新型冷却细胞处理系统对胰岛细胞分离实验室影响的评估

大家好，我是中心P实验室主任Jihad博士。本视频的目的是展示一种经过改进的冷却细胞处理装置，该装置用于小孔分离设施中，且对环境以及细胞回收均无任何影响。首先，将低密度和高密度梯度液以及细胞处理试剂盒在4°C下预冷。

接下来，通过预冷45分钟来准备细胞处理器。将预冷的细胞处理器套件插入细胞处理器中，用于标准乙醇冷却的双层夹套梯度生成器。连接两个玻璃腔室，并将它们放置在磁力搅拌器上。用夹具夹住两个腔室之间的管路。冷却。

在冷却后，将梯度生成器与设定为零摄氏度的乙醇循环冷却器连接。将泵速设为每分钟150毫升，以在袋底部的腔室中加入130毫升高密度梯度液。一旦高密度梯度液进入袋中，关闭两个腔室之间的止血夹。

然后，向前部烧杯中加入130毫升高密度梯度液，向后部烧杯中加入140毫升低密度梯度液。用止血钳夹闭两个腔室之间的连接处，随后设置泵速为50毫升每分钟，以在两个腔室之间形成连续梯度。接下来，准备用于纯化的人类单个核细胞富集液，该细胞来源于血库提供的全血废弃物中收集的多个匿名混合富集液。

分离后，使用设定流速为每分钟25毫升的蠕动泵，将5毫升比重与低密度单个核细胞悬液相似的液体加入含95毫升高密度梯度介质的转移袋中。使用预先校准的无菌热探针，向预形成的梯度液上方小心加入30毫升单个核细胞悬液。使用连接至无菌热探针的数字热电偶，持续监测细胞处理仪内部的温度。

在过程中监测梯度和细胞的温度。梯度加载结束后，将细胞处理器设置为537 G，以尽量减少转子产生的热量。关闭细胞处理器，使液压系统恢复至运行前水平并释放空气。

然后在537 G条件下重新启动细胞处理器，并以每分钟50毫升的流速和4.3摄氏度的温度，加入130毫升高密度梯度液和140毫升低密度梯度液，形成连续密度梯度。接着，在加载密度梯度液上方，以每分钟25毫升的流速和6摄氏度的温度，加载30毫升的血沉棕黄层细胞悬液。细胞加载后，五分钟后向细胞处理器中加入50毫升洗涤液。

以每分钟100毫升的流速和5°C的灌注管温度，将离心后的梯度液分装至12个瓶子中，第一个瓶子加入100毫升洗涤培养基和150毫升细胞，随后将第2至第12个瓶子各加入225毫升洗涤培养基和25毫升细胞。洁净室环境（C级和B级）的空气悬浮粒子检测结果显示，按照洁净室GMP C级、B级以及BSL-3标准，0.5微米和5微米的悬浮粒子数量均未超标。

在前四个步骤中，两种处理器的梯度温度均保持在约 4.5 摄氏度，未观察到显著差异。然而，在离心及收集步骤期间，两种处理器在收集步骤的起始和结束阶段温度均有所上升。此外，冷却式细胞处理器对人类细胞纯化具有影响。

离心后测定效率和细胞活力。收集的细胞温度略有上升，达到8.5摄氏度。主动空气采样和无菌筛查未发现微生物生长。