Analysis of T-cell Receptor-Induced Calcium Influx in Primary Murine T-cells by Full Spectrum Flow Cytometry

Loni Perrenoud; James Conley; Leslie J. Berg

doi:10.3791/64526

JoVE Journal
Immunology and Infection

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JoVE Journal Immunology and Infection

Analysis of T-cell Receptor-Induced Calcium Influx in Primary Murine T-cells by Full Spectrum Flow Cytometry

全谱流式细胞术分析原代小鼠T细胞受体诱导的钙内流

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10:01 min

December 16, 2022

DOI: 10.3791/64526-v

Loni Perrenoud¹, James Conley¹, Leslie J. Berg¹

¹Department of Immunology and Microbiology,University of Colorado-Anschutz School of Medicine

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

钙内流是T细胞信号传导的量度，是分析对T细胞受体刺激反应的有效方法。该协议将Indo-1与针对细胞表面分子的抗体组合多重化，利用了全光谱流式细胞术的高度灵活性。

该协议允许研究人员同时测量原代T细胞中的钙反应，同时评估其亚群和表面表型。这种技术的主要优点是它避免了在检查其钙反应之前分离特定细胞亚群的需要。首先，通过将 50 微升 DMSO 添加到含有 50 微克 Indo-1 AM 的小瓶中，制备每微升 1 微克的 Indo-1 AM 储备溶液。将储备溶液稀释成适当体积的cRPMI，浓度为每毫升6微克。

将培养基放入 37 摄氏度的水浴中。然后使用该培养基以一比一的比例稀释先前制备的细胞悬液，以获得每毫升5至600万个细胞。接下来，向12孔组织培养板中，每个实验条件每孔加入一毫升细胞悬液。

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