九日龄小鼠幼崽的肝外胆管和胆囊解剖

许多评估肝外胆道系统的研究报告指出，他们获得了样本，但未说明样本获取方法，这引发了可比性方面的问题。该技术的主要优势在于能够完整分离整个肝外胆道系统，并可无创地去除污染细胞。我们的分离方案可广泛应用于以分离肝外胆道系统为目标的、针对小鼠新生儿胆管疾病的研究实验。

该方案的某些特点，例如将胃与十二指肠保持连接，可能在十二指肠闭锁的研究中具有价值，可借助胃部排出的半消化乳汁实现正确的解剖定位。在初期，该技术可能需要一定的训练时间。通过反复练习并遵循逐步操作的方法，可提高操作速度和实验效果。

首先，将已消毒并经高压灭菌的器械放置在手术台旁的无菌表面上。在腹膜上做一切口后，沿左侧额腋前线将切口延伸至断头位置。使用无创镊子从左侧向右侧剥离皮肤。

在显微镜下，夹住脾脏周围的腹膜。轻轻提起腹膜，使其形成类似帐篷的结构，并在中央剪开一个一毫米的孔。等待腹膜帐篷内充满空气。

沿下部肋骨、双侧腹部侧区及膀胱下区所构成的窗框切开腹膜，确保充分暴露肝脏、胆道系统、胃、小肠和结肠。通过将剑突轻轻牵拉至头侧腹方，仔细检查胆囊及胆管。

避免撕裂镰状韧带，以免导致胆囊与胆道系统分离。随后，松解剑突的牵拉。轻柔下拉十二指肠，以游离胆道系统。

随后，通过识别连接胆管系统与十二指肠的十二指肠乳头，进行下方整块游离。在乳头右侧约两厘米处横向切断十二指肠，然后切断幽门区域。

确保胃内容物位于切割位置与十二指肠乳头之间的幽门区域。进行上部整块游离时，轻轻牵拉剑突，暴露镰状韧带。在胆囊与剑突附近之间的镰状韧带上做一个一厘米长的切口。

切断肝脏与胸腔之间的连接结构，包括食管、下腔静脉、胸主动脉以及围绕肝脏裸区的所有韧带。同时切断所有背部残留的组织连接。在20倍显微放大下，将整块标本置于泡沫垫上。

通过将样本重新排列至正确的解剖位置来完成组装。轻柔操作，展平十二指肠的口侧和反口侧部分。使用无创镊子，从十二指肠乳头开始展平，并持续向切缘方向进行。

然后，将胃的白色絮状内容物在十二指肠的口侧部分铺平。辨认十二指肠的口侧与反口侧，以排除胆管可能发生的旋转。在解剖胆管前，剪除肝脏组织的大块残留物。

经过几次刮取操作后，将样本转移至泡沫垫上更洁净的位置。利用背景中挤压较少的肝组织，以优化视野，便于区分EBDS与不需要的细胞。继续处理肝十二指肠韧带，直至仅剩分离出的EBDS。

观察肝动脉和门静脉，它们起自十二指肠乳头口部约3至5毫米处，呈白色且极为纤细的丝状结构。小心地向左侧外方轻轻牵拉，去除这一纤细组织。确保刮除动作从胆道系统开始，逐步移向肝脏边界。

采用本方案，从出生九天的小鼠幼崽中分离出肝胰壶腹。从胆囊至十二指肠乳头的游离肝胰壶腹长度小于10毫米，其细小的胆总管直径介于0.05至0.2毫米之间。对管腔开放的肝胰壶腹纵向切面进行了苏木精-伊红染色。

胆管上皮细胞以单层形式围绕管腔分布，并被染成较深的颜色。研究人员应共享并标准化解剖和注射等操作技术，以提高研究及其结果的可比性和快速应用性。在进行组织学和单细胞研究（如肝内和肝外胆管上皮细胞的分离）之前先进行解剖，将有助于减少细胞培养中的污染。