Name: 使用小鸡胚胎大脑作为人类胶质母细胞瘤细胞行为的 体内 和 离体 分析模型 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 53 s
Description: 了解利用小鸡胚胎大脑作为胶质母细胞瘤研究的体内和离体模型，通过实时延时成像观察L1CAM表达如何促进肿瘤细胞侵袭和沿血管迁移的行为。该模型为缺乏啮齿类资源的实验室提供了可及的研究平台。

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本工作部分由美国国家癌症研究所向 D.S.G. 提供的资助（R03CA227312）以及 Lisa Dean Moseley 基金会的慷慨资助支持。活体胶质母细胞瘤样本经患者知情同意后，通过 Helen F. Graham 癌症中心与研究所的组织获取中心获得。对 A.R. 的资助由美国国立卫生研究院国家研究资源中心和国家转化科学促进中心提供（UL1TR003107）。N.P.、A.L.、Z.W. 和 K.S. 的暑期本科生研究奖学金由特拉华大学本科生研究项目提供。

Using Chick Embryo Brain as a Model to Study Human Glioblastoma Cell Behavior

<ol><li>Cretu, A., Fotos, J. S., Little, B. W., Galileo, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+and+rat+glioma+growth%2C+invasion%2C+and+vascularization+in+a+novel+chick+embryo+brain+tumor+model%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Human and rat glioma growth, invasion, and vascularization in a novel chick embryo brain tumor model.</a> Clinical & Experimental Metastasis. 22 (3), 225-236 (2005).</li>
<li>Yang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((L1+stimulation+of+human+glioma+cell+motility+correlates+with+FAK+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuro-Oncology%22%5BJournal%5D)">L1 stimulation of human glioma cell motility correlates with FAK activation.</a> Journal of Neuro-Oncology. 105 (1), 27-44 (2011).</li>
<li>Mohanan, V., Temburni, M. K., Kappes, J. C., Galileo, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((L1CAM+stimulates+glioma+cell+motility+and+proliferation+through+the+fibroblast+growth+factor+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">L1CAM stimulates glioma cell motility and proliferation through the fibroblast growth factor receptor.</a> Clinical & Experimental Metastasis. 30 (4), 507-520 (2013).</li>
<li>Anderson, H. J., Galileo, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small-molecule+inhibitors+of+FGFR%2C+integrins+and+FAK+selectively+decrease+L1CAM-stimulated+glioblastoma+cell+motility+and+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Oncology%22%5BJournal%5D)">Small-molecule inhibitors of FGFR, integrins and FAK selectively decrease L1CAM-stimulated glioblastoma cell motility and proliferation.</a> Cellular Oncology. 39 (3), 229-242 (2016).</li>
<li>Pace, K. R., Dutt, R., Galileo, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosomal+L1CAM+stimulates+glioblastoma+cell+motility%2C+proliferation%2C+and+invasiveness%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Exosomal L1CAM stimulates glioblastoma cell motility, proliferation, and invasiveness.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20 (16), 3982(2019).</li>
<li>Stoppini, L., Buchs, P. A., Muller, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+organotypic+cultures+of+nervous+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">A simple method for organotypic cultures of nervous tissue.</a> Journal of Neuroscience Methods. 37 (2), 173-182 (1991).</li>
<li>Ohnishi, T., Matsumura, H., Izumoto, S., Hiraga, S., Hayakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+model+of+glioma+cell+invasion+using+organotypic+brain+slice+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">A novel model of glioma cell invasion using organotypic brain slice culture.</a> Cancer Research. 58 (14), 2935-2940 (1998).</li>
<li>Humpel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+brain+slice+cultures%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Organotypic brain slice cultures: A review.</a> Neuroscience. 305, 86-98 (2015).</li>
<li>Aaberg-Jessen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasion+of+primary+glioma-+and+cell+line-derived+spheroids+implanted+into+corticostriatal+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Clinical+and+Experimental+Pathology%22%5BJournal%5D)">Invasion of primary glioma- and cell line-derived spheroids implanted into corticostriatal slice cultures.</a> International Journal of Clinical and Experimental Pathology. 6 (4), 546-560 (2013).</li>
<li>Matsumura, H., Ohnishi, T., Kanemura, Y., Maruno, M., Yoshimine, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+glioma+cell+invasion+by+confocal+laser+scanning+microscopy+in+a+novel+brain+slice+model%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of glioma cell invasion by confocal laser scanning microscopy in a novel brain slice model.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 269 (2), 513-520 (2000).</li>
<li>Ren, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasion+and+anti-invasion+research+of+glioma+cells+in+an+improved+model+of+organotypic+brain+slice+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Tumori%22%5BJournal%5D)">Invasion and anti-invasion research of glioma cells in an improved model of organotypic brain slice culture.</a> Tumori. 101 (4), 390-397 (2015).</li>
<li>Fayzullin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-lapse+phenotyping+of+invasive+glioma+cells+ex+vivo+reveals+subtype-specific+movement+patterns+guided+by+tumor+core+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Time-lapse phenotyping of invasive glioma cells ex vivo reveals subtype-specific movement patterns guided by tumor core signaling.</a> Experimental Cell Research. 349 (2), 199-213 (2016).</li>
<li>Jensen, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+characterization+of+a+tumor+stem+cell-based+glioblastoma+invasion+model%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Establishment and characterization of a tumor stem cell-based glioblastoma invasion model.</a> PloS One. 11 (7), e0158746(2016).</li>
<li>Marques-Torrejon, M. A., Gangoso, E., Pollard, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+glioblastoma+tumour-host+cell+interactions+using+adult+brain+organotypic+slice+co-culture%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Modelling glioblastoma tumour-host cell interactions using adult brain organotypic slice co-culture.</a> Disease Models & Mechanisms. 11 (2), 031435(2018).</li>
<li>Tamura, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+spatiotemporal+dynamics+of+human+glioma+stem+cell+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Brain%22%5BJournal%5D)">Visualization of spatiotemporal dynamics of human glioma stem cell invasion.</a> Molecular Brain. 12 (1), 45(2019).</li>
<li>Yang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+slice+culture+based+on+in+ovo+electroporation+for+chicken+embryonic+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+and+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Organotypic slice culture based on in ovo electroporation for chicken embryonic central nervous system.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 23 (3), 1813-1826 (2019).</li>
<li>Murrell, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+of+multipotent+stem+cells+from+the+adult+human+brain%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Expansion of multipotent stem cells from the adult human brain.</a> PloS One. 8 (8), e71334(2013).</li>
<li>Fotos, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+time-lapse+microscopy+and+high-resolution+tracking+of+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotechnology%22%5BJournal%5D)">Automated time-lapse microscopy and high-resolution tracking of cell migration.</a> Cytotechnology. 51 (1), 7-19 (2006).</li>
<li>Tufan, A. C., Akdogan, I., Adiguzel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shell-less+culture+of+the+chick+embryo+as+a+model+system+in+the+study+of+developmental+neurobiology%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroanatomy%22%5BJournal%5D)">Shell-less culture of the chick embryo as a model system in the study of developmental neurobiology.</a> Neuroanatomy. 3 (1), 8-11 (2004).</li>
<li>Shoin, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chick+embryo+assay+as+chemosensitivity+test+for+malignant+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Japanese+Journal+of+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Chick embryo assay as chemosensitivity test for malignant glioma.</a> Japanese Journal of Cancer Research. 82 (10), 1165-1170 (1991).</li>
<li>Hagedorn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accessing+key+steps+of+human+tumor+progression+in+vivo+by+using+an+avian+embryo+model%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Accessing key steps of human tumor progression in vivo by using an avian embryo model.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 102 (5), 1643-1648 (2005).</li>
<li>Balciūniene, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histology+of+human+glioblastoma+transplanted+on+chicken+chorioallantoic+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Medicina%22%5BJournal%5D)">Histology of human glioblastoma transplanted on chicken chorioallantoic membrane.</a> Medicina. 45 (2), 123-131 (2009).</li>
<li>De Magalhães, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+a+new+In+vivo+tumor+spheroid+based+shell-less+chorioallantoic+membrane+3-D+model+in+bioengineering+research%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Science+and+Engineering%22%5BJournal%5D)">Applications of a new In vivo tumor spheroid based shell-less chorioallantoic membrane 3-D model in bioengineering research.</a> Journal of Biomedical Science and Engineering. 3 (1), 20-26 (2010).</li>
<li>Szmidt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphology+of+human+glioblastoma+model+cultured+in+ovo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Morphology of human glioblastoma model cultured in ovo.</a> Journal of Veterinary Research. 56 (2), 261-266 (2012).</li>
<li>Jaworski, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+tumor+morphology+and+structure+from+U87+and+U118+glioma+cells+cultured+on+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Comparison of tumor morphology and structure from U87 and U118 glioma cells cultured on chicken embryo chorioallantoic membrane.</a> Journal of Veterinary Research. 57 (4), 593-598 (2013).</li>
<li>Yuan, Y. J., Xu, K., Wu, W., Luo, Q., Yu, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+the+chick+embryo+chorioallantoic+membrane+in+neurosurgery+disease%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Medical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Application of the chick embryo chorioallantoic membrane in neurosurgery disease.</a> International Journal of Medical Sciences. 11 (12), 1275-1281 (2014).</li>
<li>Urbańska, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+silver+nanoparticles+%28AgNPs%29+on+proliferation+and+apoptosis+of+in+ovo+cultured+glioblastoma+multiforme+%28GBM%29+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale+Research+Letters%22%5BJournal%5D)">The effect of silver nanoparticles (AgNPs) on proliferation and apoptosis of in ovo cultured glioblastoma multiforme (GBM) cells.</a> Nanoscale Research Letters. 10, 98(2015).</li>
<li>DeBord, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chick+chorioallantoic+membrane+%28CAM%29+as+a+versatile+patient-derived+xenograft+%28PDX%29+platform+for+precision+medicine+and+preclinical+research%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">The chick chorioallantoic membrane (CAM) as a versatile patient-derived xenograft (PDX) platform for precision medicine and preclinical research.</a> American Journal of Cancer Research. 8 (8), 1642-1660 (2018).</li>
<li>Han, J. M., Jung, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+anticancer+effect+of+a+combination+of+berbamine+and+arcyriaflavin+A+against+glioblastoma+stem-like+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Synergistic anticancer effect of a combination of berbamine and arcyriaflavin A against glioblastoma stem-like cells.</a> Molecules. 27 (22), 7968(2022).</li>
<li>Ruiz-Ontañon, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+plasticity+confers+migratory+and+invasive+advantages+to+a+population+of+glioblastoma-initiating+cells+that+infiltrate+peritumoral+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Cellular plasticity confers migratory and invasive advantages to a population of glioblastoma-initiating cells that infiltrate peritumoral tissue.</a> Stem Cells. 31 (6), 1075-1085 (2013).</li>
<li>Cage, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+patterns+of+human+medulloblastoma+dissemination+in+the+developing+chick+embryo+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Distinct patterns of human medulloblastoma dissemination in the developing chick embryo nervous system.</a> Clinical & Experimental Metastasis. 29 (4), 371-380 (2012).</li>
<li>Darrigues, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biobanked+glioblastoma+patient-derived+organoids+as+a+precision+medicine+model+to+study+inhibition+of+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Biobanked glioblastoma patient-derived organoids as a precision medicine model to study inhibition of invasion.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (19), 10720(2021).</li>
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所有作者均无利益冲突。

向中脑（视顶盖）脑室注射细胞的实验方案中，关键步骤包括：在注射前和注射过程中，避免损伤卵内或胚胎周围的绒毛尿囊膜上的血管；尽管如此，在向中脑注射细胞时，可轻轻牵拉并固定紧贴胚胎的羊膜以调整头部位置。羊膜相对坚韧，可用精细镊子牵拉，并用一只手固定头部使其保持稳定，以便另一只手将细胞注射至视顶盖——即位于大脑中央的大型圆形结构。通常情况下，注射后胚胎的存活率在25%至75%之间，具体取决于尚不明确的因素；而几乎所有存活的胚胎均会在视顶盖中至少形成一个小肿瘤。制备可存活脑切片的关键步骤包括：吸去组织表面多余的液体，以确保在切片过程中琼脂糖能够牢固黏附脑组织，并在将组织放置到膜插件之前始终保持组织和切片处于低温状态。由于不同细胞类型形成球状体的速度和大小各不相同，因此应在聚HEMA板上接种的细胞密度以及收获球状体前的培养时间方面，针对每种细胞类型进行优化。
本文中的研究尚未经过正式的脑片存活性纵向研究。Yang 等人使用了与本研究类似的鸡胚脑片培养体系，并证明脑片至少在7天内保持良好的存活性16。先前的研究表明，当视顶盖（OT）组织被置于次优培养基中时，组织中会出现大量固缩核，而本研究中的脑片未出现此现象。此外，当脑片在次优条件下发生退化时，血管会断裂并呈现为成排的层粘连蛋白阳性球状结构（未展示）。因此，尽管本研究未通过膜片钳电生理记录或活化型caspase-3表达等方法检测细胞活性，但在次优培养条件下所观察到的各类细胞死亡指标在本研究中均未出现。
OT 一直受到关注 体内 脑肿瘤实验通常选择该区域，因为其脑室最大且最易于注射。在胚胎发育第5天（E5），胚胎体积仍足够小，可稳定停留在卵黄表面进行操作，此时所有脑区仅由一层薄薄的室管膜区构成，因此注射必须进入脑室。尽管如此，此类注射仍能成功形成包埋性肿瘤，且肿瘤细胞可侵袭脑实质。有时可在端脑或小脑中发现所形成的肿瘤，但这种情况并不常见。 离体 E15视顶盖切片在此主要用于实验，以便 离体 共培养结果可与 体内 注射实验。然而，前脑切片同样适用，且表面积更大，脑室较视顶盖更薄，这可能使前脑更适用于 离体 未与之相关联的共培养 体内 注射
已在此证明 体内 注射后进行组织固定，利用振动切片机制备组织切片，并对层粘连蛋白及其他标记物进行免疫染色，从而获得了脑组织中靠近血管的胶质母细胞瘤细胞（GBM细胞）和胶质瘤干细胞（GSCs）的高分辨率图像。通过共聚焦显微镜的z轴层扫图像，依据共聚焦软件及制造商的操作说明生成三维体积重建图像，显著提高了对肿瘤细胞与血管之间相互关系的分析能力。利用宽场荧光显微镜对表达GFP、mCherry及DiD标记的细胞进行活细胞延时成像具有可行性；然而，靠近高荧光强度类球体的迁移细胞有时会被其荧光信号遮蔽 &#34;发光&#34; 从类球体产生的非特异性背景荧光可通过仔细调整宽场成像的曝光时间在一定程度上减轻。使用共聚焦z轴层扫进行随时间推移的延时成像（4D）可完全消除类球体的离焦光晕，获得背景清晰黑暗、迁移细胞轮廓分明的高质量图像。尽管该方法未在原实验方案中描述，但其操作方式与宽场延时成像类似，均在脑切片置于6孔塑料板中的透明膜插件上进行。虽然共聚焦延时成像能够显著提高单个细胞及其行为的图像清晰度，但一项多点延时实验（在20小时期间，每隔10分钟采集每个位点包含10个z平面的z轴层扫数据）会对扫描头的检流计造成较大负担。鉴于此类使用可能显著缩短检流计的使用寿命，该方法需谨慎使用。
尽管鸡胚系统非常适用于两者 体内 注射和 离体 研究胶质母细胞瘤细胞行为的共培养实验中，该模型系统存在若干局限性。与所有异种移植系统一样，人类细胞被植入的环境并非人类大脑，但胶质母细胞瘤细胞的行为似乎与啮齿类动物模型及人类患者中的表现相似。在完成相关操作后 体内 在E5期进行注射实验时，通常允许肿瘤形成10天，至E15期结束。这段时间显然不足以研究肿瘤发生和细胞侵袭的全部过程。然而，本文已证明，在相对较短的时间内，脑实质中可形成实体瘤，肿瘤细胞在瘤体内相互作用并重新排列，且沿血管及弥散性地发生显著的脑组织侵袭。另一项局限性在于 体内 鸡胚系统不适合进行药物或其他处理，原因在于鸡胚发育过程中存在较大的卵黄以及功能性胚外循环系统。局部液体药物处理会导致药物扩散至体积大得多的卵黄部分，从而使得脑组织中的药物浓度高度可变且无法确定。同样，将药物通过静脉注射进入极为脆弱的胚外循环系统时，药物会从血管中渗漏或扩散出去，同样导致脑内药物浓度不可控。这也是该系统的主要局限性之一。 离体 采用脑片培养方法，以便不仅能够观察和追踪细胞行为 通过 延时显微镜，以及在培养皿中成功改变胶质母细胞瘤细胞行为的处理方法4 可以在更相关的脑组织环境中进行测试。
鸡胚原位脑肿瘤模型系统的建立被视为对现有胶质母细胞瘤（GBM）肿瘤形成及侵袭性细胞行为研究体系和工具的重要补充。受精鸡卵在大多数地区都容易获得，且相比啮齿类动物成本低廉，无需动物饲养费用，胚胎具有很强的抗感染能力和韧性（即大部分操作可在实验台上进行），胚胎易于操作并可进行无壳培养19，此外，根据美国国立卫生研究院（NIH）指南，鸡胚不被视为脊椎动物，因此无需经过IACUC审批（具体机构要求可能有所不同）。因此，若研究问题和实验设计在其适用范围之内，该系统所具备的多种优势使其极具吸引力。已有多个研究团队利用鸡胚开展了GBM细胞的相关研究，但这些研究几乎均使用鸡胚的绒毛尿囊膜（CAM）20,21,22,23,24,25,26,27,28,29 或肢芽30，而非脑组织。此外，曾有研究报道在胚胎发育第2天（E2）将髓母细胞瘤植入鸡胚脑内31。毫无疑问，如本文所述，将鸡胚用作原位异种移植模型系统，相较于使用CAM模型，所得结果将更贴近人类GBM肿瘤生物学特性，具有更高的研究意义。
尽管这些研究才刚刚开始充分运用鸡胚脑肿瘤模型系统来研究人类胶质母细胞瘤（GBM）细胞和胶质母细胞瘤干细胞（GSC）的行为，但仍希望其他研究者能够拓展其应用范围，并发现更多潜在用途。可以预见，该系统不仅将揭示调控GBM肿瘤形成及细胞行为的机制，还能实现对特定药物和物质在特定患者细胞上的临床前测试。例如，若提前建立脑切片培养体系，则可将肿瘤细胞、手术切除的肿瘤组织碎片或患者来源的GBM类器官32直接置于体外（ex vivo）共培养体系中，并在数天内评估不同治疗方案的效果。同样，也可将解离的患者来源细胞直接注射到E5期鸡胚中脑组织中（in ovo），以评估其成瘤能力及对脑实质的侵袭性。因此，期望本文对方法及代表性结果的描述能够促进并鼓励更广泛地使用这一尚未被充分利用的系统，以推动脑癌研究的发展。

体外研究常用于解析在更复杂的肿瘤形成和细胞侵袭行为中可能发挥作用的潜在机制，这些行为可在体内异种移植模型中观察到。例如，在胶质母细胞瘤（GBM）研究中，体外实验已揭示了L1CAM在新型鸡胚异种移植脑肿瘤模型中参与肿瘤形成和脑组织侵袭的潜在作用机制1,2,3,4,5。尽管体外与体内实验在研究中可相互补充，但两者之间仍存在显著的关联空白。例如，对培养皿中GBM细胞运动性的机制分析是一种高度人工化的环境，而体内异种移植模型仅能提供肿瘤形成及细胞行为的静态时间点或终点分析结果。体内研究无论是使用啮齿类动物还是鸡胚，均难以在细胞侵入脑组织的过程中实时监测其行为。然而，鸡胚异种移植模型已证实，黏附蛋白L1CAM在人源T98G GBM细胞的侵袭能力中发挥促进作用2,5。
通过使用一种称为ex vivo模型的脑组织切片培养系统，将in vivo和in vitro方法结合起来，是解决这一问题的合适方案。在这种ex vivo模型中，活体脑组织可维持数百微米的厚度，持续数周时间，从而可以植入癌细胞，观察其在真实组织中的行为变化，并在实验终点进行更详细的标志物分析。
一种常用的器官型脑片培养方法是将数百微米厚的脑片置于半透明或透明的多孔膜上，使组织暴露于空气中，同时允许培养基从膜下方为组织提供营养（参见 Stoppini 等人6）。该方法已发展出多种变体，用于不同的研究，包括使用不同的培养基或不同类型的膜插件。不同的膜插件包括直径为 30 mm、孔径为 0.4 µm 的多孔膜插件置于 35 mm 培养皿中6，以及用于 6 孔板的细胞培养插件（孔径 0.4 µm）7。不同的培养基包括 50% MEM/HEPES + 25% 热灭活马血清 + 25% Hank's 平衡盐溶液（HBSS）8、50% 低血清培养基 + 25% 马血清 + 25% HBSS9，以及其他配方。若使用半透明或透明膜，并结合荧光标记的 GBM 细胞，则可通过倒置的宽场或共聚焦荧光显微镜从下方对这类培养物进行成像10,11,12,13,14,15。
尽管如上文所述，已有多种利用啮齿类动物建立的体内原位脑肿瘤异种移植模型以及离体脑组织切片培养模型，鸡胚（Gallus gallus）在这些研究中的应用却相对不足。然而，已有研究表明，鸡胚可作为研究人源和大鼠胶质瘤侵袭的体内原位异种移植模型1,2,5。移植至鸡胚脑内的细胞表现出与啮齿类模型中相似的侵袭模式，进一步支持将鸡胚用作体内胶质母细胞瘤（GBM）肿瘤细胞分析的模型。此外，鸡胚成本低廉，比啮齿类动物更易于维持（例如，在实验室培养箱中的蛋壳内即可孵化），且操作更为简便，因此成为短期体内GBM研究的理想选择。最近一项研究报道了利用鸡胚脑切片培养系统研究正常脑发育过程中轴突形成与生长的情况，其中脑切片在体外至少可维持7天的活性16。然而，目前尚缺乏将此类鸡胚脑切片培养系统用于离体环境下GBM细胞行为分析的研究。本文描述了将人源GBM细胞及GBM干细胞（GSCs）移植至早期鸡胚脑内进行体内研究，以及将GBM细胞接种于活体鸡胚脑切片培养系统中进行离体研究的方法，并提供了这些实验体系所获得的代表性肿瘤形态和细胞侵袭模式的示例。

<table><tbody><tr><td>1 cm x 1 cm 方形孔打孔器</td><td>Birabira</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>1 mm 活检打孔笔</td><td>Robbins Instruments</td><td>20335</td><td></td></tr><tr><td>6 孔插件板（Corning Transwell）</td><td>Millipore Sigma</td><td>CLS3450</td><td></td></tr><tr><td>9&quot; 一次性巴斯德吸管</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-20C</td><td></td></tr><tr><td>15 mL 离心管</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-539-12</td><td></td></tr><tr><td>24 孔板</td><td>Corning Costar</td><td>3526</td><td></td></tr><tr><td>50 mL 离心管</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-539-9</td><td></td></tr><tr><td>琼脂</td><td>Fisher BioReagents</td><td>BP1423-500</td><td>用于包埋固定脑组织</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 标记的羊抗小鼠 IgG</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>115-605-146</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 标记的羊抗小鼠 IgG</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>115-545-146</td><td></td></tr><tr><td>铝箔</td><td>ReynoldsWrap</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>氨苄青霉素</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A-9518</td><td></td></tr><tr><td>抗整合素 α-6 单克隆抗体 GOH3</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-19622</td><td></td></tr><tr><td>抗 L1CAM 单克隆抗体 UJ127</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-53386</td><td></td></tr><tr><td>抗层粘连蛋白单克隆抗体</td><td>Developmental Studies Hybridoma Bank</td><td>3H11</td><td></td></tr><tr><td>抗巢蛋白单克隆抗体 10c2</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-23927</td><td></td></tr><tr><td>抗 Sox2 单克隆抗体 E-4</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-365823</td><td></td></tr><tr><td>不含维生素 A 的 B27 添加剂</td><td>GIBCO</td><td>17504-044</td><td></td></tr><tr><td>双苯并咪唑（Hoechst 33258）</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B2883</td><td>核染色剂</td></tr><tr><td>细胞培养箱</td><td>Forma</td><td></td><td>标准加湿 CO&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; 培养箱</td></tr><tr><td>离心机</td><td>Beckman Coulter</td><td></td><td></td></tr><tr><td>共聚焦显微镜</td><td>Nikon Instruments</td><td>C2si+</td><td>配备自制细胞培养室</td></tr><tr><td>共聚焦显微镜物镜</td><td>Nikon Instruments</td><td></td><td>Plan Apo 物镜，共聚焦延时成像除外，使用 S Plan Fluor ELWD 20x 0.45 NA 物镜</td></tr><tr><td>共聚焦显微镜软件</td><td>Nikon Instruments</td><td>NIS Elements</td><td>版本 5.2</td></tr><tr><td>弯头镊子</td><td>World Precision Instruments</td><td>504478</td><td></td></tr><tr><td>弯头剪刀</td><td>Fine Science Tools</td><td></td><td></td></tr><tr><td>弯头刮勺</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-375-20</td><td></td></tr><tr><td>氰基丙烯酸酯胶水</td><td>Krazy Glue</td><td>KG-585 12R</td><td></td></tr><tr><td>D-葡萄糖</td><td>Millipore Sigma</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>DiD 远红荧光染料</td><td>Invitrogen</td><td>V22887</td><td>Vybrant DiD</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D5671</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D8437</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D4540</td><td></td></tr><tr><td>杜氏磷酸盐缓冲液（PBS）</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P5493-1L</td><td></td></tr><tr><td>孵蛋器</td><td>Humidaire</td><td></td><td></td></tr><tr><td>电工胶带（10 mil 厚 / 254 &amp;micro;m）</td><td>Scotch</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>200 证明乙醇</td><td>Decon Laboratories</td><td>2701</td><td></td></tr><tr><td>快绿 FCF 染料</td><td>Avocado Research Chemicals</td><td>16520</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Gemini Bio-products</td><td>900-108</td><td></td></tr><tr><td>滤纸</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>纱布</td><td>Dynarex</td><td>3353</td><td></td></tr><tr><td>显微注射用玻璃毛细管</td><td>World Precision Instruments</td><td>TW100-4</td><td></td></tr><tr><td>甘油</td><td>Fisher BioReagents</td><td>BP228-1</td><td>用于封片介质</td></tr><tr><td>GSCs（人胶质母细胞瘤干细胞）</td><td>不适用</td><td></td><td>从 Galileo 实验室患者 GBM 标本中分离，于 GSC 培养基中培养，并用编码 GFP 的慢病毒载体转导。&amp;nbsp; 使用的细胞代数为第 10 至 30 代。</td></tr><tr><td>Hanks 平衡盐溶液（HBSS）</td><td>Corning</td><td>21-020-CV</td><td></td></tr><tr><td>血细胞计数板</td><td>Hausser Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>肝素</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2524-100</td><td></td></tr><tr><td>HEPES 缓冲液</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H0887</td><td></td></tr><tr><td>马血清（HI）</td><td>Gibco</td><td>26050-088</td><td></td></tr><tr><td>人 FGF-2</td><td>BioVision</td><td>4037-1000</td><td></td></tr><tr><td>人 TGF-&amp;alpha;</td><td>BioVision</td><td>4339-1000</td><td></td></tr><tr><td>倒置相差显微镜</td><td>Nikon Instruments</td><td>TMS</td><td>用于常规观察培养细胞</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP366</td><td></td></tr><tr><td>KH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;PO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td>Fisher Scientific</td><td>P284</td><td></td></tr><tr><td>实验室封口膜</td><td>Parafilm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Labquake 摇床</td><td>LabIndustries</td><td>T400-110</td><td></td></tr><tr><td>L-谷氨酰胺:青霉素:链霉素</td><td>Gemini Bio-products</td><td>400-110</td><td></td></tr><tr><td>低熔点琼脂糖</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1360</td><td>用于包埋活体脑组织</td></tr><tr><td>基质胶</td><td>Corning Matrigel</td><td>354234</td><td></td></tr><tr><td>Medium 199</td><td>GIBCO</td><td>11150-059</td><td></td></tr><tr><td>MEM</td><td>Corning</td><td>10-010-CV</td><td></td></tr><tr><td>金属振动切片机块</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>微量移液器吸头（20、200、1,000 &amp;micro;L）</td><td>Fisherbrand</td><td></td><td></td></tr><tr><td>微量移液器（20、200、1,000 &amp;micro;L）</td><td>Gilson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>显微镜盖玻片（1.5 号厚度）</td><td>Fisherbrand</td><td>12544A</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>S271</td><td></td></tr><tr><td>NaH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;PO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt; + H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td><td>Fisher Scientific</td><td>S369</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt;</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP328</td><td></td></tr><tr><td>正常山羊血清</td><td>Millipore Sigma</td><td>526-M</td><td></td></tr><tr><td>N-丙基没食子酸酯</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P3130</td><td>用于封片介质</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Parafilm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>多聚甲醛</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P5493-1L</td><td></td></tr><tr><td>铅笔</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>普通显微镜载玻片</td><td>Fisherbrand</td><td>12-550-A3</td><td></td></tr><tr><td>塑料 35 mm 培养皿</td><td>Becton Dickinson</td><td>351008</td><td></td></tr><tr><td>气动皮升泵</td><td>World Precision Instruments</td><td>PV830</td><td></td></tr><tr><td>聚（2-羟乙基甲基丙烯酸酯）&amp;nbsp;（poly-HEMA）</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P-3932</td><td></td></tr><tr><td>双刃剃须刀片</td><td>PACE</td><td></td><td>用于切割固定脑切片</td></tr><tr><td>蓝宝石刀</td><td>Delaware Diamond Knives</td><td></td><td>用于切割活体脑切片</td></tr><tr><td>手术刀</td><td>TruMed</td><td>1001</td><td></td></tr><tr><td>0.2 M pH 7.4 氰基乙酸钠缓冲液</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>11652</td><td></td></tr><tr><td>振动切片机样品室</td><td>定制</td><td></td><td></td></tr><tr><td>体视解剖显微镜</td><td>Nikon Instruments</td><td>SMZ1500</td><td>配备落射荧光装置</td></tr><tr><td>直头镊子</td><td>World Precision Instruments</td><td>500233</td><td></td></tr><tr><td>直头剪刀</td><td>Fine Science Tools</td><td></td><td></td></tr><tr><td>蔗糖</td><td>Mallinckrodt</td><td>7723</td><td></td></tr><tr><td>延时荧光显微镜（宽场荧光）</td><td>Nikon Instruments</td><td>TE2000-E</td><td>配备自制细胞培养室（见 Fotos 等，2006）</td></tr><tr><td>组织培养用聚苯乙烯培养皿 100 mm</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>130182</td><td>用于细胞培养</td></tr><tr><td>组织培养用聚苯乙烯培养皿 60 mm</td><td>Becton Dickinson</td><td>353004</td><td>用于细胞培养</td></tr><tr><td>移液管</td><td>American Central Scientific Co.</td><td>FFP011</td><td></td></tr><tr><td>透明胶带</td><td>Scotch</td><td></td><td></td></tr><tr><td>吐温 X-100</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T-8787</td><td></td></tr><tr><td>胰蛋白酶（0.25%）+ 2.21 mM EDTA</td><td>Corning</td><td>25-053-CI</td><td></td></tr><tr><td>U-118 MG 人胶质母细胞瘤细胞系</td><td>ATCC</td><td>HTB-15</td><td>细胞经慢病毒载体转导，该载体编码 L1CAM 黏附蛋白的完整胞外域序列，随后再用编码 mCherry 的慢病毒载体 pUltra-hot 转导。&amp;nbsp; 细胞代数未知。</td></tr><tr><td>真空泵</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-07532-40</td><td>&quot;Air Cadet&quot;</td></tr><tr><td>振动组织切片机</td><td>Vibratome</td><td>3000</td><td>用于切割活体和固定脑切片</td></tr></tbody></table>

利用鸡胚脑作为模型 在体 内 和 离体 人类胶质母细胞瘤细胞行为分析

Using the Chick Embryo Brain as a Model for In Vivo and Ex Vivo Analyses of Human Glioblastoma Cell Behavior

鸡胚一直是研究脊椎动物发育的理想模型系统，尤其适用于实验操作。鸡胚模型的应用已拓展至人类胶质母细胞瘤（GBM）脑肿瘤形成机制的研究。 体内 以及肿瘤细胞向周围脑组织的侵袭性。可通过将荧光标记细胞的悬液注射到E5期中脑（视顶盖）脑室来形成胶质母细胞瘤（GBM）肿瘤 在卵内. 
根据胶质母细胞瘤（GBM）细胞的不同，致密的肿瘤会随机形成于脑室及脑壁内，且细胞群体会侵入脑壁组织。通过对固定后的E15期中脑组织切片（厚度为350 µm）进行免疫染色，并结合共聚焦显微镜z轴层扫图像的三维重建分析，可发现侵袭性细胞常沿血管迁移。E15期的中脑和前脑活体切片（厚度250–350 µm）可在膜插件上进行培养，并将荧光标记的GBM细胞引入特定非随机位置，从而建立ex vivo共培养体系，用于分析细胞侵袭行为——该过程同样可沿血管发生，持续时间约为1周。此类ex vivo共培养体系可通过宽场或共聚焦荧光延时显微镜进行实时监测，以观察活细胞的行为动态。
随后可对共培养的脑片进行固定、免疫染色，并通过共聚焦显微镜分析，以确定肿瘤细胞的侵袭是否沿血管或轴突发生。此外，可通过将不同细胞类型和颜色的细胞团块精确放置在不同位置并观察细胞运动，利用该共培养系统研究潜在的细胞间相互作用。ex vivo 培养可进行药物处理，而此类处理与 in ovo 系统不兼容。这两种互补的方法可在高度可调控的脊椎动物脑环境中，对人胶质母细胞瘤（GBM）细胞的行为及肿瘤形成进行详细而精确的分析。

鸡胚被用于研究人类胶质母细胞瘤（GBM）脑肿瘤 在卵内 以及在 离体 脑片共培养。通过延时显微成像可记录胶质母细胞瘤细胞的行为， 离体 共培养，且两种制备物均可在实验终点通过详细的三维共聚焦分析进行检测。

鸡胚一直是研究脊椎动物发育的理想模型系统，尤其适用于实验操作。鸡胚的利用……

我们的研究范围是尝试揭示促进胶质母细胞瘤细胞在脑组织中扩散的机制。具体问题集中在胶质母细胞瘤细胞类型或状态的差异，以及促进这些细胞高度侵袭性的分子机制。例如，L1CAM的表达如何促进细胞的侵袭性？体外和体内模型均不足以准确分析胶质母细胞瘤细胞的行为。体外模型几乎必然会改变并过度简化细胞在体内的行为；而体内模型则无法在行为发生过程中进行便捷的实时观察，仅能在行为发生后进行分析。我们已证明，鸡胚脑是研究人类脑癌细胞行为的良好模型，无论是在体内还是在离体脑片培养中均适用。我们还发现，胶质母细胞瘤细胞表达L1CAM可对细胞增殖、侵袭以及肿瘤内部的细胞排列产生显著影响。除使用鸡胚的多种优势外，我们的离体球体接种方案能够将细胞无创地引入活体脑片，不会造成额外组织损伤；而其他细胞接种方法通常需要穿刺组织并植入细胞。此外，该方案还支持活体时间序列成像，而这是体内技术所不具备的。我们的研究结果表明，鸡胚是癌症研究，尤其是脑癌研究的良好模型，对于可能缺乏资金、设施或啮齿类动物模型相关专业知识的研究人员而言，该模型更容易获取，因此对科学界具有极大价值。我们将继续聚焦于调控胶质母细胞瘤细胞在脑组织中侵袭能力的分子机制，特别是沿血管分布的侵袭行为。另一个关键问题是胶质母细胞瘤干细胞是一种独特且稳定的表型，还是在需要时可进入的一种功能状态。这个问题对治疗具有重大意义。首先，将受精的鸡卵置于37.5摄氏度、湿度可控的孵卵器中孵育，卵的尖端朝下放置。在孵化的第六天（即E5期），用70%乙醇喷洒蛋壳进行消毒。使用照蛋仪，用铅笔沿胚胎上方气室边缘描记轮廓，并用透明胶带覆盖所标记的区域。用弯头剪刀沿描记线轻轻剪开蛋壳，注意不要剪到胚胎的膜结构或血管。弃去蛋壳的顶部。在气室膜上滴加少量生理盐水或细胞培养基，使其湿润，以便易于分离。使用精细镊子，小心刺破覆盖在胚胎上方的气室膜。移除它。抓住紧贴胚胎的透明羊膜，以固定头部位置，然后使用玻璃微量移液管和气动皮升泵，将约50,000个细胞悬浮于5微升适宜的细胞培养基中，注射至视顶盖。在胚胎上方加入几滴浓度为50毫克/毫升的氨苄青霉素。用透明胶带封住卵壳顶部的开孔，然后将卵放入加湿的孵卵箱中，孵育至E15阶段用于解剖。本图展示了在E5期向视顶盖注射表达绿色荧光蛋白的胶质母细胞瘤细胞或胶质母细胞瘤干细胞（GSCs）后，于体内E15期形成的肿瘤。GSCs 附着于脑室表面，并在脑壁内形成侵袭性肿瘤。本实验使用四种颜色来标记五个特征：绿色的 GSCs、白色的细胞核、白色的血管、蓝色的整合素 6，以及红色的 SOX2 或红色的 Nestin。这些图像显示，GSCs 位于血管中，并似乎沿血管迁移。此处展示了体内GSC肿瘤的三维体积渲染旋转视频，以及固定的免疫染色切片图像。使用验蛋灯，在E14或E15胚胎上方的气室边缘用铅笔描出轮廓，并用透明胶带覆盖所标记的区域。使用弯头剪刀或精细剪刀，沿所描轮廓轻轻剪开。注意不要切到胚胎膜或血管。然后，弃去壳的上半部分。切除鸡胚头部后，将其放入一个含有冷的无菌CMF溶液的10厘米培养皿中。使用无菌精细镊子，剥离覆盖在脑组织表面的皮肤，以暴露下方的硬脑膜。去除脑部左右两侧正在形成的颅骨骨片。这些正在形成的颅骨骨片尚未覆盖大脑的大部分区域。使用精细的尖头镊子轻轻撕开覆盖在脑部中央的脑膜，并将其向两侧剥离以暴露脑组织。用精细的弯头镊子从脑底部前方轻轻托起脑组织，缓慢将其从颅腔中取出。将脑组织解剖为三个主要部分：前脑、中脑（或视顶盖）和小脑。使用精细镊子去除中脑顶盖表面的软脑膜，并将解剖得到的脑区置于冰上的一次性无菌小培养皿中。进行脑组织包埋与切片时，用弯头镊子轻轻夹取视顶盖或前脑区域作为托起工具，随后在无菌纱布上轻微吸除多余液体。通过将铝箔包裹在适当大小的物体周围，制备一个简易模具。此处使用一个小的矩形金属振动组织切片刀块作为样品。用无菌移液管将低熔点琼脂糖填充到模具中。迅速将脑组织区域放入琼脂糖内，并在冰上静置约四到五分钟，使其凝固。使用蓝宝石刀在振动切片机上切割组织切片。用无菌刮勺将切片从切片槽中舀起并取出。用另一把无菌刮勺轻轻将切片从刮勺上滑下，转移至膜插件上。将脑切片六孔板置于细胞培养孵育箱中的膜插件上，37摄氏度、5%二氧化碳条件下培养。接种后的第二天，使用无菌巴斯德吸管或移液器从插件下方吸出培养基，并在膜插件下方的每个孔中加入1毫升新鲜切片培养基。接下来，为了将GBM细胞接种到脑切片上，用设定为5微升的20微升微量移液器从培养皿中取出一个或多个球状体。将含有类球体的培养基轻柔地滴加到目标脑切片上，并让类球体在切片上培养 2 至 5 天。本图展示了离体视顶盖切片在培养一周后的存活情况。对脑切片进行 Hoechst 染色标记细胞核，并通过免疫荧光染色标记层粘连蛋白，共聚焦图像清晰显示了在不同光学切面上形态正常且完整的血管结构。此处显示的是经SOX2转录因子和bisbenzamide（标记总细胞核）染色的脑切片共聚焦Z轴层扫图像的最大投影图。这些结果表明，鸡胚脑切片可在膜插件上培养约两周，仍保持活性，并具有形态正常的血管和转录因子表达。

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JoVE Journal

Neuroscience

神经科学

使用小鸡胚胎大脑作为人类胶质母细胞瘤细胞行为的 体内 和 离体 分析模型

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星形细胞瘤发病机制建模 体外 和 体内 利用条件性基因工程小鼠的皮层星形胶质细胞或神经干细胞

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用于胶质母细胞瘤脉冲电场治疗的柔性有机电子器件

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利用超声波血脑屏障破坏结合锰增强磁共振成像进行功能性神经影像学研究

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在本视频中，我们介绍了一种在活体小鼠背侧脊髓上方植入慢性光学成像窗口的操作流程。将对该成像窗口的结构、手术步骤以及慢性成像过程进行综述并演示。...

一种用于纵向研究的脊髓植入腔室手术操作步骤 体内 小鼠脊髓成像

了解利用小鸡胚胎大脑作为胶质母细胞瘤研究的体内和离体模型，通过实时延时成像观察L1CAM表达如何促进肿瘤细胞侵袭和沿血管迁移的行为。该模型为缺乏啮齿类资源的实验室提供了可及的研究平台。

利用鸡胚脑作为模型在体内和离体人类胶质母细胞瘤细胞行为分析

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