测量秀丽隐杆线虫的胚胎活力和育雏大小

这种用于确定育雏大小和胚胎活力的协议被许多秀丽隐杆线虫实验室使用。蛮体和胚胎活力的降低可能表明重要发育过程中的缺陷，如肌病、受精和胚胎发生。该技术为秀丽隐杆线虫新手研究人员提供了明确的说明。

它的设置和执行相对简单，并且在处理新的突变菌株时是一个很好的起点。这项技术的最大挑战是胚胎与未受精的胚胎鉴定。在开始这些实验之前，新的研究人员应该练习识别胚胎，卵母细胞和不同的幼虫阶段。

首先，标记板的背面，将单个L4阶段雌雄同体向下转移到板上。确保没有胚胎或其他蠕虫转移到平板上。让蠕虫发育成虫并在20摄氏度的标准培养温度下产下24小时。

在第三天对盘子进行评分。第二天，标记一组新板，并将当天的单个蠕虫转移到新板上。让蠕虫在 24 摄氏度下产下胚胎 20 小时。

在第四天对盘子进行评分。在第三天，标记一组新板，并将第二天的蠕虫转移到新板上。让蠕虫在 24 度下产下后代 20 小时。

在第五天对盘子进行评分。使用精细记号笔在 35 毫米的盖子上绘制网格图案。将网格盖放在测试板下方进行计数，以跟踪先前计数的蠕虫。

使用差异细胞计数器，在单个正方形内计数活幼虫和未孵化的胚胎。对于方形边框上的蠕虫，根据蠕虫头的位置进行计数。计算头部接触正方形顶部和左侧边缘的蠕虫。

在实验室笔记本中记录活幼虫和未孵化胚胎的数量。在第四天，通过计数活幼虫和未孵化的胚胎来对第二天的板进行评分，并将它们记录在实验室笔记本中。在第五天，通过计数活幼虫和未孵化的胚胎来对第三天的板进行评分，并将它们记录在实验室笔记本中。

标记板背面后，将单个L4雌雄同体蠕虫转移到板上。确保没有胚胎或其他蠕虫转移到平板上。将单个L4雄虫转移到含有L四雌雄同体的平板上。

让蠕虫交配并在 20 摄氏度下产下后代 24 小时。在第三天对活幼虫与未孵化胚胎的平板进行评分。第二天，标记一组新板，并将雌雄同体和雄性转移到新板上。

确保雌雄同体已成年。让雌雄同体在 24 摄氏度下产下后代 20 小时。在第四天对活幼虫与未孵化胚胎的平板进行评分。

在第三天，标记一组新板，并将雌雄同体和雄性转移到新板上。让蠕虫在 24 度下产下后代 20 小时。在第五天对活胚胎与未孵化胚胎的平板进行评分。

使用差异细胞计数器，从第一天开始计数活幼虫和未孵化的胚胎，并将它们记录在实验室笔记本中。在第四天，从第二天的平板中计数活的后代和未孵化的胚胎，并将它们记录在实验室笔记本中。检查男性的第一天盘子。

如果已经交配，雌雄同体与雄性的预期遗传比例为50至50。如果第一天的盘子没有任何雄性，则雄性和雌雄同体之间不会发生交配。丢弃这对交配对，并将观察结果记录在实验室笔记本中。

在第五天，从第三天平板中计数活幼虫和未孵化的胚胎，并将它们记录在实验室笔记本中。N2的胚胎活力测定产生98.9%的存活率，而him-5（e1490）和spo-11（ok79）的胚胎活力分别降低74.9%和0.8%。N2、him-5（e1490）和spo-11（ok79）的平均育雏大小分别为217、105和219。

识别秀丽隐杆线虫发育的各个阶段对于准确和可重复的数据非常重要。我们建议使用图片和解剖显微镜熟悉蠕虫的发展。该程序是确定基因是否参与发育过程的重要第一步，随后可以通过细胞学分析来确定哪个过程被破坏。