Name: 兔子缺血和再灌注损伤模型 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-11-03T13:40:00.000+00:00
Duration: 6 min 11 s
Description: 学习建立兔急性心肌缺血再灌注损伤模型，采用左胸小切口或正中开胸两种手术方法，适用于存活与非存活实验。该技术成本低、操作简便，即使无外科经验的研究人员也能可靠完成，为心血管研究提供可重复的实验方案。

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本方案所依据的原始研究由美国国家心肺血液研究所基金 HL-103642 和 HL-088206 资助

本研究根据美国国立卫生研究院关于动物护理和使用的指南进行，并获得了波士顿儿童医院动物护理和使用委员会的批准（方案编号 20-08-4247R）。所有动物均按照《实验动物护理和使用指南》的要求接受了人道护理。
1. 动物种类、麻醉剂和镇痛剂
<ol>
	<li>动物种类：实验研究使用新西兰白兔（野生型品系；雌性；性成熟年龄为15–20周龄；体重3–4 kg）。</li>
	<li>麻醉与镇痛药物：
	<ol>
		<li>使用阿托品，剂量为0.01 mg/kg，肌肉注射（IM）</li>
		<li>初始镇静使用乙酰丙嗪，剂量为0.5 mg/kg，肌内注射（IM）；完全麻醉时剂量为0.5 mg/kg，静脉注射（IV）。</li>
		<li>使用丁丙诺啡，剂量为0.5 mg/kg，肌内注射。</li>
		<li>使用异氟烷 通过 使用精密汽化系统面罩以3%浓度进行诱导，随后以1%-2%浓度插管，以每分钟2升的流速给予100%氧气（O2），并以1%浓度维持全身麻醉。</li>
		<li>使用美托咪定，剂量为0.25 mg/kg，肌内注射。</li>
		<li>使用氯胺酮，剂量为10 mg/kg，静脉注射。</li>
		<li>在开胸手术部位使用布比卡因肋间阻滞，剂量不超过3 mg/kg，肌肉注射。</li>
		<li>使用1%利多卡因，静脉注射剂量为1-1.5 mL/kg。</li>
		<li>使用芬太尼透皮贴剂，剂量为1-4 µg/kg，持续72小时。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
2. 操作步骤（图1）
<ol>
	<li>用阿托品、乙酰丙嗪和丁丙诺啡的混合液对新西兰大白兔成年动物进行单次肌肉注射镇静。使用3%异氟烷诱导麻醉 通过 精密雾化系统面罩</li>
	<li>盲法经气管插管（即不直视声门）前的准备工作
	<ol>
		<li>用1%利多卡因喷洒喉部以防止喉痉挛。</li>
		<li>预先测量气管内导管（ETT）在兔体外从牙齿到预测气管隆突处的长度，并将兔置于胸卧位，颈部伸展。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>使用内径为3-0或3-5的带套囊小儿气管插管，在持续吸入1%-2%麻醉剂和氧气的条件下对动物进行插管2 100%浓度，2 L/min流速
	<ol>
		<li>将气管导管插入患者口腔，并引导其越过隆突进入咽部。</li>
		<li>将气管导管向前推进，直至导管尖端接触声门或呼吸音消失，后者提示导管尖端已通过声门裂。</li>
		<li>将导管稍作回撤，直至呼吸音恢复，然后再次缓慢推进，并将导管固定到位。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>使用机械通气支持动物（潮气量：10 mL/kg，吸入氧浓度：）2：40%，呼吸频率：30-40 次/分钟，呼气末正压：5-10 cmH₂O2O
	<ol>
		<li>根据耐受情况调整 FiO2，以达到目标 O2 通过脉搏血氧测定法测量，饱和度应高于92%，以防止高氧血症引发全身性炎症反应。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>通过体格检查（如听诊）、临床体征（如观察气管导管末端的冷凝现象）以及客观检测手段（如呼气末二氧化碳）来确认气管导管位置是否正确。</li>
	<li>大约10分钟后，向兔子肌肉注射美托咪啶，以同时产生麻醉和镇痛效果。</li>
	<li>以1%异氟烷维持全身麻醉，贯穿整个手术过程。</li>
	<li>在耳缘静脉插入22 G静脉导管，并用胶带固定以建立外周静脉通路。 
	注意：股静脉可作为静脉通路的替代部位。
	<ol>
		<li>使用乙酰丙嗪静脉注射和氯胺酮静脉注射使动物完全麻醉。</li>
		<li>切口前，经静脉注射 1,000 U/mL 肝素，剂量为 3 mg/kg。
		<ol>
			<li>初始给予1,000 U/mL肝素，剂量为3 mg/kg，之后每小时追加给药一次，直至实验结束，以维持活化凝血时间在 &#62;400 秒，符合当前的手术操作规范。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>若术中发生心室颤动，根据需要静脉注射和/或心外膜非同步电除颤给予1%利多卡因。心室颤动通常在给予一至两剂利多卡因后停止。</li>
		<li>以10 mL/kg/h的速度持续灌注乳酸林格液。 
		注意：由于本研究中给予的液体量较少且手术时间较短，存活实验中的动物在拔管前或恢复期间无需进行利尿。若动物出现肺部状况恶化（例如需增加呼吸机参数设置、听诊发现肺水肿征象等），则建议实施利尿。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>进行颈动脉切开术，并置入4或5法式动脉导管，以方便术中监测动脉血压（BP）。 
	注意：股动脉可作为动脉穿刺的替代部位。</li>
	<li>通过连续实时分析，监测并记录所有生理和机械参数。
	<ol>
		<li>使用颈动脉导管监测动脉血压，并记录氧饱和度2 使用脉搏血氧仪测量饱和度 通过 放置在剃毛后足垫上的传感器。</li>
		<li>使用心电图（ECG）监测，包括三个肢体导联：I、II 和 III，以及三个计算加压导联：aVL、aVR 和 aVF。
		<ol>
			<li>在缺血前基线期、缺血期间、再灌注期间，以及恢复期第7至28天期间连续记录心电图（ECG）描记（如进行存活实验）。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>通过持续监测血压（BP）和心率（HR）来评估镇静水平。</li>
		<li>使用直肠探针监测体温。</li>
		<li>在存活与非存活病例中，于预定时间点采用左侧胸骨旁和心尖位二维超声心动图评估心肌功能。
		<ol>
			<li>通过测量左心室舒张末期内径（LVEDD）和左心室收缩末期内径（LVESD），并使用以下公式计算射血分数缩短率（FS），以评估心肌功能： 
			FS = (LVEDD − LVESD) / LVEDD × 100</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>手术过程中，将动物置于循环热水毯上，以维持其稳定的核心体温。</li>
	<li>以无菌方式准备并铺巾动物：
	<ol>
		<li>剃除手术区域的毛发，依次使用聚维酮碘和70%异丙醇各擦拭三遍进行术前消毒。用无菌纱布垫轻轻擦干该区域，并用无菌毛巾覆盖整个动物体。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>左胸小切口开胸术（存活研究）
	<ol>
		<li>在预定的开胸部位用布比卡因进行肋间阻滞。</li>
		<li>静脉注射1%利多卡因 通过 切口前的耳缘静脉</li>
		<li>经第四肋间沿第五肋骨上缘行左侧小切口开胸术，以避开位于每根肋骨下表面并与其平行的神经血管束。
		<ol>
			<li>进行前外侧开胸术以最佳暴露心脏的前外侧表面（即前降支对角支的解剖位置）。</li>
			<li>将兔子置于侧卧位，左侧身体抬高约30°，可使用枕头或豆袋支撑。</li>
			<li>将兔子的同侧腿固定于头部上方，以腾出手术区域及肋间隙之间的操作空间。</li>
			<li>触诊并用毡尖标记笔标出肋骨、胸骨和肩胛骨等骨性标志。使用#10刀片沿第五肋骨表面切开皮肤，确保切口与肋骨走向保持平行。</li>
			<li>使用电灼分离胸大肌和前锯肌。用电灼在第五肋骨上方切开肋间肌，以保护肋间神经血管束。</li>
			<li>通过第四肋间隙，使用锐性或钝性分离谨慎进入胸膜腔。沿肋骨方向，向两侧用锐性或钝性分离法延长初始胸膜切口，直至可插入肋骨牵开器或胸骨牵开器。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>在肋间隙置入肋骨撑开器或胸骨牵开器，并撑开以充分显露心脏和心包囊。用DeBakey镊提起心包，用Metzenbaum剪刀剪开心包。</li>
		<li>左前降支动脉分离
		<ol>
			<li>用带圆锥形针头的聚丙烯缝线（3-0）环绕前降支动脉的第二或第三对角支。取出针头，将聚丙烯线的两端穿过一段小型乙烯基管，形成一个套索。</li>
			<li>在套索与冠状动脉之间放置一块小纱布，以避免结扎时损伤冠状动脉和/或引发血管痉挛。
			<ol>
				<li>使用DeBakey镊子夹取一块矩形聚四氟乙烯（PTFE）毡垫（约7 mm × 3 mm）。将毡垫置于两根聚丙烯丝线之间，使结扎线收紧时，毡垫位于分离出的左前降支动脉与乙烯基管之间，形成夹闭结构。</li>
			</ol>
			</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>胸骨正中切开术（非存活研究） 
	注意：胸骨正中切开术适用于非存活实验，可采用更具侵入性的监测方法，如左心室舒张压（LVDP）和声学测微法。
	<ol>
		<li>使用弯头梅奥剪刀行胸骨正中切开术。放置胸骨牵开器并撑开，以充分显露心脏和心包囊。</li>
		<li>用DeBakey镊子提起心包，用Metzenbaum剪刀剪开心包。</li>
		<li>放置三个压电声学测微晶体：
		<ol>
			<li>在左心室心外膜上制作三个1 mm的小切口，呈三角形分布。将压电声学测微晶体置于心外膜切口内。</li>
			<li>用5-0聚丙烯线在心脏表面行U形缝合固定导线。使用声学测微仪记录时，暂停机械通气，以准确记录两到三个心动周期的数据。 
			注意：如果心脏发生纤维性颤动，1% 利多卡因无效，需要进行心外膜除颤时，应关闭声学测径仪，并将其从数据采集系统中断开，以保护设备免受电击损伤。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>左前降支动脉分离：
		<ol>
			<li>用带圆锥形针头的聚丙烯缝线（3-0）环绕前降支动脉的第二或第三对角支。</li>
			<li>移除针头，将聚丙烯单丝的两端穿入一小段乙烯基管中，形成套索。</li>
			<li>在套索与冠状动脉之间放置一块小纱布，以避免结扎时损伤冠状动脉和/或引发血管痉挛。</li>
			<li>使用DeBakey镊子夹取一块矩形聚四氟乙烯（PTFE）毡垫（约7 mm × 3 mm）。将毡垫置于两根聚丙烯丝线之间，使结扎线收紧时，毡垫位于结扎的左前降支动脉与乙烯基管之间，起到夹垫作用。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>左心室舒张末期压力（LVDP）的测定：
		<ol>
			<li>在左心室心尖处放置一根5-0聚丙烯U形缝线。使用11号刀片在左心室心尖处做一个1 mm的小切口。</li>
			<li>将一根3 French球囊导管插入左心室腔内。通过将其结扎固定在5-0聚丙烯U形缝线上，将导管牢固固定于左心室。</li>
			<li>将导管连接至连接监测仪的压力换能器，以记录左心室舒张末期压力（LVDP）。使用数据采集系统（如下所述）记录LVDP。通过打开三通旋塞至空气端，并在监测仪上归零，对导管进行调零，以记录血流动力学参数。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>数据采集系统
		<ol>
			<li>启动数据采集系统（参见 材料表) 连接到正在使用的计算机/笔记本电脑。将显示器的线缆连接到计算机/笔记本电脑。</li>
			<li>选择 通道 1 在数据采集系统上命名它 LVDP使用监护仪对换能器进行调零。 
			注意：如果将血压（BP）和心率（HR）设备连接到数据采集系统，请遵循相同步骤：将导线连接至笔记本电脑，选择 通道，若测量血压则为零。</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
	<li>通过向下按压乙烯基管并向上拉动聚丙烯缝合丝线，收紧套索以阻断冠状动脉。使用蚊式钳直接夹住管子并固定，以维持所需的结扎紧密度。</li>
	<li>通过心外膜区域发绀在视觉上确认心肌缺血。区域缺血也可通过心电图上ST段和T波的改变来确认。</li>
	<li>在麻醉下，经视觉确认后，诱导局部缺血30分钟。
	<ol>
		<li>在区域缺血期间的0分钟、10分钟、20分钟和30分钟，通过二维超声心动图（2D ECHO）对存活和非存活病例均进行FS评估。</li>
		<li>在非存活病例中，持续评估缺血前、心肌缺血期间及再灌注后的左心室发展压（LVDP）和声学测微仪数据。</li>
		<li>如有需要，可利用预先留置的聚丙烯缝线再次结扎动脉，以界定风险区域。夹闭主动脉，通过主动脉使用停跳针注入单硫酸蒽色素 98%（用 PBS 稀释至 1:5），心肌灌注区域将染成蓝色，而风险区域则保持未染色状态。</li>
		<li>持续监测并记录心率（HR）、血压（BP）和血氧饱和度（O）2 饱和度</li>
		<li>让动物恢复2小时（非存活实验）或28天（存活实验）。 
		注意：心电图可用于确认再灌注。尽管在本研究进行的实验中未观察到，但再灌注期间常可发生低钾血症，可通过钾离子调控或适当输注予以纠正。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>实验步骤的结束
	<ol>
		<li>存活案例
		<ol>
			<li>存活病例中，剪短用于套索的3-0聚丙烯缝线，将线头松松打结并保留在原位。通过3-0聚丙烯缝线标记识别风险区域和梗死区。</li>
			<li>手术完成后，分三层关闭切口。
			<ol>
				<li>用两根2-0聚乳酸-羟基乙酸九一零（polyglactin 910）8字缝合线围绕肋骨缝合，关闭第一层。</li>
				<li>用3-0聚对二氧环己酮缝线连续缝合肌肉层和皮下层。</li>
				<li>使用5-0单股缝线以皮下连续缝合方式关闭皮肤。采用埋入式连续缝合，以尽量减少动物感受到的刺激。</li>
			</ol>
			</li>
			<li>通过穿刺胸腔穿刺术排出胸膜腔内的气体。</li>
			<li>应用芬太尼透皮贴剂72小时，以辅助术后疼痛管理。</li>
			<li>术后1周和2周时进行经胸超声心动图检查，以评估短轴缩短率（FS）的变化趋势。</li>
			<li>在预定的恢复期结束后，按照上述方法对动物进行镇静、插管和麻醉。行胸骨正中切开术，暴露并打开心包膜。在深麻醉状态下通过摘除心脏处死兔。 整块,&#160;通过放血使动物死亡。</li>
		</ol>
		</li>
		<li>非存活病例
		<ol>
			<li>实验结束后，在确认深度麻醉的情况下，完全暴露心脏并将其取出 整块 用于生化和组织分析。动物通过放血致死。</li>
		</ol>
		</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

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</ol>

作者声明不存在任何利益冲突，包括财务或其他方面的利益冲突。

本方案展示了一种在兔体内可靠实施急性区域性心肌缺血的方法。左侧小切口开胸术适用于需要存活的实验，因其切口较小，可最大限度减轻创伤及相关疼痛。重要的是，在拔管前无需使用利尿治疗，非存活组在术中以及存活组在术后4周内均无死亡病例。当实验设计需要非存活动物模型，或需对整体及区域性心肌功能进行更详细监测时，可采用正中胸骨切开术（图1）。
该实验方案中最关键的步骤是使用锥形针小心地环绕左前降支，避免损伤动脉或引起静脉出血，并阻断左前降支以形成稳定的一致性风险区域。
在进行所述手术时可能出现的一些并发症包括：由于潮气量过高，机械通气期间发生肺过度膨胀；左前降支（LAD）损伤导致的出血；肋间血管损伤继发的出血，后者通常发生在进胸时或牵开器操作过程中；以及左前降支结扎引起的心律失常（术中心室颤动）。其他术后并发症也可能发生，例如手术部位感染、因疼痛导致动物活动能力下降，和/或心肌局部区域收缩功能减退。尽管这些并发症的发生率极低，研究者仍应能够及时且有效地处理这些问题。
<p ...

心血管疾病是全球最主要的死亡原因，每年导致超过1800万人死亡1,2,3。急性心肌梗死（MI）是一种常见的医疗急症，当血栓或动脉粥样硬化斑块碎片阻塞冠状动脉的血流时即可发生。这会导致该动脉供血区域出现局部心肌缺血。
本研究描述了一种利用简单且可靠的方法建立的实验方案 原位 在兔模型中建立急性区域性心肌缺血，用于非存活和存活实验。该方法的最初目标是评估线粒体移植对心肌坏死的调节作用及其在缺血事件后对心脏功能的改善效果。既往研究表明，缺血发生后，随着氧气供应减少，线粒体结构和功能发生改变，高能磷酸化合物水平迅速下降，导致心脏能量储备急剧减少4研究人员已尝试通过药物干预和/或操作技术来改善缺血后心脏功能并减轻心肌组织坏死，但这些方法提供的保护作用有限，对线粒体损伤和功能障碍的改善作用甚微5,6,7我们的团队及其他研究者先前已证实，线粒体损伤主要发生在缺血期间，而在再灌注期间保护线粒体呼吸功能可改善心肌收缩功能的恢复，并减小心肌梗死面积。8,9,10因此，我们提出假设：在再灌注前将未受缺血影响组织中的线粒体移植至缺血区域，可能是一种减轻心肌坏死并改善心肌功能的替代性策略。本文详细阐述了验证该假设所采用的实验方案以及初步研究分析中获得的代表性结果。
此外，许多研究者关注了其他与明确心肌缺血-再灌注损伤的影响及建立适当治疗干预措施密切相关的重要课题。其中一个研究领域是预处理。心肌缺血预处理是一种由短暂缺血应激激活的心脏保护机制，可在随后发生的长时间缺血期间降低心肌细胞坏死的发生率。这些机制可通过缺氧或冠状动脉闭塞来激活。Mandel 等人证明，缺氧-高氧预处理有助于维持一氧化氮代谢物的平衡，减少内皮素-1 的过度产生，并支持器官保护11。此外，远隔缺血预处理的概念也已被探索，该现象指单一器官的预处理可提供全身性保护作用。Ali 等人发现，在接受择期开放性腹主动脉瘤修复术的患者中，通过间歇性夹闭髂总动脉作为刺激手段实施远隔预处理，可降低术后心肌损伤、心肌梗死及肾功能损害的发生率12。
兔模型相较于其他物种的模型具有潜在优势，数十年来已被用于多种不同研究场景，包括心律失常的诱导、整体及区域性缺血模型、心肌收缩研究等13,14,15。尽管兔心脏比犬或猪的心脏小，但其体积足够大，便于开展外科手术操作，且成本显著更低13。兔心脏常被选用，因其与人类心脏高度相似：事实上，兔具有类似的代谢速率，表达β-肌球蛋白重链，并且缺乏显著的心肌黄嘌呤氧化酶活性16。本文所述用于诱导区域性心肌缺血的技术操作简便、可重复性强且成本效益高。该方法既适用于非存活实验，也适用于存活实验，仅诱导区域性缺血而非整体缺血，且所需材料无需特殊设备。可采用两种不同的外科入路（即胸骨切开术和小切口开胸术），从而为操作者和实验方案设计提供更大的灵活性。此外，该手术无需使用体外循环。在此背景下，针对需要多支血管血运重建的患者，冠状动脉旁路移植术的微创入路已成为有价值的替代方案17,18。该动物模型可用于研究这些不同入路之间的差异，并为外科培训学员提供基于动物的学习工具。此外，利用该模型进行心脏导管插入术，可能对生理学研究和/或外科培训具有重要价值。
本模型提供了一种方法学，适用于需要诱导区域性心肌缺血并随后测量梗死面积、心肌功能及细胞变化的应用场景。通过本方案，我们能够通过检测细胞器内化、氧气消耗、高能磷酸盐合成以及细胞因子介质和蛋白质组学通路的激活，评估细胞功能及对缺血适应的多个指标，以及所提出的治疗干预措施（即线粒体移植）的效果。这些结果对于维持心肌能量代谢、细胞存活率和心脏功能至关重要，并可在缺血-再灌注损伤后对心肌保护技术进行客观评价。该模型可用于研究缺血后心肌病理学及恢复领域的类似生物学通路及相关替代策略。
本实验方案的目的是提供一种高度可重复的方法以诱导 原位 兔急性区域性心肌缺血模型用于非存活与存活实验。该模型具有高存活率、低术中死亡率和最小化发病率的方法学优势19其他急性局部心肌缺血模型已有报道，采用放射性标记物质、对比剂、磁共振成像或计算机模拟等方法20,21,22本方案提供了一种可靠且简便的方法，具有成本效益高、可重复性好、技术要求低等优点，因此无需外科手术经验的研究人员亦可操作。该方案适用于采用左侧小切口开胸术的存活实验，或采用正中胸骨切开术的非存活模型。

<table><tbody><tr><td>#10 刀片</td><td>Bard Parker</td><td>371210</td><td></td></tr><tr><td>#11 刀片</td><td>Fisher Scientific</td><td>B3L</td><td></td></tr><tr><td>22 G PIV 针头</td><td>BD Insyte</td><td>381423</td><td></td></tr><tr><td>乙酰丙嗪</td><td>VETONE</td><td>NDC 13985-587-50</td><td>0.5 mg/kg 肌内注射和静脉注射</td></tr><tr><td>加压输液袋</td><td>Infu-Stat</td><td>2139</td><td></td></tr><tr><td>套管针</td><td>Becton Dickinson</td><td>382512</td><td></td></tr><tr><td>动脉导管</td><td>Teleflex</td><td>MC-004912</td><td></td></tr><tr><td>阿托品</td><td>Hikma Pharmaceuticals</td><td>NDC 0641-6006-01</td><td>&amp;nbsp;0.01 mg/kg 肌内注射</td></tr><tr><td>聚维酮碘和70%异丙醇</td><td>McKesson</td><td>NDC 68599-2302-6</td><td></td></tr><tr><td>血气分析仪</td><td>Siemens</td><td>MRK0025</td><td></td></tr><tr><td>电外科设备（Bovie）</td><td>Valleylab</td><td>E6008</td><td></td></tr><tr><td>动脉夹</td><td>World Precision Instruments</td><td>14119</td><td></td></tr><tr><td>布比卡因</td><td>Auromedics</td><td>NDC 55150-249-50</td><td>&amp;nbsp;3 mg/kg 肌内注射</td></tr><tr><td>布托啡诺</td><td>Roxane</td><td>NDC 2054-3090-36</td><td>0.5 mg/kg 肌内注射</td></tr><tr><td>透明醋酸酯片</td><td>Oxford Instruments</td><td>ID 51-1625-0213</td><td></td></tr><tr><td>电动剪毛器</td><td>Andis</td><td>AGC2</td><td></td></tr><tr><td>DeBakey 镊子</td><td>Integra</td><td>P6280</td><td></td></tr><tr><td>超声心动图仪</td><td>Philips</td><td>IE33 F1</td><td></td></tr><tr><td>心电图机</td><td>Meditech</td><td>MD908B</td><td></td></tr><tr><td>气管插管</td><td>Medline</td><td>#922774</td><td></td></tr><tr><td>芬太尼</td><td>West-Ward</td><td>NDC 0641-6030-01</td><td>1&amp;ndash;4 &amp;micro;g/kg 透皮贴剂</td></tr><tr><td>10% 甲醛溶液</td><td>Epredia</td><td>94001</td><td></td></tr><tr><td>玻璃板</td><td>&amp;nbsp;United Scientific</td><td>B01MUHX6MR</td><td></td></tr><tr><td>肝素钠</td><td>Sagent</td><td>NDC 69-0058-02</td><td>1000U 溶于 1 mL，3 mg/kg</td></tr><tr><td>热水毯</td><td>3M</td><td>55577</td><td></td></tr><tr><td>异氟烷</td><td>Penn Veterinary Supply, INC</td><td>NDC 50989-606-15</td><td>1%&amp;ndash;3%</td></tr><tr><td>氯胺酮</td><td>Dechra</td><td>NDC 42023-138-10</td><td>10 mg/kg 静脉注射</td></tr><tr><td>Lab Chart 7 数据采集软件</td><td>Adinstruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>乳酸林格液</td><td>ICUmedical</td><td>NDC 0990-7953-09</td><td>10 mL/kg/h</td></tr><tr><td>喉镜</td><td>Welch Allyn</td><td>68044</td><td></td></tr><tr><td>左心室腔导管&amp;nbsp;3Fr</td><td>McKesson</td><td>385764-EA</td><td></td></tr><tr><td>利多卡因（1%）</td><td>Pfizer</td><td>4276-01</td><td>1&amp;ndash;1.5 mL/kg 静脉注射</td></tr><tr><td>左心室舒张压换能器</td><td>Edward</td><td>PDP-ED</td><td></td></tr><tr><td>标记笔</td><td>Viscot</td><td>1451SR-100 非无菌</td><td></td></tr><tr><td>梅奥剪刀</td><td>Mayo</td><td>S7-1098</td><td></td></tr><tr><td>美托咪定</td><td>Entireoly Pets Pharmacy</td><td>NDC 015914-005-01</td><td>0.25 mg/kg 肌内注射</td></tr><tr><td>梅岑鲍姆剪刀</td><td>Cole-Parmer</td><td>UX-10821-05</td><td></td></tr><tr><td>Monastra 蓝色素 98%</td><td>Chemsavers</td><td>MBTR1100G</td><td></td></tr><tr><td>Monocryl 5-0</td><td>Ethicon</td><td>Y463G</td><td></td></tr><tr><td>蚊式钳</td><td>Shioda</td><td>802N</td><td></td></tr><tr><td>PDS 3-0</td><td>Ethicon</td><td>42312201</td><td></td></tr><tr><td>压电声学测微晶体</td><td>Sonometrics</td><td>小型 2mm 圆形</td><td></td></tr><tr><td>敷料垫</td><td>DeRoyal</td><td>32-363</td><td></td></tr><tr><td>聚维酮碘术前准备液</td><td>Medline</td><td>MDS093940</td><td></td></tr><tr><td>精密挥发麻醉系统面罩</td><td>Yuwell</td><td>B07PNH69BF</td><td></td></tr><tr><td>Prolene 3-0</td><td>Ethicon</td><td>8665G</td><td></td></tr><tr><td>Proline 5-0</td><td>Ethicon</td><td>8661G</td><td></td></tr><tr><td>脉搏血氧饱和度探头</td><td>Masimo</td><td>9216-U</td><td></td></tr><tr><td>肋骨牵开器</td><td>Medline</td><td>MDS5621025</td><td></td></tr><tr><td>S12 儿科扇形探头</td><td>Phillips</td><td>21380A</td><td></td></tr><tr><td>声学测微仪</td><td>Sonometrics</td><td>BZ10123724</td><td></td></tr><tr><td>无菌纱布</td><td>Medline</td><td>3.00802E+13</td><td></td></tr><tr><td>无菌毛巾</td><td>McKesson</td><td>MON 277860EA</td><td></td></tr><tr><td>胸骨牵开器</td><td>Medline</td><td>MDS5610321</td><td></td></tr><tr><td>缝合用缝线</td><td>J&amp;amp;J Dental</td><td>8698G</td><td></td></tr><tr><td>遥测监护仪</td><td>Meditech</td><td>MD908B</td><td></td></tr><tr><td>温度探头</td><td>Omega</td><td>KHSS-116G-RSC-12</td><td></td></tr><tr><td>氯化三苯基四氮唑（1%）</td><td>Millipore</td><td>MFCD00011963</td><td></td></tr><tr><td>呼吸机</td><td>MedGroup</td><td>MSLGA 11</td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 2-0</td><td>Ethicon</td><td>V635H</td><td></td></tr><tr><td>乙烯基管</td><td>ABE</td><td>DISW 3001</td><td></td></tr></tbody></table>

兔缺血-再灌注损伤模型

Model of Ischemia and Reperfusion Injury in Rabbits

本方案提供了一种简单且高度可重复的方法来诱导 原位 兔急性区域性心肌缺血模型用于非存活和存活实验。使用阿托品、乙酰丙嗪、丁丙诺啡和异氟烷对成年新西兰白兔进行镇静。对动物进行气管插管并接入机械通气。经耳缘静脉插入静脉导管以输注药物。预先给予肝素、利多卡因和乳酸林格液进行预处理。行颈动脉切开术以建立动脉通路，用于血压监测。通过连续实时分析监测并记录部分生理学和机械参数。
在动物被镇静并完全麻醉后，进行左侧第四肋间小切口开胸术（可存活手术）或正中胸骨切开术（不可存活手术）。打开心包膜，定位左前降支（LAD）动脉。
将一根聚丙烯缝合线环绕在左前降支动脉的第二或第三对角支上，并将聚丙烯纤维丝穿入一段小型乙烯基管中，形成一个结扎套索。通过拉紧该套索阻断左前降支血流，使动物经历30分钟的局部缺血。心肌缺血的确认依据为心外膜局部出现肉眼可见的发绀。在局部缺血结束后，松开结扎线，使心脏恢复灌注。
对于生存和非生存实验，均可评估心肌功能 通过 通过超声心动图（ECHO）测量射血分数缩短率。对于非存活研究，可连续采集使用三个植入缺血区域的数字压电超声探头获得的声学测微数据，以及通过心尖插入的左心室（LV）导管测量的左心室发展压（LVDP），分别用于评估局部和整体心肌功能。
在生存研究中，关闭切口，进行左侧针刺胸腔穿刺以排出胸膜腔内的气体，并实现术后疼痛控制。

按照方案（图1），通过直接观察心外膜发绀立即确认心肌缺血。
在缺血前、缺血期间及再灌注期间持续记录标准心电图（三个肢体导联：I、II 和 III，以及三个计算得出的加压导联：aVL、aVR 和 aVF）（图2）。心电图显示心动过速、心律失常（如心室颤动）、传导系统异常（如束支传导阻滞）、梗死相关Q波的出现，以及ST段偏移23。
在区域性缺血期间，所有心脏的前壁中段心腔均通过肉眼直接观察到区域性运动减弱，该区域与左前降支（LAD）动脉的灌注区一致，因通过暂时结扎LAD阻断血流而造成缺血。在存活和非存活病例中，均于缺血前、诱导区域性缺血前即刻以及实验过程中的不同时间点（5分钟、10分钟、15分钟、30分钟、60分钟和120分钟）获取二维超声心动图（2D ECHO）读数。左心室舒张末期内径（LVEDD）和左心室收缩末期内径（LVESD）分别通过二维引导的M型超声心动图...

本研究展示了一种在兔子中建立急性区域性心肌缺血和再灌注损伤的动物模型，该模型具有高度可重复性，适用于通过左侧小切口开胸术进行存活实验，或通过正中胸骨切开术进行非存活实验。

本方案提供了一种简单且高度可重复的方法，用于在兔体内诱导原位急性区域性心肌缺血，适用于非存活实验及……

本方案提供了一种简单、可靠且可重复的方法，用于在兔模型中诱导原位急性区域性心肌缺血及再灌注损伤，适用于非存活和存活实验。该技术通过两种不同的外科手术途径实现，具有极低的死亡率和并发症发生率。该方法成本效益高，技术要求低，因此无需具备外科专业知识的研究人员亦可操作。通过小切口开胸暴露前降支动脉可能具有挑战性。我们建议在第四肋间距胸骨旁做一长度为5至6厘米的横向切口，并建议在此之前练习此类暴露操作及兔尸检。为进行可存活的左前外侧小切口开胸手术，应使用枕头将麻醉后兔的左侧身体抬高约30度。用记号笔触诊并标出骨性标志。使用10号刀片，在第五肋骨表面的皮肤上做切口，切口从紧邻胸骨侧缘处向外侧延伸5至6厘米。使用电灼器，先在内侧切开胸大肌，然后在外侧切开前锯肌。然后切开第五肋以上的肋间肌，以保护肋间神经血管束。使用锐性分离技术，用梅岑鲍姆剪刀切开壁层胸膜，小心地经第四肋间隙进入胸膜腔，并沿肋骨方向向两侧延长初始的胸膜切口，直至可插入肋骨牵开器或胸骨牵开器。将肋骨牵开器或胸骨牵开器置入肋间隙并撑开，以显露心脏和心包囊。使用DeBakey镊子提起心包膜，用Metzenbaum剪刀剪开，并继续分离左前降支动脉。这将充分暴露心脏的前外侧面，使左前降支及其分支得到良好的可视化。为了分离左前降支（LAD）动脉，使用带圆锥形针头的3-0聚丙烯缝线环绕其第三对角支，然后移除针头。在存活实验中，剪短用于分离LAD的三条3-0聚丙烯缝线，并将线头松松地打结在一起。这三条3-0聚丙烯缝线用于在收获心脏后确定风险区域和梗死区域。术后，用2-0聚乳酸羟基乙酸（Polyglactin 910）缝线在肋骨周围打两个8字缝合。用3-0聚二氧杂环己酮缝线连续缝合肌肉层和皮下层。然后用5-0单股缝线皮内缝合皮肤。最后，进行穿刺胸腔穿刺术以排出胸膜腔积液。对于非存活实验，立即使用弯头梅奥剪刀行胸骨正中切开术。使用胸骨牵开器暴露心脏及心包囊后，按先前演示的方法切开心包膜。观察在先前完成的开胸手术步骤中放置的3-0聚丙烯缝线环。为分离左前降支动脉（LAD），使用带圆锥形针头的3-0聚丙烯缝线环绕其第三对角支。随后取下针头，将聚丙烯缝线的两端一同穿入一小段乙烯基管中，形成一个套索。使用DeBakey镊子，将一块矩形聚四氟乙烯（PTFE）垫片置于两根聚丙烯丝线之间，使其夹在分离出的前降支冠状动脉与乙烯基管之间。通过下压乙烯基管并上提聚丙烯缝合丝线，收紧此结扎装置以阻断冠状动脉。使用蚊式钳夹紧该管，以维持所需的紧度。通过观察心外膜的局部发绀来确认心肌缺血。在诱导缺血30分钟后，移除套线。实验结束时，取心脏进行生物化学和组织学分析。缺血前、缺血期间及再灌注期间记录的心电图显示心动过速、心律失常、传导系统异常、梗死相关Q波的出现以及ST段偏移。二维超声心动图结果显示，与缺血前相比，缺血期间及缺血后的心室缩短分数下降。在诱

model-of-ischemia-and-reperfusion-injury-in-rabbits

Research

科研

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手术创伤会诱发炎症反应。已知细胞因子和内源性配体可调节缺血再灌注后的心肌梗死面积。本文介绍一种改良的闭胸小鼠缺血再灌注模型，通过悬挂重物的方式减少开胸手术的影响。...

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关键词：外周缺血，股动脉结扎，兔模型，缺血再灌注，血管疾病，实验外科

来源：Wanderer, S., 等。兔动脉囊微血管吻合口动脉瘤模型。J. Vis. Exp.

利用经弹性蛋白酶处理的血管袋在兔体内建立实验性动脉瘤模型

我们介绍一种外科手术方法，用于诱导实验性缺血/再灌注（I/R）损伤，以模拟小鼠模型中的心肌梗死（MI），该方法可更清晰地定位左前降支动脉（LAD）上的结扎位置，从而提高小鼠MI实验的可重复性。...

通过左前降支动脉结扎建立心肌缺血-再灌注损伤的小鼠模型

离体大鼠心脏是研究缺血再灌注损伤的经典模型。本文描述了通过以下步骤从大鼠体内获取跳动心脏的过程 原位...

离体灌注大鼠心脏中缺血-再灌注损伤的诱导与评估

本文详细描述了小鼠肠道缺血-再灌注的实验操作步骤，该方法可产生可重复的损伤且不导致动物死亡，旨在促进该技术在研究领域内的标准化。此肠道缺血-再灌注损伤模型可用于研究损伤与再生过程中的细胞和分子机制。...

小鼠肠道缺血-再灌注损伤模型

我们描述了一种用于在高脂血症和糖尿病兔模型中诱导外周缺血的外科手术方法。该手术可作为外周动脉疾病患者临床前研究的模型。同时介绍了血管造影术，用于评估所诱导缺血的程度以及灌注恢复情况。...

糖尿病兔后肢缺血的临床前模型

肾缺血-再灌注损伤与住院患者的高发病率和高死亡率相关。本文介绍一种简单且有效的小鼠单侧肾缺血-再灌注损伤模型，并系统概述肾脏中典型的病理学改变过程。...

一种有效的单侧肾缺血-再灌注损伤小鼠模型

通过使用自制的牵开器、聚氯乙烯管和独特的打结方法，改进了大鼠心脏心肌缺血-再灌注模型。心电图、氯化三苯基四氮唑和组织学染色以及生存率分析结果表明，改进模型组的成功率和生存率均高于现有模型组。...

改良的大鼠心肌缺血-再灌注损伤模型

连续动脉血压记录可用于研究各种血流动力学参数的影响。本报告展示了在缺血性卒中的大型动物模型中应用连续动脉血压监测，以确定卒中的病理生理机制、不同血流动力学因素的影响，以及评估新的治疗策略。...

缺血性卒中兔模型中血压的实时监测与调控

学习建立兔急性心肌缺血再灌注损伤模型，采用左胸小切口或正中开胸两种手术方法，适用于存活与非存活实验。该技术成本低、操作简便，即使无外科经验的研究人员也能可靠完成，为心血管研究提供可重复的实验方案。

兔缺血-再灌注损伤模型

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