Name: 眼柄消融术可增加泥蟹卵巢成熟 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-03-31T13:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 28 s
Description: 了解眼柄消融术促进泥蟹卵巢成熟的技术方法。本研究通过烧灼与手术两种方式，证实该技术可在30天内有效诱导雌性泥蟹卵巢发育至完全成熟阶段，且不影响存活率，为甲壳类水产养殖繁殖管理提供重要参考。

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本研究由马来西亚教育部卓越高等学府（HICoE）计划资助，该计划授予马来西亚登嘉楼大学热带水产与渔业研究所（项目编号：63933）。 &amp;#38; Vot 编号 56048）。我们感谢马来西亚登嘉楼大学和赛亚柏佳有限公司的支持。 通过 感谢马来西亚理科大学（Universiti Sains Malaysia）为Khor Waiho和Hanafiah Fazhan提供的兼聘学术研究员职位。同时感谢私人合作研究基金（Vot. No. 55377）的支持。

本实验方案遵循马来西亚实验动物科学协会（Laboratory Animal Science Association of Malaysia）发布的《马来西亚实验动物用于科研目的的护理与使用规范》。实验样本的处死操作依据美国国立卫生研究院（National Institutes of Health）《实验动物护理与使用指南》（NIH Publications No. 8023，1978年修订版）进行。性未成熟雌性泥蟹（橙色泥蟹 S. olivacea）采自马来西亚实兆远湿地（Setiu Wetlands）当地市场（北纬5°66′62′′，东经102°72′33′′）。泥蟹物种根据形态学特征进行鉴定1。
1. 样品采集与消毒
<ol>
	<li>采集健康、活跃且未成熟的雌性泥蟹（图1）。 
	​注意：未成熟的雌蟹具有三角形、颜色较浅的腹肢，头胸甲宽度（CW）范围为80−85 mm。</li>
	<li>用含氯自来水（淡水）清洗螃蟹，以去除碎屑和嗜渗寄生虫。</li>
	<li>将螃蟹浸泡在盐度为20 ppt、浓度为150 ppm的甲醛溶液中30分钟。</li>
	<li>在甲醛处理期间，使用气石持续提供轻柔的曝气。曝气源可来自中央供气管道或水族箱曝气泵。</li>
	<li>用流动的海水冲洗螃蟹，以去除残留的甲醛。</li>
</ol>
<img alt="雌性蟹类未成熟与成熟标本的比较解剖图，比例尺为20 mm。" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65039/65039fig01.jpg" data-altupdatedat="1788304762000" data-alt="图1"> 
图1：用于鉴定雌性泥蟹性成熟阶段的腹部形态。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65039/65039fig01large.jpg" target="_blank">请点击此处查看此图的放大版本。</a>
2. 驯化
<ol>
	<li>将每只消毒后的雌蟹分别放入独立的32 L圆形水箱中。</li>
	<li>在20 ppt盐度条件下培育雌蟹3天，并每天投喂两次（上午09:00和晚上20:00），投喂切碎的海水鱼，投喂量约为蟹体重的4%−5%。</li>
	<li>在早晨投喂前，通过虹吸法清除残余及未食用的饲料。</li>
	<li>每天更换10%的育蟹海水（20 ppt）。</li>
</ol>
3. 诱导换羽以达到性成熟
<ol>
	<li>使用无菌剪刀剪除除游泳足以外的所有步足。
	<ol>
		<li>用捞网捕获螃蟹，并小心握住。先剪去双侧螯足，然后用剪刀在第二关节处剪去步足。螃蟹会自动自切受损的附肢。附肢自切过程无需麻醉。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>附肢自切后立即用淡水清洗螃蟹。</li>
	<li>将完成附肢自切的螃蟹分别转移至带孔塑料篮（28 cm 长 × 22 cm 宽 × 7 cm 高）中，并将塑料篮放入玻璃钢水槽（305 cm 长 × 120 cm 宽 × 60 cm 高）内。 
	注：两个塑料篮可绑在一起并用夹子固定，上方的篮子作为盖子，防止螃蟹逃出。</li>
	<li>使用盐度为 20 ppt、水深至少 10 cm 的循环水养殖系统（RAS），确保整个塑料篮完全浸没于水中。</li>
	<li>继续每天两次投喂附肢自切后的雌蟹，饲料为切碎的海水鱼，投喂量为蟹体重的 5%−7%。</li>
	<li>养殖螃蟹直至其通过蜕壳达到性成熟（约 35 天）。 
	​注：对于野生成熟雌性泥蟹的商业化卵巢成熟与苗种生产，可跳过诱导蜕壳步骤。从野外捕获的成熟雌蟹必须先进行驯化，随后直接实施冷击麻醉及眼柄切除术。</li>
</ol>
4. 麻醉
<ol>
	<li>选择性成熟的雌性个体，其腹部瓣膜呈深色、椭圆形，且具有 CW &gt;86 mm (图1).</li>
	<li>用捞网捕获螃蟹，并将其单独置于小型水族箱中进行麻醉。</li>
	<li>经过5分钟的适应期后，向每个水族箱中加入2-苯氧乙醇（2-PE），使其终浓度为2 mL/L，进行15分钟的麻醉处理。</li>
	<li>通过观察螃蟹是否缺乏自发运动，确保其已完全麻醉。</li>
</ol>
5. 眼柄消融
<ol>
	<li>烧灼法
	<ol>
		<li>所有操作均应在桌面上并在开放区域进行。</li>
		<li>取一根带木柄或塑料手柄的平头镍钢金属棒（例如螺丝刀），并将手柄部分用湿棉布包裹。</li>
		<li>将两把不锈钢外科镊子在高压灭菌器中灭菌。</li>
		<li>准备一瓶70%乙醇喷雾剂，并远离任何与火源相关的设备，如喷灯和烧红的螺丝刀。准备好纸巾以备使用。 
		注意：乙醇高度易燃。请与火源保持安全距离。</li>
		<li>将喷灯牢固连接至燃气罐（丁烷）。 
		警告：请遵循喷灯和燃气罐上的使用说明。连接燃气罐时，务必确保喷灯处于关闭状态。仔细阅读并遵守燃气罐上注明的所有防火安全注意事项。</li>
		<li>佩戴厚棉手套，以防被高温物体烫伤。</li>
		<li>将金属棒的尖端置于喷灯火焰中加热，直至金属棒变为亮红色。</li>
		<li>用湿棉布覆盖已麻醉的螃蟹。 
		注意：应覆盖螃蟹的触角，以避免不必要的损伤。</li>
		<li>用已灭菌的镊子夹住螃蟹的一只眼睛。 
		注意：首次使用时，镊子需在高压灭菌器中灭菌；后续对其他螃蟹操作时，应使用70%乙醇进行消毒。</li>
		<li>将烧红的金属平头端压在螃蟹的眼睛上，轻轻按压约10−15秒，直至眼柄变为橙色或红橙色。操作时需小心，避免损伤周围结构。 
		注意：采用烧灼法进行眼柄切除时需要两人配合：一人固定螃蟹，另一人执行切除操作。</li>
		<li>使用70%乙醇喷雾对镊子进行消毒，以防止螃蟹之间的交叉污染。 
		注意：眼柄切除操作完成后，至少等待5分钟，待镊子冷却后再用70%乙醇消毒，以防引发火灾危险。</li>
		<li>完成所有螃蟹的眼柄切除后，将灼热的镍钢金属棒（螺丝刀）浸入自来水冷却。</li>
		<li>重复使用前应对毛巾进行消毒。可准备多块毛巾以节省时间。 
		注意：先用自来水清洗毛巾，然后将其浸入30 ppm含氯水中5分钟，再用自来水再次冲洗，最后浸入1 g/L硫代硫酸钠溶液中。</li>
		<li>关闭喷灯后，将其放置于安全位置，并等待其冷却至环境温度（约30分钟）后再行拆卸。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>手术法
	<ol>
		<li>在通风良好的环境中进行操作。</li>
		<li>将两把外科剪刀和镊子在高压灭菌器中灭菌。</li>
		<li>将50 mL 70%乙醇倒入100 mL玻璃烧杯中。</li>
		<li>佩戴厚棉手套。</li>
		<li>握住已麻醉的螃蟹，并用湿棉布覆盖。</li>
		<li>用已灭菌的镊子夹住螃蟹的一只眼睛。</li>
		<li>迅速使用已灭菌的外科剪刀剪除眼柄。 
		注意：螃蟹伤口部位可能会流失血淋巴。</li>
		<li>每次使用后，将剪刀和镊子浸入70%乙醇中消毒，并用纸巾擦干后方可再次使用。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
6. 麻醉后护理
<ol>
	<li>制备20 ppt的过滤海水，并将其置于高位水箱中持续曝气。</li>
	<li>将一根软管连接至高位水箱，以实现重力驱动的水流。</li>
	<li>在切除眼柄后立即把蟹放入篮子中，并用高位水箱流出的海水（环境水温：28 °C）冲洗蟹体。</li>
	<li>保持海水持续流动，并观察蟹直至其能够自主活动，表明已从麻醉状态恢复。 
	注意：海水也可在地面水箱中配制，可使用潜水泵来驱动水流。</li>
	<li>将蟹单独置于含曝气的20 ppt海水的水族箱中，继续观察30分钟。 
	​注意：恢复后的蟹将在后续的亲本培育过程中进行单独养殖。</li>
</ol>
7. 卵巢成熟过程的观察
<ol>
	<li>亲本培育
	<ol>
		<li>将成熟的蟹转移至单独的32 L圆形水箱中。</li>
		<li>每天两次（上午09:00和晚上20:00）投喂切碎的海洋鱼类（于−20 °C冷冻保存），并在次日早晨投喂前清除未摄食的残饵。</li>
		<li>在20 ppt盐度条件下，将亲本单独培育30天。</li>
		<li>每日清除粪便，并更换10%的海水（20 ppt）。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>解剖
	<ol>
		<li>使用70%乙醇清洁解剖托盘、剪刀和镊子。</li>
		<li>采用2-PE浸浴麻醉法对雌蟹进行个体麻醉。</li>
		<li>随机选取尚未进行眼柄消融的新生成熟雌蟹（在前成熟雌蟹蜕皮后），以确认其性腺发育阶段。</li>
		<li>单独处死所有经过眼柄消融处理的实验雌蟹，并鉴定其性腺成熟阶段。使用无菌锋利探针破坏蟹的胸神经节。首先移除头胸甲，然后移除肝胰腺，以暴露卵巢。肉眼或在体视显微镜下观察卵巢颜色，并根据颜色判定卵巢成熟阶段（图2）。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>卵巢成熟阶段鉴定
	<ol>
		<li>通过肉眼或体视显微镜观察卵巢颜色。</li>
		<li>根据颜色特征鉴定卵巢成熟阶段30：未成熟期（第1阶段）呈透明或乳白色；早期发育期（第2阶段）呈浅黄色至淡黄；前期成熟期（第3阶段）呈黄色至浅橙色；完全成熟期（第4阶段）呈深橙色至红褐色。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

所有作者均无利益冲突。

本方案专为锯缘青蟹（Scylla spp.）的切除眼柄操作而设计，可作为一种有效诱导性腺成熟的方法。该方案可轻松复制，用于泥蟹商业化卵巢成熟生产，并可用于缩短泥蟹苗种生产中的潜伏期（即从一次产卵到下一次产卵之间的时间）。
甲壳动物（例如淡水虾、海虾）的眼柄切除通常用于诱导性腺成熟和非季节性产卵11,12,13。对短尾蟹类进行眼柄切除也已被用于研究蜕皮25,32,33、激素调控18、性腺成熟34以及诱导繁殖和繁殖性能35,<sup c...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/65039">Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs</a>. The Introduction, Protocol, Discussion and References were&#160;updated.

Erratum: Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs

属于梭子蟹属的四种泥蟹 Scylla 是水产养殖中具有重要商业价值的甲壳类物种1,2甲壳类动物（包括泥蟹）的生长及其从未成年（亚成体或青春期）阶段向性成熟（成体）阶段的转变，是通过蜕壳过程实现的，该过程涉及周期性地蜕去较旧且较小的外骨骼。头胸甲宽度（CW）、螯足以及腹部附肢的形态特征被广泛用于判断其性成熟状态。 Scylla 种（复数形式）.3,4,5蜕皮过程受多种激素的调控，并需要消耗大量能量6除了正常的蜕壳过程外，蟹类肢体的丢失（无论是自发还是由外界因素引起）均可加速其蜕壳，且不影响其存活率7,8,9因此，断肢自切法在软壳泥蟹养殖业中常被用于诱导蜕皮7,9.
单侧或双侧眼柄切除术在淡水虾和海水虾的性腺成熟及苗种生产中应用较为广泛10,11,12,13。甲壳动物常见的眼柄切除技术包括以下几种：(i) 使用细线在眼柄基部进行结扎14,15；(ii) 使用热镊子或电灼设备灼烧眼柄16；(iii) 切除或直接夹闭眼柄，使其形成开放性伤口12；以及 (iv) 用剃刀切开眼部远端后，通过切口挤出眼柄内容物17。眼柄X器官是甲壳动物重要的内分泌器官，可调控甲壳动物高血糖激素（CHH）、蜕皮抑制激素（MIH）和卵黄生成抑制激素（VIH）6,18,19,20,21,22。眼柄X器官（或称窦腺复合体）合成并释放属于神经肽激素家族的性腺抑制激素（GIH），也称为卵黄生成抑制激素（VIH）6。单侧或双侧眼柄切除可减少GIH的合成，从而使促性腺激素（即性腺刺激激素，GSH）占主导地位，加速甲壳动物的卵巢成熟过程23,24,25,26。眼柄切除后，在GIH影响消除的情况下，雌性甲壳动物将能量集中用于卵巢发育27。研究表明，单侧眼柄切除已足以诱导甲壳动物的卵巢成熟11，且虾类和蟹类被切除的眼柄在经历数次蜕皮后可再生28。锯蟹属（Scylla spp.）的卵巢发育可分为四个阶段：i）未成熟期（第1阶段），ii）早期发育期（第2阶段），iii）前期成熟期（第3阶段），iv）完全成熟期（第4阶段）29,30。未成熟卵巢阶段见于未成熟的雌体。在性成熟蜕皮并交配后，未成熟卵巢开始发育，最终在产卵前达到成熟状态（第4阶段）31。
眼柄消融方案对于泥蟹亲本的培育和苗种生产至关重要。在全球食品市场中，消费者更青睐卵巢完全成熟（第4期）的成年泥蟹，而非肌肉含量更高的个体，因此这类泥蟹具有更高的商业价值，甚至高于大型雄蟹。目前尚无完整的泥蟹眼柄消融操作方案。本研究所提出的眼柄消融方案通过使用完全麻醉&#160;的螃蟹，最大限度地减少动物应激，并降低操作人员被蟹钳伤的风险。该方案简便且成本低廉。本文提供了一种适用于Scylla spp.的眼柄消融操作流程，可有效促进性腺成熟。我们测试了两种眼柄消融技术（烧灼法与手术切除法），并根据雌性泥蟹性腺发育速率比较了两者的效率。

<table><tbody><tr><td>通气管&amp;nbsp;</td><td>Ming Yu Three</td><td>N/A</td><td>水族馆及宠物商店</td></tr><tr><td>气石</td><td>Ming Yu Three</td><td>N/A</td><td>水族馆及宠物商店</td></tr><tr><td>高压灭菌器</td><td>HIRAYAMA MANUFACTURING CORPORATION</td><td>N/A</td><td>MADE IN JAPAN</td></tr><tr><td>漂白粉（Hi-Chlon 70%）</td><td>Nippon Soda Co.Ltd,Japan</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>喷灯&amp;nbsp;</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>圆形水箱（32L）</td><td>BEST PLASTIC INDUSTRY SDN. BHD.&amp;nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>棉质手套（厚款）&amp;nbsp;</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>棉质毛巾</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>数字温度计</td><td>Hanna Instrument</td><td>HI9814</td><td>Hanna&amp;nbsp;Instruments&amp;nbsp;GroLine Hydroponics Waterproof pH / EC / TDS / Temp. Portable Meter HI9814</td></tr><tr><td>数字游标卡尺</td><td>INSIZE Co., Ltd.</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>解剖托盘</td><td>Hatcheri AKUATROP&amp;nbsp;</td><td>N/A</td><td>马来西亚登嘉楼大学研究中心</td></tr><tr><td>滴管瓶/塑料滴管</td><td>Shopee 马来西亚</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>70% 乙醇</td><td>Thermo Scientific Chemicals</td><td>033361.M1</td><td>使用双蒸水稀释至 70%</td></tr><tr><td>玻璃纤维水箱（1 吨）</td><td>Hatcheri AKUATROP&amp;nbsp;</td><td>N/A</td><td>马来西亚登嘉楼大学研究中心</td></tr><tr><td>细沙</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>采自马来西亚登嘉楼大学海滨</td></tr><tr><td>急救箱</td><td>Watsons 马来西亚</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>平头镍钢金属棒（螺丝刀）</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>甲醛</td><td>Thermo Scientific Chemicals</td><td>119690010</td><td></td></tr><tr><td>喷灯用燃气罐（丁烷气）&amp;nbsp;</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>长头点火枪</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>玻璃烧杯（100 mL）</td><td>Corning Life Sciences</td><td>1000-100</td><td></td></tr><tr><td>冰袋&amp;nbsp;</td><td>Watsons 马来西亚</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>带孔塑料篮&amp;nbsp;</td><td>Eco-Shop Marketing Sdn. Bhd.</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>15 mm PVC 管</td><td>Bina Plastic Industries Sdn Bhd (HQ)</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>折射仪</td><td>ATAGO CO.,LTD.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>冰箱</td><td>Sharp Corporation Japan</td><td>N/A</td><td>SHARP 110L 卧式冷冻柜 - SJC 118</td></tr><tr><td>抄网</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td></td><td>N/A</td></tr><tr><td>海水</td><td>Hatcheri AKUATROP&amp;nbsp;</td><td>N/A</td><td>马来西亚登嘉楼大学研究中心</td></tr><tr><td>虹吸管</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>喷雾瓶</td><td>Mr. DIY Sdn Bhd</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>不锈钢手术镊&amp;nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>不锈钢手术剪&amp;nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>潜水式水泵&amp;nbsp;</td><td>AS</td><td>N/A</td><td>型号：Astro 4000</td></tr><tr><td>碘酊溶液&amp;nbsp;（聚维酮碘）</td><td>Farmasi Fajr Sdn Bhd</td><td>N/A</td><td>N/A</td></tr><tr><td>纸巾&amp;nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>透明塑料水族箱</td><td>Ming Yu Three</td><td>N/A</td><td>水族馆及宠物商店</td></tr><tr><td>防水台面</td><td>Hatcheri AKUATROP&amp;nbsp;</td><td>N/A</td><td>马来西亚登嘉楼大学研究中心</td></tr></tbody></table>

眼柄消融促进泥蟹卵巢成熟

Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs

泥蟹（Scylla spp.）是广泛分布于印度-西太平洋地区的重要经济甲壳类物种。在养殖过程中，诱导卵巢成熟对于满足市场对成熟泥蟹的需求以及加快苗种生产具有重要意义。眼柄消融是一种促进泥蟹卵巢成熟的有效手段。然而，目前尚无针对泥蟹眼柄消融的标准化操作规程。本研究介绍了两种眼柄消融技术：灼烧法（使用加热的金属工具对麻醉后的蟹进行眼柄消融）和手术法（使用手术剪切除眼柄）。在实施眼柄消融前，选择性成熟雌蟹（甲宽 &#62; 86 mm）使用含海水的冰袋（−20 °C）进行麻醉。当水温降至 4 °C 时，将冰袋从水中移除。眼柄消融后，立即用流动的海水（环境温度：28 °C）使蟹恢复。在整个眼柄消融过程中及操作后均未出现死亡现象。本研究所提供的眼柄消融方案可显著加快泥蟹的卵巢成熟进程。

性腺成熟 
在进行眼柄切除术之前，所有解剖的雌性个体（n = 6）均发现具有乳白色卵巢组织（未成熟卵巢，第1阶段）（图2）。在单独饲养30天后，经眼柄切除的雌性蟹（n = 63；其中31只为电灼法处理，32只为手术法处理）的性腺成熟率高于未经眼柄切除处理的雌性蟹（n = 31）（图3）。眼柄切除的雌性蟹中，处于卵巢前成熟阶段（第3阶段）的比例最高（图3；包括电灼法和手术法两种技术），单因素方差分析（ANOVA）显示各实验组雌性蟹卵巢成熟阶段之间存在显著差异（p &lt; 0.05）（表1）。对照组中未成熟雌性蟹的比例显著高于电灼法和手术法处理组（Tukey's HSD检验，p &lt; 0.001）。在所有成熟阶段中，电灼法与手术法处理组之间雌性蟹所占比例无显著差异（Tukey's HSD检验，所有 p &gt; 0.1）。与对照组相...

对麻醉后的雌性螃蟹实施了两种眼柄消融方案（即灼烧法和手术法&#160;）。对泥蟹进行眼柄消融可加速卵巢成熟，且不会降低存活率。

泥蟹（Scylla spp.）是具有重要经济价值的甲壳类物种，广泛分布于印度-西太平洋地区。在养殖过程中，……

本方案通过尽量减少泥蟹眼柄切除过程中的应激反应，从而降低因眼柄切除导致的死亡率。提高操作效率是减少动物应激的关键。在实施操作前，务必确保所有准备工作均已就绪。首先用含氯的自来水清洗健康、活跃的雌性未成熟泥蟹，以去除任何碎屑和寄生虫。将泥蟹浸泡在甲醛溶液中30分钟。在甲醛处理期间，需使用气石持续提供轻柔的通气。接下来，使用流动的海水冲洗螃蟹，以去除任何残留的甲醛。进行螃蟹眼柄灼烧时，首先用喷灯加热金属棒的尖端，直至其变为亮红色。用湿润的棉布覆盖已麻醉的螃蟹，并用灭菌镊子夹住螃蟹的一只眼睛。将烧红的金属尖端压在蟹的眼柄上约10至15秒，直至眼柄变为橙色或红橙色。用70%乙醇对镊子进行消毒，并用无菌纸巾擦拭干净，以确保蟹之间无交叉污染。完成所有蟹的消融操作后，将金属棒浸入自来水中。进行手术消融时，使用厚棉手套固定麻醉后的螃蟹，并用湿棉布覆盖。用无菌镊子夹住螃蟹的一只眼睛，迅速用手术剪剪除眼柄。术后，准备一个顶部水箱，装入含盐量为千分之二十的过滤海水，并持续充气。连接一根软管至水箱，以实现重力作用下的水流。将螃蟹放入篮子中，并使其暴露于上方水箱流出的海水中。在流动海水条件下观察螃蟹，直至其能够自主活动为止。将螃蟹单独放入另一个盛有海水的水族箱中，继续观察30分钟。随机选取未进行眼柄切除的新生成熟雌蟹。移除头胸甲顶部和肝胰腺后，观察并鉴定螃蟹卵巢的成熟阶段。可根据颜色识别卵巢成熟阶段：未成熟的第一阶段呈半透明或乳白色，早期成熟的第二阶段呈浅黄色至淡黄色，即将成熟的第三阶段呈黄色至浅橙色，完全成熟的第四阶段呈深橙色至红褐色。与未去眼柄的雌性相比，去眼柄雌性的性腺成熟率更高。在去眼柄的雌性蟹中，第三阶段卵巢所占比例最高。单因素方差分析显示，实验组雌性蟹的卵巢成熟阶段之间存在显著差异。对照组中未成熟雌性蟹的比例高于去眼柄组。仅在去眼柄组中，雌性蟹能够在处理后30天内从不成熟阶段发育至第四阶段。确保在采用灼烧或手术方法后，泥蟹的额角已完全消融至关重要。额角消融可使甲壳类养殖者更便捷地诱导卵巢成熟和蜕壳过程，同时也便于研究人员进一步探究额角在调控泥蟹繁殖中的作用。

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Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

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