通过光学相干断层扫描 在 小鼠脉络膜中植入和评估黑色素瘤

本协议描述了利用光学相干断层扫描在小鼠脉络膜中植入和评估黑色素瘤。

将肿瘤确定为眼睛的后部具有挑战性。该方法能够在小鼠中诱导可重复的脉络膜黑色素瘤肿瘤，并对肿瘤生长进行实时成像以进行评估。该协议利用OCT实时成像来评估肿瘤细胞接种时已经存在的肿瘤位置，并跟踪活体动物的肿瘤生长。

葡萄膜黑色素瘤是一种毁灭性的疾病，转移率接近 50%。开发实验模型是推进旨在实现新治疗可能性的研究的关键。这种方法的一个优点是，对注射成功的即时评估允许到达具有同质肿瘤的研究组，并通过实时成像连续跟踪它们。

检查肿瘤进展。注射到小老鼠的眼睛需要练习。可视化注射细胞的能力使您可以立即评估您的成功，并在必要时对更多小鼠重复。

演示该程序的将是来自卡普兰医学中心眼科研究实验室的Dimitri Gaber博士。首先，将0.4%局部眼科麻醉剂Oxybuprocaine应用于麻醉小鼠的双眼。然后局部涂抹0.5%托吡卡胺双眼以扩大瞳孔，然后用1.4%羟乙基纤维素作为润滑剂，以避免眼睛干燥。

在手术显微镜下观察鼠标的一只眼睛。用无菌眼内钳保持眼睑张开。然后握住颞上缘结膜，拉向鼻下位置。

通过在整个手术过程中保持边缘结膜来确保该位置。使用 30 号针尖在颞背区进行小结膜周围切开，距角膜缘后方约 1-2 毫米。从围膜开口处取出多余的肌腱囊。

插入针尖以穿透巩膜，在脉络膜下空间形成一条轨迹，直到脉络膜的棕色通过巩膜暴露的白质出现。将细胞装入无菌10微升玻璃汉密尔顿注射器中，该注射器装有以45度角扭曲的32号钝针。将装载的注射器的针头插入创建道约两毫米，并注射两微升细胞悬液。

注射后将针头固定到位两到三秒钟，直到所有液体清除。轻轻拉出针头，以免从尿道中泄漏。黑色素瘤细胞接种后，立即通过OCT扫描观察动物的注射眼睛。

根据扫描结果，根据局部 RD、玻璃体渗漏或扩展 RD 三类对视网膜脱离或 RD 模式进行分类。打开OCT分割分析软件，根据RD高度预测肿瘤大小。在OCT扫描中测量本地RD的高度，并将其分为三组。在术后阶段，局部施用0.3%的氧氟沙星。

该图描述了基于OCT的脉络膜下细胞注射后肿瘤生长预测。小鼠表现出RD，局灶性，玻璃体泄漏和扩展RD三种模式。注射后立即的RD模式与注射后5天的肿瘤定位之间存在关联。局灶性RD与仅限于脉络膜的肿瘤细胞生长有关。

然而，在显示局灶性RD的动物注射后玻璃体细胞的观察表明玻璃体腔和脉络膜中的肿瘤生长。当注射后观察扩展RD时，肿瘤在5天后分散在整个脉络膜和玻璃体。该模型中诱导的肿瘤大小范围可分为小、中、大。

这里显示的是注射后RD高度的OCT测量的代表性图像，相应的眼底图像，注射后第五天肿瘤高度和宽度的水平OCT扫描，及其相应的眼底图像，以及相应的H&E染色眼切片，显示可比的肿瘤测量。本文介绍了细胞注射后立即呈现小，中或大RD的小鼠的肿瘤体积测量。调整注射力会影响肿瘤的大小和位置。

重要的是要校准这一点，并评估注射后OCT诱导视网膜脱离的模式。脉络膜肿瘤的实时成像是一种重要的实验工具，可以检查不同因素或潜在疗法对肿瘤进展的影响。