部分坐骨神经结扎术:慢性神经性疼痛的小鼠模型，用于研究新疗法的抗伤害感受作用

由于现在正在研究大量用于治疗慢性疼痛的创新疗法，我们的协议为诱导神经性疼痛所需的手术标准化提供了关键概念。部分坐骨神经结扎术（PSNL）是研究神经性疼痛的有利模型，因为它再现了在患有神经性疼痛的人类中观察到的许多症状。由于PSNL再现了在患有神经性疼痛的人类中观察到的许多症状，因此该协议为研究和开发新的疼痛管理疗法提供了关键概念。

演示该程序的将是Kevin Cheng，我实验室的医学博士候选人。首先，在测试之前，将小鼠放在与测试室同一房间的金属丝网上的透明有机玻璃盒中，使小鼠习惯于Von Frey测试设备一小时。将一系列校准的细单丝垂直于悬挂在吊丝网笼中的动物的PSNL同侧后爪的播种机表面。

通过依次增加或减少对应于灯丝尺寸的刺激强度来确定退出阈值。当反应为负时增加细丝的大小，当动物收回爪子时减小细丝的大小。在数据表中报告阴性和阳性响应，并在第一次阳性响应后用不同的细丝测试同一爪子四次。

在测试之前，通过将小鼠放置在与测试室相同的房间的透明有机玻璃盒中，使小鼠习惯于哈格里夫斯测试装置一小时。使用哈格里夫斯设备建立基线爪子撤回延迟。将辐射热源聚焦到PSNL同侧后爪的花盆表面并开始刺激。

当动物收回爪子时，等待运动检测器停止刺激并停止计时器。调整热源的强度以获得大约 10 秒的爪子撤回延迟基线。接下来，将提款时间记录在表格中。

将热板设置为 52 摄氏度。将动物放入测试室并启动计时器。观察伤害性行为，并在观察到伤害性行为后立即停止计时器。

然后将动物从腔室中取出并记录此行为的延迟。确保清洁每只测试动物之间的任何尿液，以避免影响热刺激的温度。在动物之间用70%乙醇清洁测试室，以减少气味的行为影响。

要制作神经玻璃钩，请打开本生燃烧器。用一只手将玻璃棒的一端放在火上。当这根玻璃棒熔化时，用另一只手用另一根玻璃棒引导和拉动第一根玻璃棒上的熔化玻璃。

从火中取出第一根玻璃棒，让熔化部分的末端自然向内滚动，使用第二根玻璃棒形成小球形。用镊子捏住后爪上的脚趾以确保没有爪反射，并在涂抹润滑性眼药膏之前检查角膜眨眼反射。在选择在哪一侧进行手术时，将动物的后腿围绕大腿区域，下部朝向髌骨，上部朝向髋部和股骨上方。

接下来，用氯己定沿一个方向擦拭三次，用三个单独的纱布与温热的无菌盐水交替擦拭。然后将腿滑过 10 x 10 厘米无菌窗帘制成的缝隙，在所选腿周围形成无菌区域。使用精细的手术剪刀在大腿外侧的中线切开两毫米的小切口。

将剪刀以圆周运动滑入皮肤下以突破筋膜并产生间隙，从而扩大切口空间。接下来，使用绑钳在大腿肌肉上以 90 度角垂直创建一个尖锐的 1 厘米深切口。然后将细小剪刀也以90度角插入同一切口，并轻轻张开以分离肌肉，直到看到坐骨神经。

定位平行于垂直大腿的坐骨神经，沿髋关节至膝关节的方向。在继续之前，将绑钳中的剪刀从身体上取下。使用神经玻璃钩中的超细镊子将神经与下方隔离。

小心地将神经从股骨转子附近的结缔组织中解放出来，该部位最靠近髋部，离膝盖最远。让神经停留在玻璃棒上，并确保杆的末端防止神经滚落。在将坐骨神经分成腓总神经、胫神经和腓肠神经分支之前，使用九个零尼龙缝合线打一个手术结，以系住坐骨神经宽度的三分之一。

打结完成后，小心地将神经从玻璃棒上滑落，并将其塞回分离肌肉下方水平的原始位置。接下来，使用可吸收的聚乙醇酸五零缝合缝合肌肉切口。另外，使用不可吸收的聚丙烯六零缝合缝合皮肤。

然后记录手术和麻醉停止时间。让鼠标在恢复笼中独自醒来，然后再将其放回新的干净笼子。使用冯弗雷、哈格里夫斯或热板测试来评估热和机械超敏反应及其潜在的逆转。

与假动物相比，接受PSNL手术的小鼠在28天内表现出较低的机械刺激阈值。热超敏反应评估也获得了类似的结果。PSNL动物暴露于辐射热刺激后的爪子撤回延迟增加，当动物放在52摄氏度的平板上时，退出延迟增加。

注射两种不同剂量吗啡的组显示出持续一到两个小时的超敏反应逆转。机械超敏反应在注射吗啡后4小时恢复到基线。当腹膜内向小鼠注射两种不同剂量的布洛芬时，结果表明与注射盐水的小鼠相比，机械超敏反应降低。

限制对神经的额外损伤至关重要，因为它会影响疼痛感觉阈值。实验者应特别注意并使用玻璃钩以减少意外损坏 在该程序之后，这种慢性神经性疼痛模型可用于识别和表征药物的抗伤害感受作用，从而导致开发新的疼痛管理疗法。