Establishing Mixed Neuronal and Glial Cell Cultures from Embryonic Mouse Brains to Study Infection and Innate Immunity

Alistair Gamble; Maria Suessmilch; Anniek Bonestroo; Andres Merits; Gerard J. Graham; Jonathan Cavanagh; Julia M. Edgar; Marieke Pingen

doi:10.3791/65331

JoVE Journal
Neuroscience

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JoVE Journal Neuroscience

Establishing Mixed Neuronal and Glial Cell Cultures from Embryonic Mouse Brains to Study Infection and Innate Immunity

从胚胎小鼠大脑中建立混合神经元和神经胶质细胞培养物以研究感染和先天免疫

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June 30, 2023

DOI: 10.3791/65331-v

Alistair Gamble¹, Maria Suessmilch¹, Anniek Bonestroo¹, Andres Merits², Gerard J. Graham¹, Jonathan Cavanagh¹, Julia M. Edgar¹, Marieke Pingen¹

¹School of Infection and Immunity,University of Glasgow, ²Faculty of Science and Technology, Institute of Technology,University of Tartu

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Summary

该协议提供了一种从胚胎第17天小鼠大脑生成中枢神经系统细胞培养物的独特方法，用于神经（免疫）学研究。该模型可以使用各种实验技术进行分析，包括RT-qPCR，显微镜，ELISA和流式细胞术。

Transcript

我的项目的最终研究问题是弄清楚我们如何操纵中枢神经系统的先天免疫反应来防止病毒感染。目前，我们研究它们对深刻抗病毒蛋白干扰素β的反应。实验挑战是产生足够的细胞以进行详细研究。

每个结果都需要使用多种技术进行验证，不幸的是，这可能导致许多动物被扑杀。由于这种新型培养技术产生了大量细胞，因此可以从一只怀孕的小鼠身上研究许多不同的实验条件。此外，在可能的情况下使用体外替代品也可以大大减少动物的痛苦。

该方法减少和改进动物的使用，严格遵循三个R的原理，这种培养方法可用于使用各种读出方法（如ELISA，qPCR，显微镜和流式细胞术）解决许多不同的研究问题。这种技术可以帮助其他研究人员减少和改进他们的动物使用。我们希望提高我们对先天抗病毒反应的理解，调节它以防止机会性病毒，如人类多瘤病毒2或John Cunningham病毒，因为它是众所周知的PML的主要药物，这可能是用于治疗MS和其他疾病的免疫抑制药物的严重副作用。