Multi-Photon Laser Ablation of Cytoplasmic Microtubule Organizing Centers in Mouse Oocytes

Daniela Londo&#241;o-V&#225;squez; Alexander Jurkevich; Ahmed Z. Balboula

doi:10.3791/64439

JoVE Journal
Developmental Biology

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JoVE Journal Developmental Biology

Multi-Photon Laser Ablation of Cytoplasmic Microtubule Organizing Centers in Mouse Oocytes

小鼠卵母细胞质微管组织中心的多光子激光消融

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November 11, 2022

DOI: 10.3791/64439-v

Daniela Londoño-Vásquez^1,2, Alexander Jurkevich³, Ahmed Z. Balboula¹

¹Animal Sciences Research Center,University of Missouri, ²Universidad Nacional de Colombia, ³Advanced Light Microscopy Core,University of Missouri

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提出了一种优化的方案，该方案能够使用近红外飞秒激光在中期I期间消耗小鼠卵母细胞中的细胞质微管组织中心。

该方案提供了一种极好的策略来选择性消融细胞质 MTOCs，细胞质 MTOCs 是小鼠卵母细胞中纺锤体定位的关键调节因子。因此有助于我们了解调节卵母细胞减数分裂的分子机制。该技术允许在活卵母细胞内进行靶向消融，空间精度高，对细胞的光毒性影响最小。该方案可用于诱导不同讲师的选择性机械扰动，而不会改变细胞活力。该方案需要在尽可能短的时间内消融所有细胞质 MTOC 的技术技能，以避免损害卵母细胞的活力。因此，在进行实际实验之前多次练习这种技术是必不可少的。首先，用谷氨酰胺和米力农补充 CZB 培养基，并将其放入培养箱中。准备采集和培养菜肴。分别在 60 和 35 mm 培养皿中制备四微滴收集培养基和两微滴培养基。并用矿物油覆盖它们。将收集皿放在载玻片加热器上，并在 37 下孵育