个牛卵巢中分离原始卵泡，避免使用酶溶液进行孵育。改进原始卵泡的分离方法将有助于深入理解卵泡发生这一阶段的生物学特性，并推动有效培养体系的建立，以实现原始卵泡向腔前卵泡阶段的发育。本文详述的从牛等大型哺乳动物中分离原始卵泡的具体操作步骤，对于致力于研究非啮齿类动物早期卵泡发生、且研究成果可转化为人类应用的科研人员而言至关重要。

<table><tbody><tr><td>5-3/4&quot; 一次性苏打石灰玻璃巴斯德吸管</td><td>Duran Wheaton Kimble</td><td>63A54</td><td>在培养皿中搜寻时，可用于将卵泡从碎片中分离的巴斯德吸管</td></tr><tr><td>16% 多聚甲醛</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15710</td><td>稀释至4%；用于卵泡免疫染色前的固定</td></tr><tr><td>20 mL 鲁尔锁注射器</td><td>Fisher Scientific</td><td>Z116882-100EA</td><td>与18 G针头配合使用，用于从40 &amp;mu;m 细胞筛中分离卵泡</td></tr><tr><td>#21 无菌手术刀片</td><td>Fisher Scientific</td><td>50-365-023</td><td>用于切割卵巢并去除髓质</td></tr><tr><td>40 &amp;mu;m 细胞筛</td><td>Fisher Scientific&amp;nbsp;</td><td>22-363-547</td><td>用于过滤来自300 &amp;mu;m 细胞筛的滤液</td></tr><tr><td>104 mm 塑料漏斗</td><td>Fisher Scientific</td><td>10-348C</td><td>尺寸可变，但需确保纱布裁剪合适，且卵巢匀浆液不会溢出</td></tr><tr><td>300 &amp;mu;m 细胞筛</td><td>pluriSelect&amp;nbsp;</td><td>43-50300-03</td><td>用于过滤来自纱布的滤液&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>500 mL 锥形瓶</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB500500</td><td>漏斗和锥形瓶用于承接来自纱布的滤液&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Air-Tite 18 G 无菌针头</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>14-817-151</td><td>18 G 针头可提供足够压力，将卵泡从40 &amp;mu;m 细胞筛中分离</td></tr><tr><td>Air-Tite 27 G 13 mm 无菌针头</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-817-171</td><td>可用于处理困住卵泡的碎片</td></tr><tr><td>BD Hoechst 33342 溶液</td><td>Fisher Scientific</td><td>BDB561908</td><td>荧光DNA染料</td></tr><tr><td>牛血清白蛋白 (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7030-100G&amp;nbsp;</td><td>卵泡洗涤培养基的组分</td></tr><tr><td>纱布</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>71748-00</td><td>卵巢匀浆液的初步过滤步骤，用于去除大块组织碎片</td></tr><tr><td>经典双刃安全剃须刀片</td><td>Wilkinson Sword</td><td>N/A</td><td>适用于McIlwain组织切片机且不易快速变钝的刀片</td></tr><tr><td>驴抗兔二抗，Alexa Fluor 488 标记</td><td>Fisher Scientific</td><td>A-21206</td><td>免疫染色用二抗</td></tr><tr><td>Eisco 乳胶吸头</td><td>Fisher Scientific</td><td>S29388</td><td>与巴斯德吸管配合使用的橡胶吸头</td></tr><tr><td>HEPES 缓冲液</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375</td><td>卵泡洗涤培养基的组分</td></tr><tr><td>匀浆器</td><td>VWR</td><td>10032-336</td><td>用于匀浆卵巢组织以释放卵泡&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>ImageJ/Fiji</td><td>NIH</td><td>v2.3.1</td><td>用于荧光免疫定位分析的软件</td></tr><tr><td>McIlwain 组织切片机</td><td>Ted Pella</td><td>10184</td><td>用于将卵巢组织切成适合匀浆的小块</td></tr><tr><td>显微镜 - 体视镜</td><td>Olympus</td><td>SZX2-ILLT</td><td>用于在滤液中搜寻和采集卵泡的解剖显微镜</td></tr><tr><td>显微镜 - 倒置显微镜</td><td>Nikon</td><td>Diaphot 300</td><td>用于高倍明场观察分离的卵泡</td></tr><tr><td>显微镜 - 倒置显微镜</td><td>ECHO</td><td>Revolve R4</td><td>用于高倍明场和落射荧光观察分离的卵泡</td></tr><tr><td>矿物油</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8410-1L</td><td>覆盖卵泡洗涤液滴以防止在搜寻过程中蒸发</td></tr><tr><td>非必需氨基酸 (NEAA)</td><td>Gibco</td><td>11140-050</td><td>卵泡洗涤培养基的组分</td></tr><tr><td>正常驴血清</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>017-000-001</td><td>免疫染色封闭缓冲液的试剂</td></tr><tr><td>Nunc 4孔培养皿（用于体外受精）</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>144444</td><td>用于卵泡分离和洗涤的4孔培养皿</td></tr><tr><td>青霉素-链霉素溶液（100倍浓缩）</td><td>Gibco</td><td>15-140-122</td><td>卵泡洗涤培养基的组分</td></tr><tr><td>培养皿（外径60 mm × 高13.7 mm）</td><td>Ted Pella</td><td>10184-04</td><td>最适合放入McIlwain组织切片机的培养皿</td></tr><tr><td>磷酸盐缓冲盐水 (PBS)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP665-1</td><td>卵巢和卵泡的洗涤缓冲液</td></tr><tr><td>塑料切板</td><td>Fisher Scientific</td><td>09-002-24A</td><td>尺寸足够、可安全切割卵巢的切板</td></tr><tr><td>聚乙烯吡咯烷酮 (PVP)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP431-100</td><td>向PBS中添加PVP（0.1% w/v）可防止卵泡粘附于培养皿或彼此粘连&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>ProLong Gold 抗荧光淬灭封片剂</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>P36930</td><td>荧光标记细胞或组织的封片介质</td></tr><tr><td>Qiagen RNeasy 微量试剂盒</td><td>Qiagen</td><td>74004</td><td>RNA柱纯化试剂盒</td></tr><tr><td>R</td><td>The R Foundation</td><td>v4.1.2</td><td>统计分析软件</td></tr><tr><td>兔抗人Cx37/GJA4多克隆抗体</td><td>Abcam</td><td>ab181701</td><td>用于免疫染色的Cx37一抗</td></tr><tr><td>RevertAid RT反转录试剂盒</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>K1691</td><td>cDNA合成试剂盒</td></tr><tr><td>Rstudio</td><td>RStudio, PBC</td><td>v2021.09.2</td><td>统计分析软件</td></tr><tr><td>氢氧化钠溶液 (1N/认证)</td><td>Fisher Scientific</td><td>SS266-1</td><td>用于将培养基pH调至7.6–7.8</td></tr><tr><td>丙酮酸钠 (NaPyr)</td><td>Gibco</td><td>11360-070</td><td>卵泡洗涤培养基的组分</td></tr><tr><td>方形培养皿 100 mm × 15 mm&amp;nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>60872-310</td><td>带网格的培养皿有助于更高效地识别卵泡&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>SsoAdvanced Universal SYBR Green Supermix</td><td>BioRad</td><td>1725271</td><td>PCR反应用预混液</td></tr><tr><td>Steritop 螺口瓶顶滤器</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2GPT02RE</td><td>用于卵泡洗涤培养基的灭菌</td></tr><tr><td>SYBR-safe DNA凝胶染料</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>S33102</td><td>用于在琼脂糖凝胶上显色PCR产物</td></tr><tr><td>含Hank&amp;rsquo;s盐的TCM199培养基</td><td>Gibco</td><td>12-350-039</td><td>卵泡洗涤培养基的组分</td></tr><tr><td>吐温X-100</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP151-100</td><td>免疫染色通透缓冲液用去垢剂</td></tr><tr><td>Trizol试剂</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15596026</td><td>RNA提取试剂</td></tr><tr><td>台盼蓝溶液，0.4%</td><td>Gibco</td><td>15-250-061</td><td>用于检测分离卵泡的活力</td></tr><tr><td>吐温20</td><td></td><td></td><td>免疫染色洗涤缓冲液用去垢剂</td></tr><tr><td>通用加热板</td><td>WTA</td><td>20931</td><td>加热板，用于在显微镜下搜寻时保持卵泡温度为38.5 &amp;deg;C</td></tr><tr><td>Wiretrol II 校准微量移液管</td><td>Drummond</td><td>50002-005</td><td>用于操作卵泡的玻璃微量移液管</td></tr></tbody></table>

利用组织破碎、匀浆及连续过滤相结合的方法从牛卵巢中分离小型前腔卵泡

Isolation of Small Preantral Follicles from the Bovine Ovary Using a Combination of Fragmentation, Homogenization, and Serial Filtration

了解哺乳动物卵泡发生全过程对于提高家畜、人类以及濒危物种的辅助生殖技术至关重要。由于难以分离较小的前窦卵泡，尤其是大型哺乳动物（如牛）中的前窦卵泡，相关研究大多局限于窦状卵泡和较大的前窦卵泡。本研究提出一种高效方法，可从单个牛卵巢中获取大量小型前窦卵泡。将单个牛卵巢皮质使用组织切片器切成500 µm的立方体，随后用10 mm探头在9,000–11,000 rpm条件下匀浆处理6分钟。先用纱布去除匀浆液中的大块碎片，再依次通过300 µm和40 µm细胞筛进行连续过滤。将截留在40 µm筛网上的物质冲洗至搜索皿中，在显微镜下识别并将其卵泡收集至液滴培养基中。对所收集卵泡的活力进行检测 通过 台盼蓝染色。该方法可在约90分钟内从单个牛卵巢中分离出大量有活力的小型前腔卵泡。重要的是，该方法完全采用机械方式，避免使用可能损伤卵泡的酶来解离组织。通过本方案获得的卵泡可用于后续应用，如提取RNA用于RT-qPCR、特定蛋白质的免疫定位等。 体外 培养

概述与关键步骤 
通过本方案，可从单个牛卵巢中稳定地分离出实验所需数量的小型前腔卵泡。在总共30次重复实验中，每次平均获得41个卵泡，范围为11至135个卵泡（图4A）。在14次重复中，根据先前描述的方法26，在体视显微镜下使用1 µm显微测微尺测量卵泡直径，对卵泡的发育阶段进行分类。采用该方法，共对476个卵泡进行了分类，分别为初级卵泡（直径40–79 µm）、早期次级卵泡（80–119 µm）或次级卵泡（≥120 µm）（图4B）。由于采用了40 µm的过滤步骤，原始卵泡被排除在外。卵泡活力采用台盼蓝排斥法进行评估，方法如前所述30。分离后的卵泡在含0.2% PVP的PBS中，短暂孵育于0.05%（v/v）台盼蓝溶液1分钟，随后用PBS + PVP洗涤三次，并在体视显微镜下观察。根据所述操作，所有重复实验中分离得到的卵泡活力均为100%。总体而言，从卵巢采集到开始在培养皿中搜寻卵泡...

推进原始卵泡发育的研究需要从单个卵巢中高效分离卵泡的方法。本文介绍了一种利用组织切片机和匀浆器从牛卵巢中分离卵泡的简化机械法。该方法可从单个卵巢中收集大量具有活性的原始卵泡。

了解哺乳动物卵泡发育的完整过程对于提高家畜、人类及其他物种的辅助生殖技术至关重要。

本方案可高效且可重复地从单个牛卵巢中分离早期前腔卵泡，为非牛物种的卵巢卵泡发生研究提供了新的机会。通过利用单个卵巢中更多的卵泡，该技术可在卵巢采集前实施体内处理，或通过卵巢活检从同一动物随时间获取多个样本。早期前腔卵泡的分离与冷冻保存，对于接受性腺毒性治疗（如化疗）的年轻女性的生育力保存，以及濒危物种种质资源的保护，均具有重要的应用价值。进行该操作演示的将是来自我实验室的博士研究生Stephanie McDonnell、Amanda Morton和Juliana Candelaria。首先，将实验室中的卵巢转移至含有青霉素-链霉素的温热无菌PBS中，挑选含有大量小窦状卵泡且无明显黄体的卵巢。使用剪刀去除卵巢上多余的结缔组织和脂肪。将一侧卵巢转移至解剖纸上放置的切板上。使用手术刀从一个韧带附着点沿纵向切至对侧附着点，将卵巢切成两半。将其中一半卵巢保留在切板上用于后续处理，将另一半卵巢放回含有青霉素-链霉素的预温 PBS 中。为去除髓质，将卵巢弯曲面朝上，从表面向内约2毫米处沿其曲率进行切割，注意不要切透皮质。沿切口继续向下切割，以去除大部分髓质。将卵巢半片翻转，使上皮面朝上，用手术刀将剩余的髓质从皮质上完全切除，并修整卵巢组织边缘与韧带相连的任何残留白色结缔组织。当大部分髓质被去除后，使用手术刀将皮质切成约1毫米厚，同时以小幅度前后移动的方式修去残留的髓质，然后将每个卵巢皮质半块再切成两片。将皮质组织块置于含青霉素-链霉素的温PBS中，待切碎时取出。取一块皮质组织置于组织切片器的培养皿上，并用三到四滴含青霉素-链霉素的温PBS润湿组织。用一对镊子固定组织块后，按一次复位按钮以启动组织切片机。当整个皮层组织被切成条状后，使用刀片架旋钮将刀片从培养皿上抬起，并用镊子清除刀片上的任何组织。将载物台旋转90度后，再次按下复位按钮，使刀片完全穿过组织条。使用刀片架旋钮将刀片从培养皿上抬起，并用镊子清除刀片上的任何组织，操作方法如前所述。使用移液管和含有青链霉素的温热 PBS，将切碎的组织冲洗至预热的 50 毫升锥形管中。将锥形管放回水浴或珠浴中，以保持组织切块处于温暖状态，同时对卵巢其余三个半部分重复切碎操作。为获得最佳切割效果，使用套筒扳手从切碎臂上取下螺母，并取下垫圈和刀片卡扣。用镊子将刀片从切碎臂上取下，翻转刀片使未使用的边缘朝向培养皿，然后将其重新放回切碎臂上。确保匀浆仪已接通电源且转速设置为第二档后，根据制造商的说明将10毫米发生器探头插入匀浆仪中。接下来，设定计时器为1分钟，将探头插入含有一个卵巢切碎皮质组织的50毫升锥形管中，管内加入含青霉素-链霉素的PBS，液面至25毫升刻度线。探头插入的深度必须达到液体高度的1/3，从管底开始测量。计时开始后，启动匀浆器，确保探头底部不接触管壁，并在匀浆过程中保持试管静止。匀浆1分钟后，将探头从试管中取出，用镊子清除转子刀片与转子管之间排气孔中堵塞的结缔组织，或探头内卡住的皮质组织碎片，并将其放回试管中。将分散的组织倒入覆盖有纱布并插入锥形瓶的漏斗中，用预热的PBS冲洗试管内容物至漏斗内。最后，用温热的PBS冲洗纱布。通过将纱布包裹住组织碎片并向下扭转、挤压，迫使液体以小片段形式穿过纱布孔隙，直至将纱布中所有多余的液体和组织完全去除。重新将纱布在漏斗上展开后，使用移液管将含有青霉素-链霉素（Pen-Strep）的PBS冲洗纱布，并再次挤压，使任何残留的组织碎片穿过纱布。使用止血钳夹住300微米的细胞滤筛，将其置于200毫升烧杯上方，将锥形瓶中的滤液倒入细胞滤筛中。若细胞滤筛被组织堵塞，可轻轻将其在烧杯上轻敲，然后将滤筛倒置，轻敲使较大的组织碎片落入实验台纸面上。用含青霉素-链霉素的温PBS冲洗锥形瓶中的内容物，直至无组织碎片残留，再将其倒入细胞滤筛中。接下来，用止血钳夹住40微米细胞筛，并将其置于第二个200毫升烧杯上方，将第一个200毫升烧杯中的全部初始滤液倒入筛中，然后用含青霉素-链霉素的预温PBS冲洗烧杯内残留物，直至无组织碎片残留，并将冲洗液全部倒入细胞筛中。将18号针头安装至20毫升注射器上后，用卵泡冲洗液充满注射器。用止血钳夹住40微米细胞筛，倒置于方形培养皿上方，用注射器冲洗细胞筛内容物至培养皿中。将方形培养皿转移至体视显微镜下，显微镜载物台温度设置为38.5摄氏度，放大倍数设定在1.25至3.2倍之间。在方形培养皿中识别卵泡后，使用显微移液器将卵泡转移至洗涤液滴中。采用6分钟组织匀浆法每重复实验所分离得到的前腔卵泡总数平均为41个，范围在11至135个卵泡之间。对476个分离卵泡的发育阶段进行评估显示，大多数卵泡处于初级发育阶段，直径为40至79微米，含有一层立方状颗粒细胞。在相同转速下，卵巢皮质组织匀浆6分钟所获得的前窦状卵泡数量多于匀浆5分钟。通过逆转录定量PCR检测卵泡中颗粒细胞标志物FSH受体和生殖细胞标志物DAZL的转录表达水平，结果显示初级卵泡和早期次级卵泡均表达FSH受体和DAZL的转录本。在初级和早期次级阶段的分离前腔前卵泡中，CX37的免疫荧光定位显示，CX37定位于卵母细胞质中，卵母细胞核内无信号，且在颗粒细胞膜上亦有定位。根据我们的经验，正确分离一层薄的皮质组织、将组织切割至合适大小以及充分匀浆是确保从组织中释放出具有活性卵泡的关键步骤。分离得到的前腔前卵泡可用于研究前腔前卵泡生长的调控机制以及颗粒细胞与卵母细胞之间相互作用的性质，从而有助于建立更高效的体外培养条件。

isolation-small-preantral-follicles-from-bovine-ovary-using

Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

使用碎裂、均质化和连续过滤的组合从牛卵巢中分离小的前窦卵泡

介绍了一种将卵巢卵泡包埋于三维纤维蛋白-海藻酸盐互穿网络的新方法。该系统结合了结构支撑与蛋白水解降解特性，可支持未成熟卵泡发育并产生成熟卵母细胞。该方法也可用于培养细胞聚集体，以维持细胞间接触，同时不限制其扩展。...

一种用于卵泡包封及在蛋白酶可降解三维系统中培养的方法

本视频介绍了从新获取的小鼠卵巢中分离窦状卵泡卵母细胞的方法。这些窦状卵泡卵母细胞可用于进一步的表征和发育研究。...

小鼠窦卵泡卵母细胞分离：从新鲜获取的小鼠卵巢中分离窦卵泡卵母细胞的方法

本视频介绍了从猪卵巢中分离卵丘-卵母细胞复合体（COC）的技术。分离得到的完整COC可用于体外受精实验——这是一种辅助生殖技术，可用于开发生育治疗方案。...

猪卵丘卵母细胞复合体的分离：一种用于体外受精的从猪卵巢卵泡中分离卵丘卵母细胞复合体的技术

本文展示了两种在三维培养条件下包封猪卵母细胞的实验方案。第一种方法是将卵丘-卵母细胞复合体（COCs）包封于纤维蛋白-海藻酸盐微珠中；第二种方法是将其与氟化乙烯丙烯粉末颗粒（微型生物反应器）共同封装。这两种系统均可提供最佳条件，以维持卵母细胞的三维结构。...

蛋白酶可降解的海藻酸盐水凝胶与疏水性微型生物反应器用于猪卵母细胞包封

我们描述了从发育早期阶段的卵巢卵泡中分离生长中卵母细胞的操作步骤，以及建立体外培养体系的方法，该体系可支持卵母细胞生长并分化至完全成熟阶段。...

牛早期腔前卵泡卵母细胞的体外培养策略

本文介绍了一种分离斑马鱼卵巢卵泡中滤泡细胞与卵母细胞的简便方法，该方法将有助于开展斑马鱼卵巢发育的相关研究。...

斑马鱼卵巢卵泡中滤泡细胞与卵母细胞的分离

本文介绍了从窦状卵泡中鉴定和纯化卵巢细胞的实验方案。我们详细阐述了对整个卵巢进行处理的方法，以便冷冻保存皮质条带，同时收集完整的窦状卵泡；这些卵泡通过酶消化处理，以分离出多种卵泡定居细胞类型，包括颗粒细胞、膜细胞、内皮细胞、造血细胞和基质细胞。...

从人窦状卵泡中提取、标记和纯化谱系特异性细胞

本文介绍了一种从冻融后的卵巢皮质组织中分离人卵巢卵泡以进行基因表达分析的实验方案。...

人类卵泡中的基因表达分析

本文介绍一种分离禽类排前卵泡中卵黄、颗粒细胞和膜细胞的实验方案。这种精细操作方法有助于深入研究这些结构层在生殖功能中的作用，推动对卵泡发育、激素调控以及疾病机制的理解，从而为提高农业产出和获得生物医学新见解提供支持。...

用于下游应用的禽类排前卵泡颗粒层与膜层细胞的分离

本方案描述了一种利用酪胺交联透明质酸水凝胶包封并培养小鼠卵巢前腔卵泡的新型三维（3-D）培养模型。我们还详细介绍了通过玻璃化冷冻法进行卵巢卵泡冷冻保存的两种方法。...

一种新型透明质酸水凝胶在卵泡三维培养中的应用及小鼠卵巢卵泡冷冻保存方法

本文介绍了一种牛膜细胞与颗粒细胞的共培养模型。该方法有望为研究卵泡内体细胞之间旁分泌通讯及底物转运的相关分析提供可靠的实验基础。...

一种改良的共培养系统用于研究牛卵巢中颗粒细胞-膜细胞的相互作用

学习从牛卵巢中高效分离早期窦前卵泡的机械方法，采用切碎、均质化和连续过滤技术。该方法可提高卵泡存活率，为卵泡发生学研究和多种物种的生育力保存提供新机会。

利用组织破碎、匀浆及连续过滤相结合的方法从牛卵巢中分离小型前腔卵泡

探索更多视频