Name: 用于治疗性水凝胶研究的胶质母细胞瘤复发术后切除模型 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-02-24T14:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 46 s
Description: 了解胶质母细胞瘤术后复发模型的建立方法，用于评估可注射生物响应性水凝胶的治疗效果。该方案通过显微手术和活体成像技术，为研究肿瘤复发机制和开发局部治疗策略提供了可靠的实验平台。

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本工作获得了中国国家自然科学基金项目资助（82071767 和 82171781）。

所有动物实验均经南京医科大学机构审查委员会和动物伦理委员会批准并监督（IACUC-1904004）。本研究采用6至8周龄的C57BL/6J雌性小鼠。实验动物购自商业来源（见材料表）。
1. 动物准备
<ol>
	<li>称重小鼠，并通过腹腔注射 50 mg/kg 戊巴比妥钠进行麻醉（参见&#160;材料表）。给予&#160;术前镇痛使用美洛昔康（5 mg/kg；腹腔注射）。&#160;将小鼠饲养在12小时光照/12小时黑暗循环、环境温度24 °C、相对湿度50%的笼具中。 
	&#8203;注意：本研究中，小鼠的初始体重约为22 g。</li>
	<li>使用实验动物剃毛器去除小鼠头部的毛发，并将头部和四肢固定在立体定位仪上（参见 材料表). 
	注意：使用前对所有设备进行灭菌。</li>
	<li>用氯己定或聚维酮碘溶液对小鼠头部进行消毒，至少交替擦拭三次，每次擦拭后用酒精冲洗&#160;酒精，并用无菌手术巾覆盖小鼠。在两只眼睛上涂抹眼药膏以防止干燥。</li>
	<li>用眼科剪在小鼠右侧前额顶部沿中线纵向剪开约1厘米的头皮切口。 
	注意：确认&#160;通过足底反射消失判断手术麻醉平面&#160;在做切口之前。</li>
	<li>调节立体定位仪，确保人字缝与前囟点处于同一水平面。</li>
</ol>
2. 建立原位颅内胶质母细胞瘤模型
<ol>
	<li>用蘸有龙胆紫的棉签标记前囟前方1 mm、前囟右侧1.8 mm以及前囟下方3 mm的位置2 （参见 材料表).</li>
	<li>使用1 mm直径的微型颅骨钻进行钻孔（参见 材料表）以形成直径约1 mm、深度约1 mm的孔径。</li>
	<li>用无菌棉签吸除渗出的脑脊液。</li>
	<li>吸取 5 µL 肿瘤细胞悬液（GL261-Luci，5 × 105 用微量注射器将悬浮于5 µL PBS中的细胞注入。 
	注意：GL261-Luci 细胞系购自商业来源（参见 材料表).</li>
	<li>将微量注射器针尖垂直对准颅骨钻孔，插入至针尖进入颅骨平面3 mm，再回退0.5 mm7.</li>
	<li>打开微量注射器，并以1 µL/min的速度注入。</li>
	<li>注射后留针10分钟。</li>
	<li>缓慢撤出微量注射器，并用无菌干棉球按压注射点。</li>
	<li>用不可吸收外科缝线（10-0，参见 材料表），并再次对切口进行消毒。</li>
	<li>监测动物健康状况，并将其置于温暖环境中。</li>
	<li>小鼠苏醒后，将其放回饲养笼中。</li>
	<li>对小鼠进行成像 体内 生物发光成像系统（参见 材料表) 用于在荷瘤后第10天检测移植瘤。 
	注意：使用负载荧光素酶的胶质母细胞瘤细胞 GL261 进行生物发光成像。&#160;
	<ol>
		<li>使用1.5%异氟烷（氧气流速为0.6 L/min）对小鼠进行麻醉。通过脚掌反射消失确认麻醉深度后，经腹腔注射荧光素钾（10 mg/mL，参见 材料表，11 秒后，执行 体内 生物发光成像。当荧光值达到约 5 × 105，该操作是成功的。 
		注意：&#160;麻醉动物&#160;成像前通过鼻罩持续供给气化异氟烷以维持麻醉状态。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>选择成功成瘤的小鼠以构建胶质母细胞瘤切除后复发模型。</li>
</ol>
3. 建立胶质母细胞瘤切除后复发模型
<ol>
	<li>当原位颅内GBM模型小鼠的肿瘤大小达到约6.5 × 105选择用于术后复发模型的小鼠。</li>
	<li>称重原位颅内GBM模型小鼠，并通过腹腔注射50 mg/kg戊巴比妥钠麻醉小鼠。给予&#160;美洛昔康（5 mg/kg；腹腔注射）用于围手术期镇痛。&#160;</li>
	<li>重复步骤1.2−1.5的过程。</li>
	<li>分离头皮组织与颅骨，检查用于构建原位颅内胶质母细胞瘤（GBM）模型的钻孔部位。若钻孔已愈合，需使用立体定位仪确定钻孔位置，并按照步骤2.1–2.3所述程序进行操作。</li>
	<li>使用颅骨钻将孔径扩大至5 mm，并用无菌棉签吸除渗出的脑脊液。</li>
	<li>将显微镜聚焦于小鼠头部，并调整设置以确保钻孔位于视野中央。</li>
	<li>使用显微剪刀剪开脑膜，并在显微镜下用显微刮匙和显微刀切除部分肿瘤组织。 
	注意：关于脑膜，打开颅骨后，靠近脑组织的薄层膜状结构即为脑膜。</li>
	<li>用无菌纱布止血，并用无菌生理盐水冲洗切口。</li>
	<li>注射市售水凝胶（10 µL，参见 材料表) 用1 mL注射器将液体注入切除腔，使用不可吸收外科缝线（10-0）缝合头皮，并再次对切口进行消毒（图1).</li>
	<li>监测动物的健康状况，并保持小鼠体温。</li>
	<li>小鼠苏醒后，将其放回饲养笼中。</li>
	<li>执行 体内 利用生物发光成像在移植后1天检测移植肿瘤，以定量残余肿瘤的大小（图2 和 图3).</li>
	<li>每2天称重一次小鼠，直至实验终点。 
	注意：本研究的终末时间点为第30天，小鼠通过腹腔注射过量戊巴比妥钠实施安乐死。</li>
</ol>

<ol><li>Lim, M., Xia, Y., Bettegowda, C., Weller, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+state+of+immunotherapy+for+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Current state of immunotherapy for glioblastoma.</a> Nature Reviews Clinical Oncology. 15 (7), 422-442 (2018).</li>
<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+situ+targeting+nanoparticles-hydrogel+hybrid+system+for+combined+chemo-immunotherapy+of+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Controlled+Release%22%5BJournal%5D)">In situ targeting nanoparticles-hydrogel hybrid system for combined chemo-immunotherapy of glioma.</a> Journal of Controlled Release. 345, 786-797 (2022).</li>
<li>Binder, Z. A., O'Rourke, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glioblastoma%3A+The+current+state+of+biology+and+therapeutic+strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Glioblastoma: The current state of biology and therapeutic strategies.</a> Cancer Research. 82 (5), 769-772 (2022).</li>
<li>Kauer, T. M., Figueiredo, J. L., Hingtgen, S., Shah, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Encapsulated+therapeutic+stem+cells+implanted+in+the+tumor+resection+cavity+induce+cell+death+in+gliomas%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Encapsulated therapeutic stem cells implanted in the tumor resection cavity induce cell death in gliomas.</a> Nature Neuroscience. 15 (2), 197-204 (2011).</li>
<li>Jiang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticle+engineered+TRAIL-overexpressing+adipose-derived+stem+cells+target+and+eradicate+glioblastoma+via+intracranial+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Nanoparticle engineered TRAIL-overexpressing adipose-derived stem cells target and eradicate glioblastoma via intracranial delivery.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (48), 13857-13862 (2016).</li>
<li>Quail, D. F., Joyce, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+microenvironmental+landscape+of+brain+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Cell%22%5BJournal%5D)">The microenvironmental landscape of brain tumors.</a> Cancer Cell. 31 (3), 326-341 (2017).</li>
<li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunostimulant+hydrogel+for+the+inhibition+of+malignant+glioma+relapse+post-resection%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Nanotechnology%22%5BJournal%5D)">Immunostimulant hydrogel for the inhibition of malignant glioma relapse post-resection.</a> Nature Nanotechnology. 16 (5), 538-548 (2021).</li>
<li>Ruan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dual-bioresponsive+drug-delivery+depot+for+combination+of+epigenetic+modulation+and+immune+checkpoint+blockade%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Materials%22%5BJournal%5D)">A dual-bioresponsive drug-delivery depot for combination of epigenetic modulation and immune checkpoint blockade.</a> Advanced Materials. 31 (17), 1806957(2019).</li>
<li>Louveau, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+and+functional+features+of+central+nervous+system+lymphatic+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Structural and functional features of central nervous system lymphatic vessels.</a> Nature. 523 (7560), 337-341 (2015).</li>
<li>Sun, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunostimulant+in+situ+hydrogel+improves+synergetic+radioimmunotherapy+of+malignant+glioblastoma+relapse+post-resection%5BTitle%5D)+AND+%22Advanced+Functional+Materials%22%5BJournal%5D)">Immunostimulant in situ hydrogel improves synergetic radioimmunotherapy of malignant glioblastoma relapse post-resection.</a> Advanced Functional Materials. 32 (43), 2205038(2022).</li>
<li>Liu, D. K., Sulman, E. P., Wen, P. Y., Kurz, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+therapies+for+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Neurology+and+Neuroscience+Reports%22%5BJournal%5D)">Novel therapies for glioblastoma.</a> Current Neurology and Neuroscience Reports. 20 (7), 19(2020).</li>
<li>Mellinghoff, I. K., Cloughesy, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Balancing+risk+and+efficiency+in+drug+development+for+rare+and+challenging+tumors%3A+A+new+paradigm+for+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Oncology%22%5BJournal%5D)">Balancing risk and efficiency in drug development for rare and challenging tumors: A new paradigm for glioma.</a> Journal of Clinical Oncology. 40 (30), 3510-3519 (2022).</li>
</ol>

作者声明无利益冲突。

手术仍是大多数胶质母细胞瘤（GBM）患者的首选治疗方式11。由于GBM具有侵袭性生长的特性，即使采用显微神经外科技术切除，仍会有少量肿瘤细胞残留，最终导致肿瘤复发12。如何抑制术后GBM的复发已成为GBM相关研究的重点。然而，由于脑组织结构复杂，构建合适的术后GBM模型已成为该领域亟待解决的首要问题。
本研究建立了一种胶质母细胞瘤（GBM）切除术后复发模型。在构建该模型的过程中，原位颅内GBM模型的建立至关重要。成功建立该模型后，需在适当时机进行切除手术。推荐时机为肿瘤大小的荧光值约为6.5 × 105时。为降低小鼠死亡率，采用腹腔注射40 mg/kg的1%戊巴比妥钠进行麻醉后实施切除。然而，由于麻醉剂量较小，小鼠常出现术中移动，导致切除操作困难。在此基础上，将麻醉剂量增加至50 mg/kg。增加麻醉剂量后，小鼠术中反应消失，切除手术得以顺利进行。本方案中也可使用异氟烷气体麻醉。
本研究中使用了GL261-Luci细胞建立模型，因此未来需要采用更多的胶质母细胞瘤（GBM）细胞系来验证该方案。为了增强方案的可信度，还需使用多种GBM小鼠模型，例如基因工程改造的GBM小鼠模型。此外，磁共振成像（MRI）可能是检测术后肿瘤复发的最佳手段。
综上所述，本研究建立了一种胶质母细胞瘤（GBM）切除术后复发模型。在该模型中，通过评估肿瘤切除后残留肿瘤的生长情况来监测肿瘤的复发。尽管该模型尚不能完全模拟肿瘤复发的真实情况，但其切除方式与临床治疗GBM患者时所采用的最大安全切除手术标准相似。本研究提供了一种构建GBM切除术后复发模型的简便且可行的方法，代表了GBM切除术后复发研究领域的一项进展。

胶质母细胞瘤（GBM）是所有中枢神经系统肿瘤中最常见的恶性肿瘤1，2。手术是GBM患者的首选治疗方法，术后主要采用放化疗作为辅助治疗。然而，尽管接受了各种治疗，大多数GBM患者常在3至6个月内出现肿瘤复发3，4，5。因此，迫切需要开发更有效的治疗策略以防止GBM复发。
近期关于胶质母细胞瘤（GBM）的研究主要集中在原发性肿瘤，而非复发性肿瘤6。然而，临床上最常见且亟需解决的问题是如何抑制GBM术后复发。因此，针对GBM术后复发的研究需要得到更多关注。生物响应性治疗水凝胶是目前研究术后肿瘤复发最常用的载体7,8。然而，由于中枢神经系统具有特殊的结构，建立适用于GBM切除术后复发的模型十分困难9，而这类模型对于GBM复发研究至关重要。
本研究基于用于原发性胶质母细胞瘤（GBM）研究的原位颅内GBM模型，建立了一种改进的GBM切除术后复发模型。在该模型中，通过显微外科手术切除大部分肿瘤，残留肿瘤则通过以下方法检测： 体内 生物发光成像和苏木精-伊红（H&E）染色&amp;#38;E) 染色。该模型可模拟脑肿瘤患者的切除状态，适用于多种关于胶质母细胞瘤复发的研究。

<table><tbody><tr><td>龙胆紫</td><td>Sigma</td><td>C6158</td><td></td></tr><tr><td>GL261-Luci</td><td>上海中侨新周生物科技有限公司</td><td>ZQ0932</td><td></td></tr><tr><td>活体生物发光成像系统</td><td>Tanon</td><td>Tanon ABL X6</td><td></td></tr><tr><td>实验动物剃毛器</td><td>碧云天生物技术</td><td>FS600</td><td></td></tr><tr><td>小鼠</td><td>北京维通利华实验动物技术有限公司</td><td></td><td></td></tr><tr><td>微型刮匙</td><td>贝莱弗医疗有限公司</td><td></td><td></td></tr><tr><td>微型手术刀</td><td>贝莱弗医疗有限公司</td><td></td><td></td></tr><tr><td>显微镜</td><td>上海向凡仪器有限公司</td><td>JSZ5A/B</td><td></td></tr><tr><td>微量注射器</td><td>Hamilton</td><td>87943</td><td></td></tr><tr><td>微型颅骨钻</td><td>RWD</td><td>78001</td><td></td></tr><tr><td>不可吸收性外科缝线</td><td>上海玉研仪器有限公司</td><td></td><td></td></tr><tr><td>戊巴比妥钠</td><td>ChemSrc</td><td>57-33-0</td><td></td></tr><tr><td>PVA-TSPBA水凝胶&amp;nbsp;</td><td>阿拉丁</td><td>9002-89-5</td><td></td></tr><tr><td>立体定位仪</td><td>RWD</td><td>68043</td><td></td></tr></tbody></table>

用于治疗性水凝胶研究的胶质母细胞瘤切除后复发模型

Glioblastoma Relapse Post-Resection Model for Therapeutic Hydrogel Investigations

肿瘤复发是胶质母细胞瘤（GBM）预后不良的重要指标。目前许多研究致力于寻找有效的治疗策略，以预防GBM术后复发。生物响应型治疗性水凝胶因其能够实现药物的局部持续释放，常被用于GBM术后的局部治疗。然而，由于缺乏合适的GBM切除后复发模型，相关研究受到限制。本文建立并应用了一种GBM切除后复发模型，用于治疗性水凝胶的研究。该模型基于广泛应用于GBM研究的原位颅内GBM模型构建，通过对原位颅内GBM模型小鼠实施次全切除术，模拟临床治疗过程，并利用残留肿瘤来评估肿瘤再生长的大小。该模型构建简便，能更好地模拟GBM手术切除的实际情况，适用于多种GBM切除后局部复发治疗的研究。因此，该GBM切除后复发模型为开展针对术后复发的有效局部治疗研究提供了一种独特的GBM复发模型。

胶质母细胞瘤切除后复发模型的构建流程如下 图 1在显微镜下部分切除肿瘤后形成的切除腔如图所示。&#160;采用注射器将水凝胶注入切除腔，以展示其治疗效果。实验设计的时间安排如图所示。 图 2A将 GBM 细胞植入小鼠脑内后，通过……检测肿瘤生长。 体内 第10天进行生物发光成像。第11天实施肿瘤切除，随后将水凝胶注射至切除腔。 体内 生物发光成像检测于第15天、第20天、第25天和第30天进行，以监测残留肿瘤的生长情况。如图所示， 图 2B,C，如所示，GBM复发术后模型中的肿瘤体积显著小于原位颅内GBM模型中的肿瘤体积。 体内 生物发光成像检测。术后第25天，肿瘤复发显著图 2D）。H&#38;E染色证实，胶质母细胞瘤切除后复发模型构建成功，且残留肿瘤在切除后显著复发。图 3A,B).
<img alt="图 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65026/65026fig01.jpg" /> 
图 1肿瘤切除与水凝胶注射的术中视图。 部分肿瘤组织在显微镜下使用微型刮匙和微型手术刀切除，并将水凝胶注射至切除腔内。比例尺：50 &#181;m. 本图改编自 Sun 等人。10. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65026/65026fig01large.jpg" target="_blank">请点击此处查看此图的放大版本。</a>
<img alt="图 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65026/65026fig02.jpg" /> 
图 2实验设计与时间安排 体内 小鼠在颅内及切除后胶质母细胞瘤模型中的生物发光成像。 (A) 实验设计时间表显示，手术切除在第11天进行，且 体内 活体生物发光成像于第10天、第15天、第20天、第25天及第30天进行。B) 颅内 GBM 模型小鼠在第 10 天显示出较大的肿瘤体积，(C) 肿瘤体积在第11天切除后显著缩小，且(D) 肿瘤体积在切除后第25天于切除后胶质母细胞瘤模型中有所增大。对照组包含未经处理的切除后胶质母细胞瘤复发模型小鼠。本研究共使用42只小鼠。比例尺：100 &#181;该图已根据 Sun 等人修改。10. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65026/65026fig02large.jpg" target="_blank">请点击此处查看此图的放大版本。</a>
<img alt="图 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65026/65026fig03.jpg" /> 
图3H&#38;切除后胶质母细胞瘤模型脑组织的伊红染色图像。 (A)&#160;一种 H&#38;E 染色图像显示切除腔、残留肿瘤及正常脑组织。脑组织于切除术后 1 天采集。B) 一个H&#38;伊红染色图像显示复发性肿瘤与正常脑组织。脑组织于切除术后第12天采集。比例尺：100 &#181;该图已根据 Sun 等人发表的研究进行了修改。10. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65026/65026fig03large.jpg" target="_blank">请点击此处查看此图的放大版本。</a>

本方案建立了一种利用显微镜研究可注射生物响应型水凝胶治疗效果的胶质母细胞瘤（GBM）切除后复发模型 体内.

肿瘤复发是胶质母细胞瘤（GBM）预后不良的重要指标。许多研究正致力于寻找有效的……

肿瘤复发是胶质母细胞瘤（GBM）手术切除治疗方案失败的主要原因。本方案提供了一种独特的GBM复发模型，可用于术后复发局部治疗的有效性研究。该技术为构建GBM切除后复发模型提供了一种简便且可行的方法，可广泛应用于各类GBM复发相关研究。首先准备动物。用眼科剪在小鼠右侧前额中线处沿中线方向剪开约一厘米的切口。调节立体定位仪，确保矢状缝与前囟点处于同一水平面。使用浸有龙胆紫的棉签，在前囟前方1毫米、右侧1.8毫米、下方3毫米处标记一点。使用直径为1毫米的微型颅骨钻在该点钻孔，形成一个直径约1毫米、深度约1毫米的孔。用无菌棉签清除渗出的脑脊液。接着，用微量注射器吸取5 µL肿瘤细胞悬液。将微量注射器针尖垂直对准颅骨钻孔处，插入直至针尖进入颅骨平面3 mm。然后，将针头回撤0.5毫米。打开微量注射器，以每分钟1微升的速度注入溶液。注射后保留针头10分钟。然后，缓慢撤出微量注射器，并用无菌干燥的棉球按压注射部位。使用不可吸收的10-0外科缝线缝合头皮，并对切口进行消毒。监测动物的健康状况，并将其置于温暖的环境中。小鼠苏醒后，将其移回饲养笼中。荷瘤10天后，检测移植的肿瘤。具体操作为：向小鼠腹腔注射荧光素钾，11秒后使用活体生物发光成像系统对小鼠进行成像。分离头皮组织和颅骨，检查用于构建原位颅内胶质母细胞瘤（GBM）模型的钻孔。如果孔洞已愈合，使用立体定位仪确定孔洞位置，并按之前所示重新钻孔。使用颅骨钻将孔径扩大至5毫米，并用无菌棉签吸除渗出的脑脊液。将显微镜聚焦于小鼠头部，并调整设置以确保钻孔位于视野中央。使用显微剪刀剪开脑膜。然后，在显微镜下用显微刮匙和显微手术刀切除部分肿瘤组织。用无菌纱布止血，并用无菌生理盐水冲洗注射部位。使用1毫升注射器，将10微升市售水凝胶注入切除腔内。采用该方案，将GBM细胞植入小鼠脑内，并于第10天通过活体生物发光成像检测肿瘤生长情况。在第11天进行了切除手术和水凝胶注射。GBM术后复发模型中肿瘤的体积显著小于原位颅内GBM模型中的肿瘤。在第25天对残留肿瘤生长情况进行监测，结果显示肿瘤复发。苏木精-伊红染色证实，胶质母细胞瘤切除后复发模型构建成功，且在肿瘤切除后残余肿瘤显著复发。该操作中最关键的一点是，在显微镜下切开脑膜并切除部分肿瘤组织。

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癌症研究

用于治疗性水凝胶研究的胶质母细胞瘤复发术后切除模型

本视频展示了如何将来源于脑肿瘤的胶质瘤球分离为单个细胞，并将其包封在基于透明质酸的水凝胶中。该过程促进细胞间的相互作用，形成结构化的三维胶质母细胞瘤模型。...

一种基于透明质酸的水凝胶用于胶质母细胞瘤细胞的三维培养

采用无血清神经球培养基对分离的高级别胶质瘤手术标本进行传代培养，以富集具有肿瘤干细胞表型的细胞。对于无法形成神经球的标本，提供了一种替代性实验方案。同时介绍了保持神经球三维结构的石蜡包埋技术，用于免疫细胞化学分析。...

优化高级别胶质瘤手术标本的细胞培养，用于临床相关动物模型及三维免疫化学分析

我们建立了小鼠皮层原位胶质母细胞瘤模型，用于活体双光子显微镜观察，该模型可重现肿瘤生长过程中通常存在的生物物理约束条件。通过以慢性玻璃窗替代肿瘤上方的颅骨，可利用双光子显微镜对肿瘤进展进行长期动态追踪。...

一种保留脑实质物理约束并适用于活体双光子显微成像的原位胶质母细胞瘤小鼠模型

具有肿瘤趋向性的治疗用间充质干细胞（MSCs）在治疗侵袭性胶质母细胞瘤方面展现出良好前景。最佳移植策略涉及将MSCs接种于支架材料后递送至肿瘤切除腔内。本文提供了用于研究MSC治疗胶质母细胞瘤的临床前技术，包括：影像引导下的肿瘤切除；接种MSC的支架植入；以及术后治疗监测。...

图像引导下胶质母细胞瘤切除及治疗性干细胞接种支架的颅内植入

在此，我们介绍一种在正交可调生物材料中三维培养患者来源的胶质母细胞瘤细胞的实验方案，该生物材料旨在模拟脑基质。该方法提供了一种 体外，可维持多种特性的实验平台 体内...

基于透明质酸的水凝胶用于患者来源的胶质母细胞瘤细胞三维培养

本研究描述了用于三维脑肿瘤模型的柔性叉指电极的开发，即 体外 培养 在卵内 模型，以及 体内...

用于胶质母细胞瘤脉冲电场治疗的柔性有机电子器件

本实验方案描述了一种用于评估机械和生化信号对患者来源的胶质母细胞瘤细胞在三维基质模拟培养中化疗反应影响的实验平台，该平台采用定制的紫外光照装置，可实现具有可调机械特性的水凝胶的高通量光交联。...

水凝胶阵列可提高三维肿瘤模型中基质组分与治疗药物筛选的通量

在此，我们描述了一种用于胶质母细胞瘤（GBM）的临床前原位小鼠模型，该模型通过将来源于基因工程小鼠模型肿瘤的细胞进行颅内注射而建立。该模型呈现出人类GBM疾病的典型特征。在转化研究中，小鼠脑肿瘤可通过影像学手段进行追踪 体内 MRI 与组织病理学...

多形性胶质母细胞瘤的转化性原位模型

在此，我们介绍一种可实现肿瘤类球体快速、稳定且低成本制备并进行水凝胶包封的实验方案。该方法无需特殊设备，具有广泛的适用性，尤其适用于研究类球体与基质间的相互作用以及构建 体外 组织生理学或病理学模型...

肿瘤类球体的制备及其在聚乙二醇水凝胶中的包封用于研究类球体-基质相互作用

我们介绍一种用于模拟胶质瘤侵袭前沿肿瘤微环境并包含间质液流的方法。该模型采用透明质酸-胶原蛋白I水凝胶，并置于组织培养插入式装置中，可施加流体压力。该系统可用于定量分析细胞侵袭行为，并可对细胞进行分离或裂解。...

一种具有间质流的光聚合透明质酸-胶原侵袭性胶质瘤微环境模型

我们介绍一种利用新诊断和复发性肿瘤患者来源的磁性胶质瘤球体构建的三维胶质母细胞瘤迁移模型。该平台可实现对患者特异性迁移动态的可视化，并可用于评估治疗效果。在迁移完成后，该检测方法还可进行多重分析，以评估蛋白质的定位和表达模式。...

可重复的缺氧条件下磁性纳米颗粒介导类球体定位的三维胶质母细胞瘤迁移实验

了解胶质母细胞瘤术后复发模型的建立方法，用于评估可注射生物响应性水凝胶的治疗效果。该方案通过显微手术和活体成像技术，为研究肿瘤复发机制和开发局部治疗策略提供了可靠的实验平台。

用于治疗性水凝胶研究的胶质母细胞瘤切除后复发模型

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