Name: 从单个骨骼肌中分离静止干细胞群 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-12-09T13:45:00.000+00:00
Duration: 11 min 35 s
Description: 学习从单个骨骼肌中分离肌肉干细胞和成纤维脂肪前体细胞的方法，利用小鼠模型和荧光激活细胞分选技术。该方案有助于深入研究干细胞在稳态维持、组织再生和疾病进程中的功能机制。

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细胞分选在丹麦奥胡斯大学FACS核心实验室完成。图片使用Biorender.com绘制。我们感谢J. Farup博士分享兔抗PDGFRa抗体。本研究得到奥胡斯大学研究基金（AUFF）启动资助以及启动计划资助的支持&#160;诺和诺德基金会资助 E.P.（0071113）和 A.D.M.（0071116）。

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<li>de Morrée, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staufen1+inhibits+MyoD+translation+to+actively+maintain+muscle+stem+cell+quiescence%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Staufen1 inhibits MyoD translation to actively maintain muscle stem cell quiescence.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 114 (43), 8996-9005 (2017).</li>
</ol>

作者没有竞争性经济利益，也不存在利益冲突。

要成功实施本方案并获得较高的细胞得率，有几个关键步骤需要注意。与批量分离方案中使用的肌肉量相比，单个肌肉的体积较小，这可能导致在解剖过程中肌肉暴露而干燥，从而降低得率。为防止这种情况，应在解剖后立即向肌肉中加入培养基。此外，如果解剖耗时较长，可逐侧肢进行皮肤剥离，以减少肌肉暴露于空气中的时间。较小的体积也增加了过度消化的风险。为此，本方法所需的胶原酶II用量较少，且消化时间较短，相较于批量肌肉分离方案有所优化9,16。酶消化的效果还取决于酶的纯度，纯度较低会负面影响细胞得率。此外，机械消化至关重要。若切割不足，表面积减小将阻碍酶的充分作用，导致干细胞得率降低；若切割过度，表面积增大则会引起过度消化，同样降低干细胞得率。振荡水浴可防止消化后肌肉组织沉淀，改善酶的分布，并有助于维持温度均匀，从而整体上缩短孵育时间。因此，本方法相较于其他方法可显著缩短孵育时间。
该方案依赖于细胞解离和纯化。这些操作模拟了组织损伤，从而激活干细胞。与此一致的是，最近的研究表明，肌肉干细胞（...

由于存在肌肉干细胞（MuSCs），骨骼肌具有很强的再生能力。MuSCs 位于肌纤维上，基底膜下方，处于一种长期可逆性退出细胞周期的静息状态1,2,3,4。在肌肉损伤后，MuSCs 被激活并进入细胞周期，产生扩增的前体细胞，这些前体细胞可进一步分化并融合形成新的肌纤维2,5。先前的研究表明，MuSCs 对肌肉再生至关重要6,7,8。此外，单个 MuSC 能够植入并生成新的干细胞以及新的肌纤维9。骨骼肌中还存在一类间充质基质细胞，称为成纤维-脂肪生成前体细胞（FAPs），在肌肉再生过程中对支持 MuSC 功能发挥关键作用6,10,11,12。
由于肌肉干细胞（MuSCs）和纤维脂肪生成祖细胞（FAPs）在调控肌肉再生方面具有潜在作用，人们对其功能机制产生了极大研究兴趣。静息状态的MuSCs特征性表达转录因子Pax7和Sprouty1，以及细胞表面蛋白降钙素受体；而静息状态的FAPs则特征性表达细胞表面蛋白血小板源性生长因子受体α（PDGFRa）10,12,13,14,15。既往研究表明，可通过细胞表面标志物结合荧光激活细胞分选技术（FACS）从骨骼肌中纯化MuSCs和FAPs9,15,16,17,18,19,20,21。尽管这些方案显著提升了研究MuSCs和FAPs的能力，但其局限性在于大多数方法需要从多种肌肉组织混合样本中分离MuSCs。我们团队及他人的近期研究发现，从不同组织来源分离的MuSCs在细胞表型和基因表达水平上存在差异22,23。来自膈肌、肱三头肌和股薄肌的MuSCs比后肢远端肌肉的MuSCs激活速度更快22，而眼外肌来源的MuSCs则比膈肌和后肢远端肌肉来源的MuSCs分化速度更快23。
本方案描述了从单个骨骼肌中分离肌肉干细胞（MuSCs）和纤维-脂肪生成祖细胞（FAPs）的方法（图1）。包括膈肌、肱三头肌、股薄肌、胫骨前肌（TA）、比目鱼肌、趾长伸肌（EDL）、腓肠肌（GA）以及咬肌的解剖分离。解剖获得的肌肉组织随后通过胶原酶II（一种特异性靶向胶原蛋白中Pro-X-Gly-Pro氨基酸序列的蛋白酶，可降解结缔组织并实现组织解离24）和分散酶（dispase，一种可切割纤连蛋白和IV型胶原的蛋白酶，有助于进一步细胞解离25）进行酶消化解离。MuSCs和FAPs通过流式细胞荧光分选（FACS）从单细胞悬液中分离获得。作为下游细胞分析示例，通过检测5-乙炔基-2'-脱氧尿苷（EdU）掺入情况评估干细胞的活化状态，而细胞纯度则通过针对细胞类型特异性标志物Pax7和PDGFRa的免疫荧光染色进行鉴定。

<table><tbody><tr><td>1.5 mL 管（PCR 性能测试，聚丙烯材质，30,000 xg，无 DNA/DNase-/RNase，低 DNA 结合，无菌）</td><td>Sarstedt AG &amp; Co. KG, Hounisen Laboratorieudstyr A/S</td><td>72.706.700</td><td>1.5 mL 管</td></tr><tr><td>15 mL 管（聚丙烯/高密度聚乙烯，20,000 xg，IVD/CE，IATA，无 DNA/DNase-/RNase，无细胞毒性，无热原，无菌）</td><td>Sarstedt AG &amp; Co. KG, Hounisen Laboratorieudstyr A/S</td><td>62.554.502</td><td>15 mL 管</td></tr><tr><td>5 mL 聚苯乙烯圆底管</td><td>Falcon, Fisher Scientific&amp;nbsp;</td><td>352054</td><td>无滤网帽的 FACS 管</td></tr><tr><td>带细胞滤网帽的 5 mL 聚苯乙烯圆底管</td><td>Falcon, Fisher Scientific&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td>352235</td><td>带滤网帽的 FACS 管</td></tr><tr><td>5 mL 管（聚丙烯材质，非无菌，可高压灭菌）</td><td>VWR collection</td><td>525.0946</td><td>5 mL 管</td></tr><tr><td>50 mL 管（聚丙烯/高密度聚乙烯，20,000 xg，IVD/CE，ADR，无 DNA/DNase-/RNase，无细胞毒性，无热原，无菌）</td><td>Sarstedt AG &amp; Co. KG, Hounisen Laboratorieudstyr A/S</td><td>62.547.254</td><td>50 mL 管</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 555 驴抗兔 IgG (H+L)</td><td>Invitrogen, Thermo Fisher</td><td>批号：2387458 (货号 # A31572)</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 驴抗小鼠 IgG (H+L)</td><td>Invitrogen, Thermo Fisher</td><td>批号：2420713 (货号 #A31571)</td><td></td></tr><tr><td>ARIA 3</td><td>BD</td><td></td><td>FACS，奥胡斯大学核心设施</td></tr><tr><td>Centrifuge 5810</td><td>Eppendorf</td><td>EP022628188</td><td>离心机</td></tr><tr><td>Click-iT EdU 细胞增殖成像试剂盒，Alexa Fluor 488 染料</td><td>Invitrogen, Thermo Fisher</td><td>批号：2387287 (货号 # C10337)</td><td>细胞增殖试剂盒</td></tr><tr><td>小牛皮胶原&amp;nbsp;</td><td>Bioreagent, Sigma Aldrich&amp;nbsp;</td><td>来源：SLCK6209 (货号 # C8919)</td><td></td></tr><tr><td>II 型胶原酶</td><td>Worthington, Fisher Scientific&amp;nbsp;</td><td>批号：40H20248 (货号 # L5004177 )</td><td>胶原酶</td></tr><tr><td>Dispase</td><td>Gibco, Fisher Scientific&amp;nbsp;</td><td>批号：2309415 (货号 # 17105-041 )</td><td>Dispase</td></tr><tr><td>驴血清（非无菌）</td><td>Sigma Aldrich, Merck</td><td>批号：2826455 (货号 # S30-100mL)</td><td></td></tr><tr><td>Dumont 号 5，110 mm</td><td>Dumont, Hounisen Laboratorieudstyr A/S</td><td>1606.327</td><td>尖端精细的直头镊子</td></tr><tr><td>Dumont 号 7，115 mm</td><td>Dumont, Hounisen Laboratorieudstyr A/S</td><td>1606.335</td><td>弯头镊子</td></tr><tr><td>F-10 培养基（Ham 配方）(1x)，含 L-谷氨酰胺</td><td>Gibco, Fisher Scientific&amp;nbsp;</td><td>批号：2453614 (货号 # 31550-023)</td><td></td></tr><tr><td>FITC 抗小鼠 CD31</td><td>BioLegend, NordicBioSite</td><td>MEC13.3 (货号 # 102506)</td><td></td></tr><tr><td>FITC 抗小鼠 CD45</td><td>BioLegend, NordicBioSite</td><td>30-F11 (货号 # 103108)</td><td></td></tr><tr><td>冰醋酸（100%）</td><td>EMSURE, Merck&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td><td>K44104563 9(货号 # 1000631000)</td><td></td></tr><tr><td>微型管旋转混合器（头对头式）&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific&amp;nbsp;</td><td>15534080 (型号 # 88861052)</td><td>微型管旋转混合器</td></tr><tr><td>马血清</td><td>Gibco, Fisher Scientific&amp;nbsp;</td><td>批号：2482639 (货号 # 10368902 )</td><td></td></tr><tr><td>Isotemp SWB 15</td><td>FisherBrand, Fisher Scientific</td><td>15325887</td><td>摇动水浴箱</td></tr><tr><td>MS2 微型振荡器&amp;nbsp;</td><td>IKA&amp;nbsp;</td><td></td><td>涡旋仪</td></tr><tr><td>20 G 针头（0.9 mm x 25 mm）</td><td>BD microlance, Fisher Scientific&amp;nbsp;</td><td>304827</td><td>20G 针头&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>10% 中性福尔马林缓冲液</td><td>CellPath, Hounisen Laboratorieudstyr A/S</td><td>批号：03822014 (货号 # HOU/1000.1002)</td><td></td></tr><tr><td>无热原细胞滤网（40 &amp;micro;M）</td><td>Sarstedt AG &amp; Co. KG, Hounisen Laboratorieudstyr A/S</td><td>83.3945.040</td><td>细胞滤网&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Pacific Blue 抗小鼠 Ly-6A/E (Sca-1)</td><td>BioLegend, NordicBioSite</td><td>D7 (货号 # 108120)</td><td></td></tr><tr><td>Pax7 一抗</td><td>DSHB</td><td>批号：2/3/22-282ug/mL (货号 # AB 528428)</td><td></td></tr><tr><td>PBS 10x 粉末浓缩液</td><td>Fisher BioReagents, Fisher Scientific</td><td>BP665-1</td><td></td></tr><tr><td>PE/Cy7 抗小鼠 CD106 (VCAM1)</td><td>BioLegend, NordicBioSite</td><td>429 (MVCAM.A) (货号 # 105720)</td><td></td></tr><tr><td>青霉素/链霉素（Pen/strep）</td><td>Gibco, Fisher Scientific&amp;nbsp;</td><td>批号：163589 (货号 # 11548876 )</td><td></td></tr><tr><td>10 µL 吸头</td><td>Art tips, 自密封屏障, Thermo Scientific</td><td>2140-05</td><td>低吸附，预灭菌，带滤芯吸头</td></tr><tr><td>1000 µL 吸头</td><td>Art tips, 自密封屏障, Thermo Scientific</td><td>2279-05</td><td>低吸附，预灭菌，带滤芯吸头</td></tr><tr><td>20 µL 吸头</td><td>Art tips, 自密封屏障, Thermo Scientific</td><td>2149P-05</td><td>低吸附，预灭菌，带滤芯吸头</td></tr><tr><td>200 µL 吸头</td><td>Art tips, 自密封屏障, Thermo Scientific</td><td>2069-05</td><td>低吸附，预灭菌，带滤芯吸头</td></tr><tr><td>防护垫</td><td>Abena&amp;nbsp;</td><td>ACTC-7712</td><td>&amp;nbsp;60 x 40 cm，8 层</td></tr><tr><td>Rainin, pipet-lite XLS</td><td>Mettler Toledo, Thermo Scientific&amp;nbsp;</td><td>2140-05, 2149P-05, 2279-05, 2069-05</td><td>移液器（P10, P20, P200, P1000）</td></tr><tr><td>重组抗 PDGFR-alpha 抗体</td><td>RabMAb, abcam</td><td>AB134123</td><td></td></tr><tr><td>手术刀（刀柄编号 3）</td><td>Hounisen, Hounisen Laboratorieudstyr A/S</td><td>1902.502</td><td>手术刀</td></tr><tr><td>11 号手术刀片</td><td>Heinz Herenz, Hounisen Laboratorieudstyr A/S</td><td>1902.0911</td><td>手术刀</td></tr><tr><td>Scanlaf mars</td><td>Labogene</td><td>2 级生物安全柜：Mars</td><td>超净工作台</td></tr><tr><td>ScanR</td><td>Olympus</td><td></td><td>显微镜，奥胡斯大学核心设施</td></tr><tr><td>剪刀</td><td>FST</td><td>14568-09</td><td></td></tr><tr><td>Series 8000 DH</td><td>Thermo Scientific</td><td>3540-MAR</td><td>培养箱</td></tr><tr><td>10 mL 血清移液管</td><td>VWR</td><td>612-3700</td><td>无菌，无热原</td></tr><tr><td>5 mL 血清移液管</td><td>VWR, Avantor 由 VWR 供应</td><td>612-3702</td><td>无菌，无热原</td></tr><tr><td>5 mL 注射器，鲁尔接头（6%），无菌&amp;nbsp;</td><td>BD Emerald, Fisher Scientific</td><td>307731</td><td>注射器</td></tr><tr><td>TC 培养皿 100，标准型</td><td>Sarstedt AG &amp; Co. KG, Hounisen Laboratorieudstyr A/S</td><td>83.3902</td><td>培养皿&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>组织培养（TC）处理表面，黑色聚苯乙烯，平底，无菌，带盖，20 个/包</td><td>Corning, Sigma Aldrich</td><td>3764</td><td>96 孔半底板</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma Aldrich, Merck</td><td>来源：SLCJ6163 (货号 # T8787)</td><td></td></tr></tbody></table>

从单个骨骼肌中分离静息态干细胞群体

Isolation of Quiescent Stem Cell Populations from Individual Skeletal Muscles

骨骼肌中含有不同类型的成体干细胞群体，这些细胞参与组织的稳态维持与损伤修复。骨骼肌干细胞（MuSCs）能够生成新的肌肉组织，而纤维-脂肪生成祖细胞（FAPs）则参与间质支持性组织的形成，并具有分化为成纤维细胞和脂肪细胞的能力。MuSCs和FAPs均处于一种长期可逆的细胞周期退出状态，称为静息状态。这种静息状态对其功能至关重要。通常，静息态干细胞是从多个肌肉组织混合后的样本中进行纯化分离的。然而，近期研究表明，来源于不同肌肉的MuSCs在分子表达谱和静息深度上存在显著差异。本实验方案详细描述了从单个骨骼肌中分离和研究MuSCs与FAPs的方法，并提供了对干细胞活化过程进行分子分析的策略。方案中具体说明了如何分离并消化具有不同发育来源、厚度和功能的肌肉组织，例如膈肌、肱三头肌、股薄肌、胫骨前肌（TA）、腓肠肌（GA）、比目鱼肌、趾长伸肌（EDL）以及咬肌。MuSCs和FAPs通过荧光激活细胞分选技术（FACS）进行纯化，并通过免疫荧光染色和5-乙炔基-2'-脱氧尿苷（EdU）掺入实验进行分析。

遵循单个骨骼肌分离的实验方案（图2)，从三个已从本地繁育计划中淘汰的雄性Swiss远交系小鼠中分离出股薄肌、胫骨前肌、趾长伸肌、腓肠肌、比目鱼肌、肱三头肌、咬肌和膈肌图2）。在组织解离和抗体染色后，通过FACS从各块肌肉中纯化MuSC和FAP图3）。初始设门使用未染色样本进行，以识别细胞并区分单细胞与双联体（图3A）。后续设门使用FMO对照以确定染色阈值（图3B). 对染色后的样本进行CD31/CD45-FITC和Sca1-PacBlue设门分析。SCA1+/CD31-/CD45- 群体（FAPs）被分选至一个独立的收集管中，而双阴性群体则被设门并用于VCAM1-PECy7与前向散射光（FSC）的图示分析。VCAM1+ 群体（MuSCs）被分选至单独的收集...

本方案描述了从小鼠单个骨骼肌中分离肌肉干细胞和纤维脂肪形成祖细胞的方法。该方案包括单块肌肉解剖、通过荧光激活细胞分选法分离干细胞、免疫荧光染色评估纯度，以及通过5-乙炔基-2′-脱氧尿苷掺入实验定量检测S期进入情况。

骨骼肌中含有不同类型的成体干细胞群体，这些细胞参与组织的稳态维持与修复。骨骼肌干细胞……

本方案具有重要意义，因为它能够实现对不同骨骼肌中干细胞功能的研究，加深我们对干细胞在稳态维持、组织再生及疾病进展中作用的理解。通过本方案，我们可以从特定肌肉中分离出两类活体干细胞，并研究其功能机制。开始肌肉分离时，用乙醇喷洒已处死的小鼠，并将其腹部朝上放置。使用剪刀在腹部皮肤上做一个0.5厘米长的横向切口。用双手将皮肤拉开，暴露躯干以及直至后肢的下肢。找到缝匠肌或大腿内侧肌，用一把弯头镊子夹住该肌肉并轻轻提起。使用剪刀做一个0.5厘米的切口，以切除缝匠肌。在另一条腿上重复此操作。使用手术刀，在胫骨外侧沿其侧面做一个0.5厘米的切口，以切开筋膜。然后用弯头镊子夹住筋膜，通过牵拉将其去除，暴露后肢远端的肌腱。接着，将一对超细尖的直头镊子插入趾长伸肌（EDL）与胫骨前肌（TA）的远端肌腱之间，通过将镊子向肌肉近端滑动，分离这两块肌肉。将镊子移回远端，切断远端肌腱。用弯头镊子轻轻夹住趾长伸肌（TA）的远端肌腱，将肌肉向上并越过其近端附着点提起。仔细切断近端肌腱时，应尽可能靠近其附着点处剪断另一端，并将TA转移至培养皿中。然后使用尖端超细的直镊子插入趾长伸肌（EDL）远端肌腱下方，将镊子向肌肉近端滑动，以分离各肌肉。将镊子返回远端，切断远端肌腱时注意不要损伤肌肉。用弯镊子轻轻夹住EDL的远端肌腱，将肌肉提起并翻过其近端附着点，小心地尽可能靠近附着处切断近端肌腱。剪断另一端，并将EDL肌肉转移至培养皿中。对另一侧后肢重复上述操作。使用直头镊子，其尖端需极为精细，以便伸入跟腱与后肢下部骨骼之间。将镊子向肌肉的近端滑动，以分离肌肉与骨骼。将镊子返回至远端，切断远端肌腱。将腓肠肌或GA肌向上并越过腓骨拉起。定位比目鱼肌近端肌腱。将直止血钳插入比目鱼肌与腓肠肌之间，向肌肉远端移动止血钳，以分离比目鱼肌与腓肠肌。随后切断比目鱼肌近端肌腱。用弯止血钳夹住比目鱼肌，小心提起，以暴露其远端肌腱。切断远端肌腱，将比目鱼肌从腓肠肌（GA）分离，并将比目鱼肌置于含有洗涤液的培养皿中。随后切断腓肠肌，并将其放入培养皿中。为分离三头肌，使用尖端极细的直镊，插入三头肌与肱骨之间，然后将镊子向肌肉近端滑动，以分离肌肉与骨骼。接着，剪断肱三头肌的远端，并用弯头镊子将其向上提起并翻转过肘部，以暴露近端肌腱。切断肱三头肌的近端肌腱，将肌肉转移至培养皿中。对另一侧的四只肢体重复此操作。为了去除下颌的毛发和皮肤，使用剪刀在眼睛下方做一处0.5厘米的切口，沿尾侧方向剪开。然后用双手的拇指和食指捏住切口两侧，向上和向下拉扯以剥离皮肤。在眼睛下方的尾侧找到咬肌的主要肌腱，将扁平的手术刀片插入骨与肌肉之间，切断该肌腱。用弯头镊子夹住主要的咬肌腱，并用手术刀片或剪刀沿头侧方向切断，以分离咬肌与下颌骨。将分离出的咬肌置于培养皿中，并对另一侧咬肌重复此操作。使用剪刀在胸骨中线处进行胸廓切开术，并剪开胸骨。通过在肋骨周围360度剪开暴露膈肌。然后用剪刀切断气管、食管、下腔静脉和腹主动脉，以将上半身与腹部分离。接着，使用剪刀在胸骨下方一厘米处进行剖腹手术，并沿360度方向剪开一圈。将合拢的剪刀置于肋骨与腹腔器官之间并向下按压。轻柔牵拉肋骨，使其与腹腔器官分离。为分离膈肌与肋骨，用两指轻轻夹住膈肌，用剪刀剪开肋骨。沿360度方向尽可能贴近肋骨处剪下膈肌，并将分离的膈肌置于培养皿中。将分离的肌肉逐个剪切成约一毫米大小的碎片。将剪碎的肌肉转移至含有五升解离缓冲液的15升锥形管中，在37°C下于摇水浴中以每分钟60转的速度孵育35分钟。将剪碎的肌肉经酶消化后，将悬液从15毫升离心管转移至50毫升离心管中。使用装有20号针头的10毫升注射器，将样品通过针头反复抽吸5次，重新悬浮细胞。将细胞悬液吸入注射器，通过置于新的50毫升锥形管顶部的细胞筛网过滤样品。为了收集所有单核细胞，用20毫升洗涤液冲洗空的锥形管，并将液体通过滤网倒入，与已过滤的样品合并。使用P1000移液器收集细胞滤网下方残留的液体体积。在组织解离和抗体染色后，通过荧光激活细胞分选技术纯化来自各个肌肉的骨骼肌干细胞（MuSCs）和纤维脂肪生成祖细胞（FAPs）。在初步设门以识别细胞并区分单细胞与双联体后，后续设门使用FMO对照确定染色阈值。对染色样本进行设门，分选出SCA1阳性而CD31阴性且CD45阴性的细胞群体，该群体对应于FAPs，并将其收集至单独的收集管中。进一步对双阴性群体设门，以分选VCA阳性细胞群体，该群体对应于MuSCs。与其他肌肉组织不同，膈肌和肱三头肌的单细胞悬液中肌源性干细胞（MuSCs）的相对丰度高于成纤维脂肪前体细胞（FAPs）。尽管EDU染色信号较强，但仍显示出两种干细胞类型之间以及不同肌肉组织之间EDU阳性细胞比例存在差异。然而，在所有组织中，EDU阳性MuSCs的平均比例均高于EDU阳性FAPs。从EDL和GA分离的MuSCs的EDU掺入率显著低于来自TA、膈肌、缝匠肌或肱三头肌的MuSCs。同样，在从不同肌肉组织分离的FAPs中也观察到EDU掺入率存在显著差异。最后，通过免疫荧光染色证实了细胞纯度，表明干细胞分离方案具有特异性。最关键的步骤是组织的机械消化。当组织切割过度时，细胞活力会下降；当组织切割不足时，外泌体提取量（EEL）会降低。该方案可与检测细胞行为的实验相结合，例如通过移植后的植入情况来更深入地理解干细胞在体内的功能。该技术有助于解答干细胞在不同肌肉组织中的行为差异是否会导致疾病表型，以及是否与具有特定受累肌肉模式的疾病相关。

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Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

从单个骨骼肌中分离静止干细胞群

根据细胞贴壁速度从肌肉骨骼软组织中分离成体干细胞。...

从软性肌肉骨骼组织中分离干细胞

显微解剖外植体技术是一种稳健且可靠的方法，可用于从幼年、成年或胚胎期肌肉中分离出具有增殖能力的骨骼肌细胞，以获取骨骼肌干细胞。这些细胞具有独特性，可通过克隆化培养获得骨骼肌干细胞系，用于体内移植。...

成年与胚胎骨骼肌微植块培养及骨骼肌干细胞的分离

肌纤维的分离与培养是金标准 体外...

分离与培养成年骨骼肌单个肌纤维及其卫星细胞

分离和培养静息状态的卫星细胞（一种肌肉干细胞群体）的纯细胞群体，对于理解肌肉干细胞生物学与再生机制，以及用于杜氏肌营养不良症和其他退行性疾病的干细胞移植治疗至关重要。...

肌肉卫星细胞的分离、培养与移植

人类骨骼肌中的血管含有多种多能前体细胞群体，非常适合用于再生医学应用。该分离方法可同时从血管的三个结构层中分别纯化出三种多能前体细胞群体：来自内膜的肌源性内皮细胞、来自中膜的周细胞以及来自外膜的外膜细胞。...

从人骨骼肌中分离血管来源的多能前体细胞

从人类肌肉中获得的主要贴壁细胞类型为成肌细胞和成纤维细胞。本实验通过基于CD56抗原的磁性激活细胞分选技术对细胞群体进行富集。随后使用特异性抗体进行免疫标记，并结合图像分析技术，实现对单个细胞胞质和细胞核特征的定量分析。...

人骨骼肌中初级成肌细胞和成纤维细胞的分离与定量免疫细胞化学表征

我们介绍了从骨骼肌活检组织中分离、培养、鉴定和诱导人原代肌前体细胞（hMPCs）的技术。...

从骨骼肌活检手术中分离、培养、鉴定及诱导人肌肉前体细胞分化

本文提出一种方法，可从纯合突变型Lamin...

单根肌纤维的分离与培养：早产后发育阶段Emery-Dreifuss型肌营养不良小鼠模型的研究

本方案描述了一种体外培养和功能分析肌肉干细胞的方法，该方法可保留肌肉干细胞与其内源性微环境之间的大部分相互作用。...

单根肌纤维培养实验用于体外评估成年肌肉干细胞功能

骨骼肌包含多种细胞类型，包括定居的干细胞，每种细胞均对肌肉稳态和再生具有特定贡献。本文介绍肌肉干细胞及其细胞微环境的二维培养方法 离体 保持许多生理学特征的环境...

小鼠骨骼肌未分级批量培养以重现微环境与干细胞静息状态

本方案通过组织解离、连续过滤、预贴壁及特定培养条件，提供了一种从成年和新生小鼠骨骼肌中分离和富集原代成肌细胞的标准化方法，可用于建立和维持由卫星细胞衍生的成肌细胞培养体系，以支持后续实验应用。...

分离骨骼肌卫星细胞以 体外 肌生成研究

学习从单个骨骼肌中分离肌肉干细胞和成纤维脂肪前体细胞的方法，利用小鼠模型和荧光激活细胞分选技术。该方案有助于深入研究干细胞在稳态维持、组织再生和疾病进程中的功能机制。

从单个骨骼肌中分离静息态干细胞群体

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