Name: 一种改进的顶空气相色谱-串联四极杆质谱法检测动物源性药物中三甲胺的技术 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-03-10T13:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 19 s
Description: 了解顶空气相色谱-串联四极杆质谱法检测动物源性药物中三甲胺的技术。该方法采用独特的前处理流程与多反应监测模式，可实现三甲胺的准确定量，为动物药质量控制提供可靠分析手段。

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本工作获得了国家自然科学基金（82173991）和四川省科技计划项目（2022YFS0442）的资助。

有关Pheretima、Periplaneta americana和Hirudo药材的信息见表1。这些药材由成都中医药大学徐润春教授鉴定，分别为参环毛蚓（Pheretima aspergillum (E.Perrier)）、美洲大蠊（Periplaneta americana L.）和宽体金线蛭（Whitmania pigra Whitman）的干燥体。
1. 标本提取
<ol>
	<li>使用中药粉碎机（参见材料表）粉碎Pheretima、Periplaneta americana和Hirudo，依次通过2号（筛孔直径：0.8 mm）和4号（筛孔直径：0.25 mm）标准药筛进行过筛，收集两筛之间的粉末，得到所需样品粉末。 
	注：Pheretima粉碎后质地疏松，其粉末无需过筛。</li>
	<li>取1 g粉末（精确至0.001 g）置于50 mL塑料离心管中，加入20 mL 5%三氯乙酸（TCA）溶液（参见材料表），使用高速分散均质机在1,000 rmin-1条件下均质1 min。</li>
	<li>均质后，在室温下以1,717 × g离心5 min，在玻璃漏斗中放入少量脱脂棉，将上清液过滤至50 mL容量瓶中。</li>
	<li>用15 mL和10 mL的5% TCA溶液分别重复上述提取过程两次，合并滤液，并用5% TCA溶液定容至50 mL。</li>
</ol>
2. 试剂准备
<ol>
	<li>配制20%氢氧化钠溶液：称取20 g氢氧化钠，用去离子水定容至100 mL容量瓶中。</li>
	<li>配制5%三氯乙酸（TCA）溶液：称取25 g三氯乙酸（TCA），用去离子水定容至500 mL容量瓶中。</li>
</ol>
3. TMA 标准储备液的配制
<ol>
	<li>配制TMA标准储备液：称取0.0162 g氯化三甲胺标准品，用5%三氯乙酸（TCA）溶液溶解，并定容至100 mL，得到浓度为100 µg/mL的TMA标准储备液。于4 °C保存。</li>
	<li>配制TMA标准使用液：取适量体积的TMA标准储备液，用5% TCA溶液逐级稀释，配制成浓度分别为0.1 µg/mL、0.5 µg/mL、1 µg/mL、2 µg/mL、5 µg/mL和10 µg/mL的TMA标准使用液。</li>
</ol>
4. 样品顶空处理
<ol>
	<li>在20 mL顶空瓶中准确称取2 mL氢氧化钠溶液和0.5 g固体石蜡（熔点：58-60 °C）（参见材料表）。</li>
	<li>将顶空瓶置于70 °C烘箱中加热约30分钟，使固体石蜡完全熔化。</li>
	<li>取出后冷却至室温，使石蜡重新凝固。凝固后的石蜡将密封氢氧化钠。</li>
	<li>取2 mL各样品提取液，加至石蜡层上方，拧紧瓶盖并密封。</li>
	<li>将密封好的顶空瓶放入仪器中（参见材料表）进行测定。</li>
</ol>
5. HS-GC-MS/MS 分析条件的设置
<ol>
	<li>头空条件和气相色谱-质谱条件见表2。</li>
	<li>离子信息见表3。</li>
</ol>
6. 标准曲线绘制
<ol>
	<li>参照步骤 4.1-4.3 中的样品顶空处理方法，制备含有碱液和石蜡密封层的顶空瓶。</li>
	<li>分别吸取 2 mL 浓度为 0.1 µg/mL、0.5 µg/mL、1 µg/mL、2 µg/mL、5 µg/mL 和 10 µg/mL 的三甲胺标准溶液至 20 mL 顶空瓶中，密封瓶盖后上机测定。</li>
</ol>
7. 精密度测试
<ol>
	<li>参照步骤 4.1-4.3 中的样品顶空处理方法，制备含有碱液和石蜡密封层的顶空瓶。</li>
	<li>用移液器吸取 2 mL 浓度为 0.1 µg/mL 的三甲胺（TMA）标准溶液至 20 mL 顶空瓶中，并密封瓶盖。按照仪器制造商的说明进行六次平行测试（见材料表）。</li>
</ol>
8. 回收率实验
<ol>
	<li>取Pheretima、Periplaneta americana和Hirudo（S02、S05、S07；表1）的批次作为回收率实验的代表性药材。</li>
	<li>取若干批次的样品粉末（S02、S05、S07），于50 °C烘箱中烘烤72小时，直至未检出TMA。</li>
	<li>参照第4–6节中的样品制备方法，检测烘烤后药粉中TMA的含量。</li>
	<li>称取1 g烘烤后的粉末（精确至0.001 g），置于50 mL塑料离心管中，加入50 µL TMA标准溶液。 
	注：TMA标准溶液浓度分别为100 μg/mL、1000 μg/mL和10000 μg/mL。</li>
	<li>加入20 mL 5% TCA溶液，在1000 rmin-1条件下均质1分钟。</li>
	<li>均质后，在1717 × g条件下离心5分钟，在玻璃漏斗中放入少量脱脂棉，将上清液过滤至50 mL容量瓶中。</li>
	<li>用15 mL和10 mL的5% TCA溶液分别重复上述提取过程两次，合并滤液，并用5% TCA溶液定容至50 mL。</li>
</ol>
9. 检出限（LOD）与定量限（LOQ）的确定
<ol>
	<li>当信噪比（S/N）= 3 时，根据对应的浓度确定检测限（LOD）。</li>
	<li>当信噪比（S/N）= 10 时，根据对应的浓度确定定量限（LOQ）。</li>
</ol>
10. 样品三甲胺含量的测定
<ol>
	<li>分别取约1 g的Pheretima、Periplaneta americana和Hirudo细粉，按上述方法提取样品，并上机测定。</li>
</ol>

Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace GC-MS

<ol><li>Fan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Material+basis+of+stench+of+animal+medicine%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22China+Journal+of+Chinese+Materia+Medica%22%5BJournal%5D)">Material basis of stench of animal medicine: a review.</a> China Journal of Chinese Materia Medica. 47 (20), 5452-5459 (2022).</li>
<li>Deng, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+on+formation+and+taste-masking+technology+of+stench+of+animal+medicines%5BTitle%5D)+AND+%22China+Journal+of+Chinese+Materia+Medica%22%5BJournal%5D)">Progress on formation and taste-masking technology of stench of animal medicines.</a> China Journal of Chinese Materia Medica. 45 (10), 2353-2359 (2020).</li>
<li>Casaburi, A., Piombino, P., Nychas, G. J., Villani, F., Ercolini, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+populations+and+the+volatilome+associated+to+meat+spoilage%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Bacterial populations and the volatilome associated to meat spoilage.</a> Food Microbiology. 45 (Pt A), 83-102 (2015).</li>
<li>Rouger, A., Tresse, O., Zagorec, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacterial+contaminants+of+poultry+meat%3A+sources%2C+species%2C+and+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Microorganisms%22%5BJournal%5D)">Bacterial contaminants of poultry meat: sources, species, and dynamics.</a> Microorganisms. 5 (3), 50(2017).</li>
<li>Baliño-Zuazo, L., Barranco, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+liquid+chromatography-mass+spectrometric+method+for+the+simultaneous+determination+of+trimethylamine%2C+dimethylamine+and+methylamine+in+fishery+products%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">A novel liquid chromatography-mass spectrometric method for the simultaneous determination of trimethylamine, dimethylamine and methylamine in fishery products.</a> Food Chemistry. 196, 1207-1214 (2016).</li>
<li>Zhao, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultra-efficient+trimethylamine+gas+sensor+based+on+Au+nanoparticles+sensitized+WO3+nanosheets+for+rapid+assessment+of+seafood+freshness%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Ultra-efficient trimethylamine gas sensor based on Au nanoparticles sensitized WO3 nanosheets for rapid assessment of seafood freshness.</a> Food Chemistry. 392, 133318(2022).</li>
<li>Bota, G. M., Harrington, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+detection+of+trimethylamine+in+meat+food+products+using+ion+mobility+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Talanta%22%5BJournal%5D)">Direct detection of trimethylamine in meat food products using ion mobility spectrometry.</a> Talanta. 68 (3), 629-635 (2006).</li>
<li>Neyer, P., Bernasconi, L., Fuchs, J. A., Allenspach, M. D., Steuer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivatization-free+determination+of+short-chain+volatile+amines+in+human+plasma+and+urine+by+headspace+gas+chromatography-mass+spectrometry%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Laboratory+Analysis%22%5BJournal%5D)">Derivatization-free determination of short-chain volatile amines in human plasma and urine by headspace gas chromatography-mass spectrometry.</a> Journal of Clinical Laboratory Analysis. 34 (2), e23062(2020).</li>
<li>Mitsubayashi, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trimethylamine+biosensor+with+flavin-containing+monooxygenase+type+3+%28FMO3%29+for+fish-freshness+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Sensors+%26+Actuators+B%3A+Chemical%22%5BJournal%5D)">Trimethylamine biosensor with flavin-containing monooxygenase type 3 (FMO3) for fish-freshness analysis.</a> Sensors & Actuators B: Chemical. 103 (1-2), 463-467 (2004).</li>
<li>National Health and Family Planning Commission of the People's Republic of China. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22GB+5009.+179-2016%22">GB 5009. 179-2016</a>. , 12(2016).</li>
<li>Liu, X. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Study+on+material+basis+and+processing+principle+of+fishy+smell+of+Pheretima+aspergillum+by+electronic+nose+and+HS-GC-MS%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Journal+of+Experimental+Traditional+Medical+Formulae%22%5BJournal%5D)">Study on material basis and processing principle of fishy smell of Pheretima aspergillum by electronic nose and HS-GC-MS.</a> Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae. 26 (12), 154-161 (2020).</li>
<li>Zheng, X., Sun, F., Du, L., Huang, Y., Zhang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+on+changes+of+volatile+components+in+Gecko+before+and+after+processing+by+HS-SPME-GC-MS%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Journal+of+Experimental+Traditional+Medical+Formulae%22%5BJournal%5D)">Comparison on changes of volatile components in Gecko before and after processing by HS-SPME-GC-MS.</a> Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae. 28 (15), 145-152 (2022).</li>
<li>Yoshiharu, I. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aYoshiharu%2C+I+%22Odor+olfactory+measurement%22">Odor olfactory measurement</a>. , Japan Association on Odor Environment. Tokyo. (2004).</li>
<li>Jia, Z. W., Mao, B. P., Miao, S., Mao, X. H., Ji, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determination+of+sulfur+dioxide+residues+in+sulfur+fumigated+Chinese+herbs+with+headspace+gas+chromatography%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Pharmaceutica+Sinica%22%5BJournal%5D)">Determination of sulfur dioxide residues in sulfur fumigated Chinese herbs with headspace gas chromatography.</a> Acta Pharmaceutica Sinica. 49 (2), 277-281 (2014).</li>
</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

动物源性药物来源于动物的全身、器官或组织、生理或病理产物、排泄物或分泌物，以及动物的加工制品。三甲胺（TMA）是动物源性药物中腥味的重要来源，是一种具有极低嗅觉阈值（0.000032 × 10-6 V/V）和强烈鱼腥味的典型恶臭物质13。目前，常用的顶空-气相色谱-质谱（HS-GC-MS）方法无法对动物源性药物中的TMA进行稳定、准确的检测。
本方案在多个方面进行了改进：（1）三甲胺（TMA）具有更强的极性和碱性。本方案选用专用于挥发性胺类气相色谱分析的色谱柱来检测TMA，确保了TMA检测的准确性和灵敏度。（2）在GB5009.179-2016标准中采用的HC-GC-MS方法的样品制备过程中，需向密封的顶空瓶中注入高浓度氢氧化钠溶液10。此时发生的酸碱反应会导致顶空瓶内压力升高，可能引起TMA逸出，从而导致TMA检测结果不准确。本方案参考了中药中二氧化硫残留的检测方法14，在样品前处理过程中采用固体石蜡作为介质，隔离酸...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/65291">An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry</a>. The Authors section was updated from:
Hui Ye1 
Xuemei Liu1 
Haozhou Huang2 
Lin Huang1 
Yang Bao1 
Hongyan Ma1 
Junzhi Lin3 
Xiaoming Bao4 
Dingkun Zhang1 
Runchun Xu1 
1State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, Pharmacy School, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
2Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
3TCM Regulating Metabolic Diseases Key Laboratory of Sichuan Province, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
4Shimadzu (China) Co., Ltd
to:
Hui Ye1 
Xuemei Liu1 
JiaBao Liao2 
Haozhou Huang3 
Lin Huang1 
Yang Bao1 
Hongyan Ma1 
Junzhi Lin4 
Xiaoming Bao5 
Dingkun Zhang1 
Runchun Xu1 
1State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, Pharmacy School, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
2China Resources Sanjiu Modern Chinese Medicine Pharmaceutical Co., Ltd 
3Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
4TCM Regulating Metabolic Diseases Key Laboratory of Sichuan Province, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine 
5Shimadzu (China) Co., Ltd

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/65291">An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry</a>. The Authors section was updated.

Erratum: An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry

利用动物部位和/或其副产品（本文称为动物源性药物）所制备的产品治疗人类疾病正受到越来越多的关注。动物源性药物在治疗癌症、心血管疾病、肝硬化、乳腺炎及其他疾病方面发挥着重要作用，具有疗效强、剂量小、临床疗效显著且特异性强等优势。然而，动物源性药物通常具有明显的腥味，严重影响患者的依从性，尤其不利于儿童用药1,2。这种腥味主要来源于药物中所含的蛋白质、氨基酸、脂肪等物质，这些成分通过脂肪酸氧化、氨基酸降解等途径分解，产生多种具有腥味的化合物2,3,4。其中，三甲胺（TMA）是一种具有腥味的挥发性气体，广泛存在于腐败或变质的动物源性食品中5。
迄今为止，气相色谱法（GC）、液相色谱法（LC）、离子色谱法、分光光度法、液相色谱-质谱联用法（LC-MS）以及传感器方法常用于检测环境、食品和尿液中的三甲胺（TMA）6,7,8,9。鉴于气相色谱柱和进样系统的污染程度较低，且具有高灵敏度、良好的重现性以及低检测限（0.1–1 mg/kg），顶空气相色谱-质谱联用法（HS-GC-MS）成为食品和生物样品分析的首选方法8。目前，仅有中国建立了食品中TMA的国家标准，而HS-GC-MS是GB5009.179-2016标准中的第一法10。因此，本研究选用上述HS-GC-MS方法检测动物源性药材中的TMA。前期研究中，本课题组发现食品中TMA的HS-GC-MS检测标准可用于检出多种动物源性药材中的腥味。结合已有研究结果11,12，可证明TMA是动物源性药材腥味的共性关键物质。然而，实验发现该方法的重现性较差，存在TMA逸失和稳定性不佳等问题，无法通过方法学验证。这可能是由于将碱液注入顶空瓶后，迅速发生的酸碱反应导致瓶内压力升高，从而使TMA从进样孔逸出，影响了TMA的稳定与准确定量。因此，本研究提出一种改进的顶空气相色谱-串联四极杆质谱法（HS-GC-MS/MS）检测方法，以解决上述问题。
该方案通过利用固体石蜡（一种优良的固-液相变材料）在预处理过程中将酸碱反应物分离开来，从而改进了样品前处理。随着恒温炉温度升高，石蜡逐渐熔化，三甲胺（TMA）也在密封的顶空瓶中缓慢释放，避免了剧烈快速的酸碱反应所引起的压力骤增，确保了TMA检测的稳定性和准确性。此外，顶空进样结合气相色谱-串联质谱（GC-MS/MS）中的多反应监测（MRM）模式，有效抑制了基质带来的化学干扰，保证了检测结果的可靠性。方法学验证结果表明，改进后的检测方法在线性关系、精密度试验和回收率等方面均满足要求，具有良好的重现性和高灵敏度。

<table><tbody><tr><td>离心机</td><td>贝克曼库尔特贸易（中国）有限公司</td><td>SSC-2-0213</td><td></td></tr><tr><td>中药粉碎机</td><td>浙江永康西岸五金制药厂</td><td>HX-200K</td><td></td></tr><tr><td>鼓风干燥箱</td><td>三洋电机株式会社</td><td>MOV-112F</td><td></td></tr><tr><td>20 mm 铝盖脱盖器</td><td>安谱实验科技股份有限公司（上海）</td><td>V1750004</td><td></td></tr><tr><td>电子天平</td><td>岛津企业管理（中国）有限公司</td><td>AUW220D</td><td></td></tr><tr><td>气相色谱-质谱联用仪</td><td>岛津企业管理（中国）有限公司</td><td>TQ-8050 NX</td><td></td></tr><tr><td>顶空瓶</td><td>安谱实验科技股份有限公司（上海）</td><td>25760200</td><td></td></tr><tr><td>匀浆机</td><td>上海标默工厂</td><td>FJ200-SH</td><td></td></tr><tr><td>预组装瓶盖</td><td>安谱实验科技股份有限公司（上海）</td><td>L4150050</td><td></td></tr><tr><td>样品筛</td><td>振兴筛具厂</td><td>/</td><td></td></tr><tr><td>SH-挥发性胺检测仪</td><td>成都美美乐特科技有限公司</td><td>227-3626-01</td><td></td></tr><tr><td>氢氧化钠</td><td>成都 chrono 化学品有限公司</td><td>2022101401</td><td></td></tr><tr><td>固体石蜡</td><td>上海华陵康福仪器厂</td><td>20221112</td><td></td></tr><tr><td>三氯乙酸</td><td>成都 chrono 化学品有限公司</td><td>2022102001</td><td></td></tr><tr><td>盐酸三甲胺</td><td>成都艾法生物科技有限公司</td><td>AF22022108</td><td></td></tr><tr><td>超纯水系统</td><td>四川优普超纯科技有限公司</td><td>UPR-11-5T</td><td></td></tr></tbody></table>

一种利用顶空气相色谱-串联四极杆质谱法检测动物源性药材中三甲胺的改进技术

An Improved Technique for Trimethylamine Detection in Animal-Derived Medicine by Headspace Gas Chromatography-Tandem Quadrupole Mass Spectrometry

动物源性药物具有独特的性质和显著的治疗效果，但大多数此类药物具有明显的腥味，导致临床患者的依从性较差。三甲胺（TMA）是动物源性药物中关键的腥味成分之一。由于加入碱液后酸碱反应迅速，顶空瓶内压力升高，导致TMA逸出，现有检测方法难以准确识别TMA，从而阻碍了动物源性药物腥味研究的进展。本研究提出了一种可控检测方法，通过在酸与碱液之间引入石蜡层作为隔离层，利用恒温炉加热使石蜡层缓慢熔化，从而有效控制TMA的生成速率。该方法具有良好的线性关系、精密度实验结果和回收率，重现性好，灵敏度高，为动物源性药物的脱臭研究提供了技术支撑。

本方案预处理原理及操作的示意图如下所示 图1 和 图2分别为。TMA 的峰时间为 2.3 min，峰形尖锐，且无其他杂质干扰（图3）。测定线性范围为0.1-10 µg/mL TMA标准溶液以TMA浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。线性回归方程为 y = 2522482x + 24255，相关系数（R2) = 0.9998，表明具有良好的线性关系。检出限（LOD）和定量限（LOQ）分别根据信噪比（S/N）为3和10计算得出，其中LOD为0.03 mg/kg，LOQ为0.11 mg/kg。为考察该方法的精密度，测定了TMA的含量（0.1 µg/mL) 进行了六次平行测定，相对标准偏差（RSD）为5.84%，证明该方法具有良好的精密度。一组来自 Pheretima, Periplaneta americana，以及 医蛭属 分别选取S02、S05、S07作为回收率...

本文介绍了一种适用于测定动物源性药材中三甲胺（TMA）的顶空气相色谱-串联三重四极杆质谱法（HS-GC-MS/MS）。该方案包括样品前处理、顶空处理、分析条件、方法学验证以及动物源性药材中三甲胺的测定。

动物源性药物具有独特的特性和显著的疗效，但大多数药物具有明显的腥味，导致……

本研究的范围是动物药中鱼腥味的物质基础及其变化。本方案提供了一种简单的前处理方法，可准确检测动物药中的三甲胺。该方案所用的简单前处理方法及顶空气相色谱-质谱的程序参数仍需进一步优化，我们尚有许多工作需要完成。本方案采用GC-MS的多反应监测模式，结合一种独特的简易前处理方法，这不仅是首次用于三甲胺分析的前处理方法，也是首次应用的分析模式。首先，使用中药粉碎机将药材地龙、美洲大蠊和水蛭进行粉碎。将药粉依次通过二号和四号标准药筛进行过筛，收集两筛之间的粉末，即得所需样品粉末。取一克试样粉末置于50毫升塑料离心管中。加入20毫升5%三氯乙酸溶液，使用高速分散均质器在1,000 RPM条件下均质一分钟。均质后，在室温下以1,717 ×g离心五分钟。将上清液通过浸有吸收性棉花的玻璃漏斗过滤至50毫升容量瓶中。随后，分别用15毫升和10毫升的5%三氯乙酸溶液重复提取两次，合并滤液，并用5%三氯乙酸溶液定容至50毫升。接下来，准确加入2毫升氢氧化钠溶液和0.5克固体石蜡至20毫升顶空瓶中。然后将它们放入70摄氏度的烘箱中加热约30分钟。取出小瓶，使其冷却至室温，使石蜡凝固。为处理样品顶空，向含有凝固石蜡的小瓶中加入2毫升每种样品提取液。按压瓶盖并密封小瓶。将密封好的顶空瓶放入气相色谱-质谱联用仪（GCMS）中进行检测。为获得标准曲线，用移液器吸取一系列2毫升三甲胺标准溶液，加至凝固的石蜡层上方。将密封的顶空瓶放入仪器中进行三甲胺测定。为进行精密度测试，吸取2毫升浓度为0.1微克/毫升的三甲胺标准溶液，加至已凝固的石蜡层上方。按照仪器制造商的说明，在仪器中进行六次平行测定。在回收率实验中，将数批样品粉末放入烘箱中烘烤，直至气相色谱-质谱（GCMS）检测不到三乙胺为止，操作方法如前所述。随后，分别取一克烘烤后且可过筛的粉末加入到多个50毫升塑料离心管中。向所有离心管中加入50微升三甲胺标准溶液，并用5%三氯乙酸溶液进行提取，操作方法如前所述。三甲胺的保留时间为2.3分钟。色谱峰尖锐，且无其他杂质干扰。将Pheretima、Periplaneta americana和Hirudo样品进行加标回收试验，通过干燥以减少药材中的三乙胺，其平均回收率分别为84.49%、94.66%和85.67%。在九批草药中检测到三乙胺，其浓度范围为13.23至271.63毫克每千克。

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科研

JoVE Journal

Chemistry

化学

一种改进的顶空气相色谱-串联四极杆质谱法检测动物源性药物中三甲胺的技术

我们描述了一种基于气相色谱（GC）分析从土壤中提取的葡萄糖胺和胞壁酸的醛糖腈乙酸酯衍生物的方法流程。为了阐明其化学反应机制，我们还提出了一种策略，用于确认该衍生物的结构及其在电子轰击电离过程中产生的离子碎片。...

基于气相色谱法检测经醛糖腈乙酸酯衍生化的葡萄糖胺和胞壁酸以测定土壤中微生物残体

两种用于指定还原性α-和ε-二甲胺核磁共振信号的方法 13C-甲基化 N-末端赖氨酸的描述。一种方法利用还原性甲基化反应的pH诱导选择性，另一种方法使用氨肽酶选择性去除...

用于鉴定还原甲基化蛋白质N端二甲基胺13C标记核磁共振信号的方法

质子转移反应飞行时间质谱法可实现对挥发性有机化合物的高灵敏度、快速且无创的分析。为展示其应用潜力，本文提供三个示例：酸奶的乳酸发酵过程（在线生物过程监测）、不同苹果基因型（大规模筛查）以及饮用咖啡后经鼻腔空间的分析（鼻腔空间分析）。...

PTR-ToF-MS 联用自动采样系统及定制化数据分析在食品研究中的应用：生物过程监测、筛选与鼻腔空间分析

我们提出了一种用于鉴定和定量含有相似蛋白质的物种混合物中各组分的方案。质谱法通过检测肽段实现鉴定，并通过峰面积比值进行相对定量。作为一种用于食品欺诈检测的工具，该方法可检测出牛肉中1%的马肉成分。...

利用肽段的多反应监测质谱法进行混合物中物种鉴定与定量——应用于肉类真实性检测

本方案描述了一种用于定量且全面研究多种营养物质代谢的实验方法。该工作流程结合了同位素示踪实验与分析程序，可确定被消耗营养物质的去向以及微生物合成分子的代谢来源。...

基于同位素示踪实验组合的工作流程以研究微生物对多种营养源的代谢

我们已开发出一种有效的采样与分析气味信号的方法，以探究这些信号在动物交流中的潜在作用。具体而言，我们采用顶空固相微萃取技术结合气相色谱-质谱联用法，对动物气味及嗅觉标记中的挥发性成分进行分析。...

动物气味信号的采样与分析

总汽化固相微萃取（TV-SPME）在将液体样品完全汽化的同时，使分析物吸附到SPME纤维上。这使得分析物仅在溶剂蒸气与SPME纤维涂层之间进行分配。...

气相色谱-质谱联用结合完全汽化固相微萃取作为法医学工具

本文介绍了一种通用的实验方案与设计方法，可用于鉴定藏药中复杂天然产物制剂（基质）中的痕量成分和次要组分。...

采用离子阱质谱与多级碎片分析对藏药中化合物结构进行标准化鉴定

我们介绍了一种将高分辨率质谱分析与分子对接相结合的通用方案，用于中药研究。...

高分辨率串联质谱法用于研究菊三七（Gynura bicolor DC）的化学成分

我们提出了一种基于质谱（MS）/质谱（MS）的快速标注与分类莨菪烷类生物碱的方法，该方法既可用于含莨菪烷样品的初步去重，也可用于发现需分离的新生物碱。...

液相色谱-串联质谱在天然产物研究中的应用：以托烷生物碱为例

本研究建立了一种高效液相色谱串联三重四极杆质谱法（HPLC-QQQ-MS），用于鉴定和定量分析唐古特山莨菪（Anisodus...

一种高效快速的HPLC-QQQ-MS方法用于测定药用植物中托烷类生物碱含量

了解顶空气相色谱-串联四极杆质谱法检测动物源性药物中三甲胺的技术。该方法采用独特的前处理流程与多反应监测模式，可实现三甲胺的准确定量，为动物药质量控制提供可靠分析手段。

一种利用顶空气相色谱-串联四极杆质谱法检测动物源性药材中三甲胺的改进技术

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