Name: 从健康和视网膜疾病特异性人诱导的多能干细胞中生成视网膜类器官 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-12-09T13:40:00.000+00:00
Duration: 9 min 47 s
Description: 了解将人诱导多能干细胞分化为三维神经视网膜类器官的高效方法。该技术结合贴壁与悬浮培养，支持选择性富集视网膜类器官和RPE细胞，为研究视网膜发育及退行性疾病提供可靠的体外模型。

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作者感谢海得拉巴LV普拉萨德眼科研究所的遗传学家Chitra Kannabiran博士、视网膜顾问Subhadra Jalali博士、眼整形外科医生Milind Naik博士以及眼肿瘤学家Swathi Kaliki博士在建立正常及患者特异性iPSC细胞系过程中提供的科学与技术支持。作者感谢R&amp;印度政府科学与工程研究委员会、科学技术部（IM）（SB/SO/HS/177/2013）、生物技术部（IM）（BT/PR32404/MED/30/2136/2019）提供的资助，以及印度医学研究理事会（S.M.，D.P.）、大学 Grants 委员会（T.A.）和科学与工业研究理事会（V.K.P.）提供的高级研究奖学金。

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<li>Kelley, R. A., Chen, H. Y., Swaroop, A., Li, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+development+of+rod+photoreceptors+in+retinal+organoids+derived+from+human+pluripotent+stem+cells+by+supplementation+with+9-cis+retinal%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protocols%22%5BJournal%5D)">Accelerated development of rod photoreceptors in retinal organoids derived from human pluripotent stem cells by supplementation with 9-cis retinal.</a> STAR Protocols. 1 (1), 100033(2020).</li>
<li>Zhou, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+into+cone+photoreceptors+through+simultaneous+inhibition+of+BMP%2C+TGFbeta+and+Wnt+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Differentiation of human embryonic stem cells into cone photoreceptors through simultaneous inhibition of BMP, TGFbeta and Wnt signaling.</a> Development. 142 (19), 3294-3306 (2015).</li>
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所有作者均无利益冲突或财务披露。

hiPSCs 是研究器官和组织发育的有力工具 体外 通过将健康个体与疾病特异性的人诱导多能干细胞（hiPSCs）向视网膜谱系分化，模拟疾病表型，有助于深入理解不同类型遗传性视网膜营养不良的病理生理机制。目前已报道并采用多种方案用于 体外 将PSCs分化为视网膜细胞类型。大多数方法涉及使用含有复杂混合物的培养基，包括重组生长因子、添加剂、小分子和试剂，例如：N1、N2和B27添加剂；BMP和TGFβ信号通路阻断剂如Noggin、SB431542、LDN193189和Follistatin，或诱导剂如Activin A、Lefty和IDE1；经典Wnt信号通路阻断剂如DKK1、SFRP、IWP-2和IWR-1-endo，或诱导剂如CHIR99021、SB216763和CKI-7；FGF受体信号通路阻断剂如PD0325901和PD173074，或诱导剂如bFGF；Notch信号通路抑制剂如DAPT；其他信号分子如胰岛素样生长因子（IGF-1）；视黄酸；生长激素如三碘甲状腺原氨酸（T3）和氢化可的松；以及抗氧化剂和其他促存活因子如抗坏血酸、烟酰胺、牛磺酸、二十二碳六烯酸、1-硫代甘油等。这些成分在干细胞分化的...

视网膜是位于脊椎动物眼球后部的一种对光敏感的组织，通过一种称为光转导通路的生化现象将光信号转化为神经冲动。视网膜中的感光细胞产生的初始神经冲动被传递至其他视网膜中间神经元和视网膜神经节细胞（RGCs），并最终到达大脑的视觉皮层，从而实现图像感知和视觉反应。
根据世界卫生组织（WHO）估计，全球约有150万名儿童失明，其中100万位于亚洲。遗传性视网膜营养不良（IRD）是一种主要致盲性疾病，全球每4,000人中约有1人受其影响。1,2,3，而发展中国家与年龄相关性黄斑变性（AMD）相关的盲症患病率介于0.6%至1.1%之间4. 视网膜遗传性疾病（IRDs）由300多个与视网膜发育和功能相关的基因遗传性缺陷引起5此类基因改变会导致视网膜正常功能受损，以及视网膜细胞（即光感受器细胞和视网膜色素上皮细胞（RPE））的逐渐退化，从而引起严重的视力丧失甚至失明。在涉及角膜、晶状体等其他致盲性疾病的治疗方面已取得巨大进展。然而，截至目前，视网膜营养不良和视神经萎缩尚无任何经证实有效的治疗方法。由于成年人大脑中的视网膜不含干细胞6，其他来源如胚胎干细胞（ESCs）和患者来源的诱导多能干细胞（iPSCs）可提供无限量的目标细胞类型，在构建复杂组织类器官方面具有巨大潜力，可用于 体外 疾病建模研究及再生治疗开发7,8,9,10.
多年来的视网膜研究加深了人们对调控早期视网膜发育的分子事件的理解。目前大多数从多能干细胞（PSCs）生成视网膜细胞和三维类器官的方案均旨在重现这些发育过程 体外 通过在含有多种生长因子和小分子的复杂培养体系中逐步调控已知的生物学过程来培养细胞。由此生成的视网膜类器官包含主要的视网膜细胞类型：视网膜神经节细胞（RGCs）、中间神经元、光感受器细胞和视网膜色素上皮细胞（RPE）11,12,13,14,15,16,17,18,19尽管已成功尝试利用视网膜类器官建立遗传性视网膜疾病（IRDs）模型，但大多数实验方案仍面临重大挑战，主要体现在分化过程中需要复杂的生长因子和小分子化合物组合，且视网膜类器官生成效率相对较低。这些方案主要包括胚状体的形成，随后在不同发育阶段采用复杂的培养条件，逐步将其分化为视网膜谱系 体外&#160;发育20,21,22.
本文报道了一种从健康对照和视网膜疾病特异性人诱导多能干细胞（hiPSCs）高效且稳健地生成复杂三维神经视网膜类器官的简化方法。该方案采用接近汇合的hiPSC培养物进行直接分化，无需形成拟胚体。同时，培养基成分得到简化，使该技术成本较低且可重复性强，便于新研究人员快速掌握。该方法采用一种混合培养系统：在视网膜分化的前4周采用贴壁单层培养，直至出现明显、自组织形成的视泡前体细胞簇（EFPs）。随后，手动挑选每个EFP中形成的环状神经视网膜岛状结构，并将其转入悬浮培养1至2周，以生成包含PAX6+和CHX10+增殖性神经视网膜前体细胞的多层三维视杯或类器官。将视网膜类器官在含100 µM牛磺酸的培养基中进一步延长培养4周后，可分化出RCVRN+和CRX+的光感受器前体细胞及具有初步内节样突起的成熟细胞。

<table><tbody><tr><td>0.22 &amp;micro;m 注射器滤器</td><td>TPP</td><td>99722&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>15 mL 离心管</td><td>TPP</td><td>91015</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 离心管</td><td>TPP</td><td>91050</td><td></td></tr><tr><td>6 孔板</td><td>TPP</td><td>92006</td><td></td></tr><tr><td>抗 Chx10 抗体；小鼠单克隆</td><td>Santa Cruz</td><td>SC365519</td><td>1:50 稀释</td></tr><tr><td>抗 CRX 抗体；兔单克隆</td><td>Abcam</td><td>ab140603</td><td>1:300 稀释</td></tr><tr><td>抗 MiTF 抗体，小鼠单克隆</td><td>Abcam</td><td>ab3201</td><td>1:250 稀释</td></tr><tr><td>抗 Recoverin 抗体；兔多克隆&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td>Millipore</td><td>AB5585</td><td>1:300 稀释</td></tr><tr><td>B-27 添加剂（50 倍浓度），无血清</td><td>Thermo Fisher</td><td>17504044</td><td></td></tr><tr><td>碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）</td><td>Sigma Aldrich</td><td>F0291</td><td></td></tr><tr><td>Centrifuge 5810R 离心机</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Coplin 染色缸（50 mL）</td><td>Tarson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Corning Matrigel hESC 认证基质</td><td>Corning</td><td>354277</td><td></td></tr><tr><td>冻存管（CryoTubes）</td><td>Thermo Fisher</td><td>V7884</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F-12，含 GlutaMAX 添加剂（基础培养基）</td><td>Thermo Fisher</td><td>10565-018</td><td></td></tr><tr><td>DreamTaq DNA 聚合酶</td><td>Thermo Fisher</td><td>EP0709</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&amp;rsquo;s 磷酸盐缓冲液</td><td>Thermo Fisher</td><td>14190144</td><td></td></tr><tr><td>Essential 8 培养基试剂盒</td><td>Thermo Fisher</td><td>A1517001</td><td></td></tr><tr><td>乙二胺四乙酸二钠盐二水合物（EDTA）</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E5134</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 非组织培养处理培养皿，60 mm&amp;nbsp;</td><td>Corning</td><td>351007</td><td></td></tr><tr><td>胎牛血清，经认证，美国来源&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td>Gibco</td><td>26140079</td><td></td></tr><tr><td>配备 Image Lab 软件的 GelDocXR+ 系统</td><td>BIO-RAD</td><td></td><td>琼脂糖凝胶成像系统&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>GlutaMAX 添加剂</td><td>Thermo Fisher</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>山羊抗小鼠 IgG（H+L），Alexa Fluor 488 标记</td><td>Invitrogen</td><td>A11001</td><td>1:300 稀释</td></tr><tr><td>山羊抗小鼠 IgG（H+L），Alexa Fluor 546 标记</td><td>Invitrogen</td><td>A11030</td><td>1:300 稀释</td></tr><tr><td>山羊抗兔 IgG（H+L），Alexa Fluo 546 标记</td><td>Invitrogen</td><td>A11035</td><td>1:300 稀释</td></tr><tr><td>山羊抗兔 IgG（H+L），Alexa Fluor 488 标记</td><td>Invitrogen</td><td>A11008</td><td>1:300 稀释</td></tr><tr><td>HistoCore MULTICUT 切片机</td><td>Leica</td><td></td><td>用于切片</td></tr><tr><td>KnockOut 血清替代物</td><td>Thermo Fisher</td><td>10828028</td><td></td></tr><tr><td>L-抗坏血酸</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A92902</td><td></td></tr><tr><td>MEM 非必需氨基酸溶液（100 倍浓度）</td><td>Thermo Fisher</td><td>11140-050</td><td></td></tr><tr><td>N2 添加剂（100 倍浓度）</td><td>Thermo Fisher</td><td>17502048</td><td></td></tr><tr><td>NanoDrop 2000 核酸定量仪</td><td>Thermo Fisher</td><td></td><td>用于 RNA 定量</td></tr><tr><td>多聚甲醛</td><td>Qualigens</td><td>23995</td><td></td></tr><tr><td>巴斯德吸管，9 英寸，非无菌，未堵塞</td><td>Corning</td><td>7095D-9</td><td></td></tr><tr><td>青霉素-链霉素&amp;nbsp;</td><td>Thermo Fisher</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>重组抗 Otx2 抗体，兔单克隆</td><td>Abcam</td><td>ab183951</td><td>1:300 稀释</td></tr><tr><td>重组抗 PAX6 抗体；兔单克隆</td><td>Abcam</td><td>ab195045</td><td>1:300 稀释</td></tr><tr><td>重组抗 RPE65 抗体，兔单克隆</td><td>Abcam</td><td>ab231782</td><td>1:300 稀释</td></tr><tr><td>重组人 Noggin 蛋白</td><td>R&amp;D Systems</td><td>6057-NG</td><td></td></tr><tr><td>SeaKem LE 琼脂糖</td><td>Lonza</td><td>50004</td><td></td></tr><tr><td>血清移液管，10 mL</td><td>TPP</td><td>94010</td><td></td></tr><tr><td>血清移液管，5 mL</td><td>TPP</td><td>94005</td><td></td></tr><tr><td>氯化钠</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S7653</td><td></td></tr><tr><td>柠檬酸三钠二水合物</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S4641</td><td></td></tr><tr><td>Starfrost（硅烷涂层）载玻片</td><td>Knittel</td><td></td><td></td></tr><tr><td>SuperScript III 第一链合成系统</td><td>Thermo Fisher</td><td>18080051</td><td></td></tr><tr><td>用于 RT-PCR 的 SuperScript III 第一链合成系统</td><td>Invitrogen</td><td>18080051</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T8787</td><td></td></tr><tr><td>TRIzol&amp;nbsp;试剂</td><td>Invitrogen</td><td>15596026</td><td></td></tr><tr><td>UltraPure 0.5 M EDTA，pH 8.0</td><td>Thermo Fisher</td><td>15575020</td><td></td></tr><tr><td>含 DAPI 的 VECTASHIELD 抗荧光淬灭封片剂&amp;nbsp;</td><td>Vector laboratories</td><td>H-1200&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>玻连蛋白（Vitronectin）</td><td>Thermo Fisher</td><td>A27940</td><td></td></tr><tr><td>Y-27632 二盐酸盐（Rho 激酶抑制剂）</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Y0503</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss LSM 880 共聚焦显微镜</td><td>Zeiss</td><td></td><td>共聚焦显微镜</td></tr></tbody></table>

由健康及视网膜疾病特异性人诱导性多能干细胞生成视网膜类器官

Generation of Retinal Organoids from Healthy and Retinal Disease-Specific Human-Induced Pluripotent Stem Cells

多能干细胞可以生成复杂的组织类器官，这些类器官在 体外 疾病建模研究及再生治疗开发。本方案描述了一种更简单、稳健且分步明确的方法，用于在混合培养系统中生成视网膜类器官。该系统在视网膜分化的前4周采用贴壁单层培养，直至出现界限清晰、自组织形成的视泡前体细胞簇（EFPs）。随后，将每个EFP中呈环形、透光的类甜甜圈状神经视网膜岛状结构手动挑选出来，转移至非贴壁培养皿中，在视网膜分化培养基中进行悬浮培养1-2周，以生成多层结构的三维视杯（OC-1M）。这些未成熟的视网膜类器官含有PAX6+ 和 ChX10+ 增殖性多能视网膜前体细胞。前体细胞在类器官内呈线性自组装，表现为明显的放射状条纹。悬浮培养4周后，视网膜前体细胞经历有丝分裂后停滞并启动谱系分化，形成成熟视网膜类器官（OC-2M）。光感受器谱系定向的前体细胞发育于视网膜类器官的最外层。这些CRX+ 和RCVRN+ 光感受器细胞在形态上成熟，表现出类似内节的突起。该方法可用于利用人胚胎干细胞（hESCs）和诱导性多能干细胞（iPSCs）生成视网膜类器官。所有步骤和操作均得到清晰阐述与演示，以确保可重复性，并促进其在基础科学和转化研究中的广泛应用。

通过在不同时间点分阶段使用含有补充剂和生长因子的不同培养基组合对hiPSCs进行培养，可实现其向眼谱系的分化，具体方法如所述。 图1hiPSC 细胞培养物在Essential 8培养基（一种多能干细胞维持培养基）中维持培养。当细胞汇合度达到70%–80%时（图2A)，在第0天将培养基更换为含1 ng/mL bFGF、1 ng/mL Noggin和1% N2补充剂的分化诱导培养基（DIM）（参见步骤3.2）。N2补充剂具有神经诱导作用，而Noggin作为BMP信号通路抑制剂，可通过阻断中胚层和内胚层分化，对引导细胞向神经外胚层谱系分化发挥关键作用。在第1天st, 2nd3rd 天起，Noggin 的浓度增加至 10 ng/mL（参见步骤 3.3 和 3.4）。从第 4th 第几天，将DIM替换为视网膜分化培养基（RDM）（步骤3.5），培养物持续培养至多30天。RDM培养基中的B27含有多种附加补充成分，如多种抗氧化剂和D-半乳糖，可...

本方案描述了一种利用简化的培养条件，将人诱导多能干细胞（hiPSCs）高效分化为视泡样细胞簇并生成神经视网膜类器官的方法，该培养过程结合了贴壁培养和悬浮培养体系。在视网膜培养物中成熟的视泡结构内，还可分离出其他眼部细胞类型，如视网膜色素上皮细胞（RPE）和角膜上皮细胞。

多能干细胞可以生成复杂的组织类器官，这些类器官可用于体外疾病建模研究以及再生医学的开发……

本方案描述了一种简单且高效的方法，可将人诱导性多能干细胞（IPCs）分化为复杂的三维神经视网膜类器官，用于科研和再生医学应用。该技术结合了贴壁培养和悬浮培养，能够选择性地挑选并富集视网膜类器官和视网膜祖细胞（RP细胞）。该方法可为视网膜变性疾病开发基于细胞的治疗策略提供稳定且充足的细胞来源。这类由干细胞衍生的视网膜类器官和视网膜色素上皮（RPE）细胞可作为体外模型，用于研究眼部发育及遗传性视网膜疾病。对于已熟悉人类诱导多能干细胞（iPSC）培养操作的研究实验室而言，该方法易于重复。通过视觉演示，可显著帮助识别眼区结构，并根据其空间位置和形态学特征分离神经视网膜杯状结构。首先，从六孔板中70%至80%融合的人诱导多能干细胞（iPSC）培养物中吸除废弃培养基。向各孔加入PBS，轻轻晃动后吸除洗涤缓冲液。随后每孔加入1毫升细胞解离溶液（cell dissociation solution，CDS），于37°C孵育5至7分钟，直至细胞变圆。 吸去CDS，将细胞悬液收集至15毫升离心管中。在室温下以1,000 RPM离心4分钟。弃去上清液，并将细胞沉淀重悬于1.2毫升Essential 8培养基中。将200微升细胞悬液加入含有1.5毫升IPSC培养基和10微摩尔Y27632的基质包被六孔板的每个孔中。12至24小时后，移除用过的培养基，并加入预热的不含Y27632的完全Ascension培养基以维持培养。每隔24小时更换一次培养基，直至细胞融合度达到70%至80%。在第0天，吸除人iPSC维持培养基，向六孔板中加入含有1纳克/毫升BFGF和1纳克/毫升Noggin的分化诱导培养基。将细胞置于37摄氏度、5%二氧化碳培养箱中孵育。在第1天，吸除用过的培养基，更换为含有1纳克/毫升BFGF和10纳克/毫升Noggin的分化诱导培养基。将细胞再次于37摄氏度、5%二氧化碳培养箱中孵育。在第2天和第3天，移除用过的培养基，并加入含有10纳克/毫升Noggin的分化诱导培养基。向6孔板每孔加入2毫升培养基后，于37摄氏度、5%二氧化碳培养箱中孵育细胞，并每24小时更换一次培养基。第四天，移除用过的培养基，加入视网膜分化培养基（RDM）。按照相同步骤，向六孔板每孔加入两毫升培养基，并将培养物置于培养箱中孵育。每天更换一次培养基。在第14天和第18天左右，在10倍显微镜下观察培养物，检查是否出现由早期眼场前体细胞组成的神经玫瑰花环样结构。在第21天和第28天左右，在4倍和10倍显微镜下观察培养物，观察自组织形成的、具有明确特征的早期眼场前体细胞（EFPs），其表现为中央圆形三维神经视网膜结构的岛状区域，周围连续延伸出神经上皮和眼表上皮。取一支无菌巴斯德吸管，一手握住其管身底部，另一手握住毛细管尖端。将毛细管尖端中部附近区域在火焰上进行灼烧灭菌，并通过旋转操作加热，直至玻璃变软。随后移开火焰，迅速向外拉伸毛细管尖端，形成具有闭合管腔的细尖毛细管。将细尖水平置于火焰前方，快速向外通过火焰，以形成光滑的钩状或L形毛细管尖端。在体视显微镜下，使用毛细钩的光滑外曲部分作为精细刮勺，手动挑选形态良好的神经视网膜杯状结构。在第25天和第30天，向低吸附60毫米培养皿中加入4毫升预热的视网膜分化培养基，用于培养和维持视网膜杯状结构，以生成三维视网膜类器官。此步骤应在收获神经视网膜杯状结构之前完成。将1毫米移液器设置为吸取100微升，并使用带有宽口的1毫升微孔吸头吸取并转移漂浮的视网膜杯至先前准备好的低黏附培养皿中。将视网膜杯维持在RDM培养基中，作为非黏附悬浮培养物，并在37摄氏度、5%二氧化碳培养箱中孵育。在第30天和第45天，采用部分换液方法，移除一半用过的培养基体积，并加入等量的新鲜培养基。在第45天和第60天，将视网膜类器官继续在含有100微摩尔牛磺酸的RDM培养基中培养两周，以促进神经视网膜前体细胞的存活和谱系分化，并支持成熟视网膜细胞类型的发育。在不同成熟阶段，通过RT-PCR和免疫组织化学检测视网膜类器官中多种视网膜前体细胞标志物的表达情况。RT-PCR结果证实，在一个月龄和两个月龄的视网膜类器官中，神经视网膜标志物均被成功诱导并表达。本图显示了使用针对神经视网膜前体细胞标志物Chx10、PAX6和Otx2的抗体对未成熟视网膜类器官切片进行免疫标记的共聚焦图像，以及使用针对光感受器前体细胞标志物recoverin和CRX的抗体对成熟视网膜类器官切片进行免疫标记的共聚焦图像。图中展示了视网膜类器官最外层正在分化的光感受器细胞区域的放大图像。白色箭头标示出初步形成的类似内节的突起结构。EFP 与中心的神经视网膜杯状结构聚集在一起，迁移的视网膜色素上皮（RPE）向外生长，其前沿边缘显示出色素沉着。此处显示的是围绕神经视网膜岛四周多个 EFP 产生的高度分化且带有色素的上皮外延生长。EFP 的高倍放大图像显示了 RPE 前体细胞的迁移区域以及环绕神经视网膜杯状结构的眼表上皮。此处展示的是形成单层的未成熟视网膜色素上皮（RPE）细胞的长期贴壁培养物，其中包含有色素和无色素的细胞。在第60天，完全成熟且具有色素的RPE细胞单层培养物呈现鹅卵石样形态。本图展示了表达PAX6、MITF和RPE65的RPE细胞。这些图像显示了具有异常聚集的视网膜前体细胞的EFP，其层状结构扭曲且缺乏条纹状排列。本图展示了具有微型神经视网膜杯的EFP，但缺乏周围的RPE区域和眼表上皮。代表性图像显示了在悬浮培养中形成的不规则神经视网膜聚集物。使用接近融合状态的增殖性 IPC 培养物启动分化过程至关重要，可在三至四周内高效诱导眼区形成。由正常及患者特异性 IPCs 生成的视网膜类器官和视网膜色素上皮（RPE）细胞可作为视网膜疾病模型，并用于测试新型治疗药物。

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Research

科研

JoVE Journal

Developmental Biology

发育生物学

从健康和视网膜疾病特异性人诱导的多能干细胞中生成视网膜类器官

利用多能干细胞生成特化的视网膜细胞是干细胞治疗视网膜疾病发展过程中的一个关键转折点。本文介绍了一种简单的方法，可高效地生成用于基础研究、转化研究和临床研究的视网膜类器官和视网膜色素上皮细胞。...

无饲养层且无异源成分的培养条件用于生成人iPSC来源的视网膜细胞模型

本文介绍了一种逐步生成成熟人类视网膜类器官的实验方案，并将其应用于光感受器毒性检测，以筛选针对年龄相关性视网膜变性疾病——2型黄斑毛细血管扩张症（MacTel）的潜在药物候选分子。...

用于药物发现的人类视网膜类器官毒性筛选

采用自组织方法，我们开发了一种通过添加COCO显著提高感光细胞生成的方案。...

由人多能干细胞定向诱导视网膜类器官

本文介绍了一种优化的视网膜类器官诱导系统，该系统适用于多种人类多能干细胞系，可高效且高重复性地生成视网膜组织。...

人多能干细胞衍生三维视网膜组织的视网膜类器官诱导系统

本方案描述了一种优化的三维神经视网膜诱导系统，可减少视网膜类器官的黏附与融合，具有高重复性和高效率。...

由人多能干细胞生成神经视网膜

由干细胞衍生的视网膜色素上皮（RPE）细胞可用于多种应用，包括针对视网膜变性的细胞治疗、疾病建模以及药物研究。本文介绍一种简单且可重复地从干细胞分化获得RPE细胞的实验方案。...

高效诱导干细胞分化为视网膜色素上皮细胞

本报告的目的是描述利用不同大小的拟胚体从诱导多能干细胞（iPS细胞）分化获得视网膜色素上皮（RPE）的实验方案。...

通过不同大小的拟胚体从诱导性多能干细胞（iPS细胞）中分化视网膜色素上皮细胞（RPE）

本论文提供了从拔取的毛发中分离和培养人角质形成细胞，并通过附加体型载体进一步生成无整合的人诱导性多能干细胞（hiPSCs）的逐步操作流程。...

利用毛发来源的角质形成细胞生成无整合的人诱导性多能干细胞

锥体神经元的树突棘是哺乳动物大脑皮层中大多数兴奋性突触的所在部位。本方法描述了对来源于诱导 多能干细胞的人类皮层锥体谷氨酸能神经元的树突棘形态进行三维定量分析。...

源自人诱导性多能干细胞的锥体神经元树突棘三维定量分析

本文介绍了一种可扩展且符合优良生产规范（GMP）的人多能干细胞向肝细胞样细胞分化的体系。该体系为开展基础和应用型人类肝脏研究提供了成本效益高且标准化的人肝细胞样细胞制备方法。...

由人多能干细胞定义明确且可扩展地生成肝细胞样细胞

了解将人诱导多能干细胞分化为三维神经视网膜类器官的高效方法。该技术结合贴壁与悬浮培养，支持选择性富集视网膜类器官和RPE细胞，为研究视网膜发育及退行性疾病提供可靠的体外模型。

由健康及视网膜疾病特异性人诱导性多能干细胞生成视网膜类器官

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