基于行为学与网络药理学的蒙药匝迪-5在大鼠抑郁模型中的分析

通过行为学实验可以确定Zadi-5在治疗抑郁症方面的治疗效果，而网络药理学可预测其药效的潜在作用机制。网络药理学有助于探索具有复杂作用机制的传统药物，并进一步缩短研究所需的时间和降低研究成本。开放旷场实验、蔗糖偏好实验和Morris水迷宫实验是评估神经疾病动物模型食欲、动机水平、学习能力和记忆力的金标准。

这些测试是评估抑郁障碍研究中简单、客观且合理的方法。建立动物模型对于理解新药的病理机制和作用至关重要。为了建立良好的抑郁模型，研究人员必须恰当地安排刺激顺序并调整刺激强度。

首先，除对照组外，对所有大鼠施加选定的抑郁刺激因素，并结合隔离条件，持续28天，同时将大鼠单独饲养在各自的笼子中。进行旷场实验时，将一个黑色箱子均分为九个面积相等的方形区域，并在箱子上方配备视频追踪分析系统。

末次灌胃后一天，将大鼠置于中心方格，记录其3分钟内的水平和垂直活动。然后，以大鼠四肢均移动并伴有停顿的方格穿越次数记为水平活动，以直立和理毛行为记为垂直活动。每次测试后，用75%酒精清洁箱体，以去除大鼠气味，供后续实验使用。

接下来，通过在消耗前后称量相应瓶子的重量来进行蔗糖消耗实验。并使用此公式计算第0、7、14、21和28天的60分钟蔗糖偏好率。进行莫里斯水迷宫实验时，将水池分为四个象限。

将四个象限按一至四的顺序编号，并将隐藏平台置于第三象限，位于水面以下一厘米处。向水池中加入牛奶，使水具有一定的不透明度。然后将实验大鼠从不同的象限放入迷宫中，使其在120秒内寻找平台。

使用Morris水迷宫视频轨迹分析系统记录潜伏期。将大鼠放置于水中固定位置。若大鼠在120秒内未能找到隐藏平台，则记录潜伏期为120秒。

接着，移开平台，将大鼠放入水中，记录120秒内的区域穿越次数。浏览中医药系统药理学网页，在草药名称栏中输入肉豆蔻种子、石菖蒲根和 Piperis longi 果实，以获取化学成分名称。设定口服生物利用度（OB）的药代动力学指数大于30%，类药性指数大于0.18。

在中药药典中检索活性成分，以确定各成分的化学名称。随后，在 Pub Chem 中检索已确定的化学名称，获取其异构体 SMILES 编码或 InChI 编码。利用 SEA、Batman 和 Swiss Target Prediction 工具，基于异构体 SMILES 编码或 InChI 编码预测活性成分的作用靶点蛋白，并找出共同的靶点蛋白。

将数据复制到 Excel 文件中。接着，在 GeneCards、DisGeNET 和 DrugBank 中使用关键词 depression 和 depressive disorder 搜索并鉴定抑郁症的潜在蛋白质靶点。然后将数据复制到 Excel 文件中。

浏览维恩图，将抑郁症的作用靶点上传至列表一，然后将Zadi-5活性成分的作用靶点上传至列表二并提交。获取维恩图结果，并筛选出重叠的靶点候选基因。

创建一个名为 network 的电子表格。同时创建一个名为 type 的电子表格。将该工作表导出至 Cytoscape，以构建网络：Zadi-5 中草药成分-疾病靶点网络。

在 STRING 数据库中设置常见靶点以分析其相互作用。将蛋白类型设置为 homosapiens。将相互作用阈值设为 0.9，以仅筛选经实验验证的相互作用类型，并不显示孤立节点。

打开 DAVID 工具，将 Zadi-5 的 86 个潜在抗抑郁靶点粘贴至“开始分析”框中，以研究相关信号通路。下载 KEGG 通路文件。从富集分析结果中选择 PI3K-AKT 通路中的基因，并将其粘贴至电子表格中，用于构建类型及网络文件。

将网络文件类型导出至Cytoscape，以生成PI3K-AKT通路的可视化化合物靶点网络。在慢性不可预知性轻度应激（CUMS）刺激前，受试动物组之间未显示显著差异。建立CUMS模型后，该组的垂直和水平评分均低于对照组。

与模型组相比，阳性对照组和Zadi-5组的垂直和水平评分显著升高。在第0天，各检测组的蔗糖消耗量无显著差异。在第28天，Zadi-5组和阳性对照组均高于模型组。

在 Morris 水迷宫实验中，模型组找到平台的潜伏期显著长于对照组。阳性对照组和 Zadi-5 组的潜伏期短于模型 组。在穿越目标区域次数方面，模型组的穿越次数少于对照组。

阳性对照组和Zadi-5组的穿越次数多于模型组。维恩图分析显示，在1000个与抑郁症相关的蛋白质靶点中，有86个重叠靶点被确定为Zadi-5治疗抑郁症的关键靶点。基于这些发现，构建了Zadi-5草药成分-疾病靶点以及候选靶点的蛋白质-蛋白质相互作用网络分析。

根据 KEGG 通路分析，PI3K-AKT 信号通路排名第七，且与多种信号通路相关。因此，PI3K-AKT 通路被认为相较于其他富集通路具有相对更高的重要性。

在进行该操作时，必须避免连续多天重复使用相同类型的刺激。在在线数据库中分析Zadi-5各组分后，可通过液相色谱-质谱联用技术及核磁共振波谱法确保验证质量。