Name: 育雏硬质珊瑚（Pocillopora acuta）的饲养和迁地培养的有效技术 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-06-23T14:45:00.000+00:00
Duration: 9 min 31 s
Description: 学习育雏硬质珊瑚Pocillopora acuta的迁地培养技术，掌握实验室长期饲养与繁殖管理方法。本研究为珊瑚礁生态修复和气候变化背景下的物种保护提供重要技术支持。

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本研究由中华人民共和国科学技术部（中国台湾）资助，项目编号为MOST 111-2611-M-291-005和MOST 111-2811-M-291-001。

1. 悬挂的珊瑚菌落在&#160;离体 水产养殖池
<ol>
	<li>放置一个带缺口的条形物（长 × 宽 × 高：75 cm × 1 cm × 3 cm），下文简称 &#34;横杆&#34;，横跨培养槽，为悬挂珊瑚群体做准备。 
	注意：本实验中使用的悬挂杆为定制，但只要能够稳定地架设在培养箱顶部，并能牢固支撑珊瑚，使用带有外露螺丝的普通PVC管（即起到凹槽作用）即可满足要求。</li>
	<li>测量一段鱼线（参见 材料表）至约1.5米长，然后对折两次。 
	注意：鱼线的初始长度应根据珊瑚群体在培养箱中期望的最终位置来选择。</li>
	<li>在鱼线折叠端（即鱼线初始末端的一侧）打一个小的单结。 
	注意：打结后，底部应有两个大环，顶部有一个小环。</li>
	<li>将珊瑚群体置于两个大环的中央，使环体位于群体周围，当悬挂于水中时能够牢固地固定住珊瑚。</li>
	<li>将鱼线的小上端环扣钩入悬挂杆上的凹槽中（图 1B).</li>
</ol>
2. 珊瑚喂养
<ol>
	<li>制作喂食容器
	<ol>
		<li>使用亚克力管构建一个矩形框架（长 × 宽 × 高：25 cm × 60 cm × 25 cm）。在框架内设置两个独立的隔间，分别用于放置已投喂和未投喂的珊瑚。图1C). 
		注意：选用丙烯酸管是因为其质量轻（相对于较重的PVC管），因此更便于将喂食容器移入或移出培养罐。</li>
		<li>使用热熔胶枪将100 µm的浮游生物网附着在框架的底部和侧面。</li>
		<li>在管道上（尤其是沿框架的侧面和底部）总共钻约10个直径为0.5 cm的小孔，以防止饲喂容器放入培养罐时上浮。</li>
		<li>在喂食容器的每个角落，通过浮游生物网钻孔（直径约0.5 cm）。</li>
		<li>将一段长8 cm、直径0.5 cm的软管穿过角落的孔，并使用热熔胶枪将其固定到位。 
		注意：这些管段将在喂食期间连接至气泵和曝气石（详见步骤 2.3.2）。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>卤虫 培养
	<ol>
		<li>从一个独立的喂养水箱中采集 2 L 海水，并将海水倒入一个 卤虫 孵化容器（图1D). 
		注意：在本实验中，为演示该实验方案，使用了两个独立的处理专用饲喂罐，因此需要准备两个孵化容器。 卤虫 培养</li>
		<li>将气泵连接到与孵化容器底部相连的管路，在加入之前预先通气约10分钟 卤虫 囊肿。</li>
		<li>等待期间，使用天平称量 8 g 的 卤虫 囊肿（参见 材料表). 
		注意：为了获得平均每单位面积35个个体的密度 卤虫 如Huang等人所建议的，每毫升无节幼体数（nauplii/mL）19，使用4 g的 卤虫 将囊肿加入1升海水中。</li>
		<li>10分钟后，倒入8 g的 卤虫 将囊肿放入孵化容器中。</li>
		<li>孵育 卤虫 囊肿培养48小时。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>准备饲喂容器
	<ol>
		<li>将喂食容器放入喂食槽中，使容器顶部高于水面。</li>
		<li>将喂食容器角落管的外端连接至气泵，气泵将为气石供气，以在喂食期间促进水体循环。</li>
		<li>在开始喂食前约5分钟打开气泵。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>卤虫 无节幼体的富集与收集
	<ol>
		<li>加入1.5 mL增菌培养基（参见该 材料表在预定投喂时间前2小时将）加入孵化容器中。 
		注意：Huang 等人建议，富集饲料与海水的添加比例为 0.75 mL∶1 L。19.</li>
		<li>2小时后，关闭向孵化容器供气的阀门。</li>
		<li>用纸箱盖住孵化容器以隔绝环境光，并在孵化容器底部放置光源（手机闪光灯即可）照射5分钟，以吸引 卤虫 无节幼体沉降至容器底部，从而便于分离活体 卤虫 从空壳中分离的无节幼体</li>
		<li>5分钟后，移除盒子和光源。</li>
		<li>在孵化容器下方放置一个3 L的量筒。</li>
		<li>将管路从孵化容器上拆下，以使 卤虫 将无节幼体和海水溶液引入量杯中；收集1升该溶液 卤虫 无节幼体和海水溶液 
		注意：仅收集孵化容器中一半体积的样品，以去除不需要的空壳。</li>
		<li>靠近饲喂箱站立时，倒入 卤虫 通过100 µm筛网过滤无节幼体和海水溶液，以分离 卤虫 无节幼体（将留在过滤筛中）与海水分离。</li>
		<li>冲洗 卤虫 用饲喂罐中的水将筛网中的无节幼体冲洗两次。</li>
		<li>的 卤虫 无节幼体现已可使用。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>喂养珊瑚群体
	<ol>
		<li>卸载 卤虫 将2.4.8步骤中的滤网放入饲喂罐中，以投放无节幼体。</li>
		<li>用手搅拌水箱中的水，以均匀分布 卤虫 无节幼体 
		注意：收集样本用于后续分析 &#34;预饲喂&#34; 定量分析 卤虫 此步骤后的无节幼体密度（详见步骤 3.1）。</li>
		<li>将每个悬挂杆（珊瑚群体仍悬挂在杆上）从培养箱移至喂养箱，并将杆放置在喂养箱顶部，确保其稳固。珊瑚暴露在空气中的时间应尽可能缩短。 
		注意：确保菌落之间不相互接触，并留有足够空间以获取食物（例如，间距约 5 cm）。</li>
		<li>关闭饲喂罐的灯光，或使用非密封盖子覆盖饲喂罐，以避免饲喂过程中光照干扰。</li>
		<li>让菌落不受干扰地培养 4 h。</li>
		<li>4小时后，收集样品用于后续分析 &#34;餐后&#34; 定量分析 卤虫 无节幼体密度（详见步骤 3.1）。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>喂食后清理
	<ol>
		<li>喂食结束后，移除珊瑚群体。将悬挂杆逐一从喂食槽中取出，并用各自培养槽中的海水彻底冲洗每株珊瑚，以去除残留物 卤虫 无节幼体 
		注意：应在稳定的表面上冲洗珊瑚群落，而不是悬空冲洗，以减少因群落在冲洗过程中来回摆动而可能造成的损伤。与初次转移时相同，应尽可能缩短珊瑚暴露在空气中的时间。</li>
		<li>将悬挂杆（带有珊瑚）放回培养缸中。</li>
		<li>断开连接饲喂容器与空气泵的管路，并将饲喂容器从饲喂罐中取出。</li>
		<li>用清水彻底冲洗饲喂容器，以去除所有残留物 卤虫 无节幼体</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
3. 定量分析 卤虫 摄食前后无节幼体密度
<ol>
	<li>收集样品
	<ol>
		<li>在两个时间点采集样本：第一次，在&#160;的 卤虫 无节幼体已在投喂容器中卸下并均匀分布（步骤2.5.2），并在投喂结束后再次进行检查（步骤2.5.6）。</li>
		<li>每个时间点分别使用三支注射器从饲喂容器的表层、中层和底层各吸取20 mL水样。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>样品稀释
	<ol>
		<li>每个注射器中的20 mL水样转移至独立的500 mL烧杯中。</li>
		<li>向烧杯中加入180 mL热水（约60 °C）（1:10稀释）。 
		注意：热水用于固定 卤虫 无节幼体以提高计数的准确性。</li>
		<li>将烧杯中的水样各取 2 mL 加入 9 孔板的每个孔中。 
		注意：在烧杯中混合样品以使其均匀分布 卤虫 在吸取2 mL样品前，将无节幼体均匀分散于水体中。</li>
		<li>计数数量 卤虫 在体视显微镜下以6.5倍放大倍数观察每个孔中的无节幼体（参见 材料表).</li>
	</ol>
	</li>
	<li>计算密度 卤虫 无节幼体
	<ol>
		<li>将数量除以 卤虫 每孔卤虫幼体数量乘以2以获得总数 卤虫 每毫升无节幼体数。然后将该数值乘以10（以校正稀释倍数）来计算 卤虫 无节幼体密度</li>
		<li>计算平均密度 卤虫 无节幼体（即饲喂前后27个孔重复的平均密度）以进行比较 卤虫 前后喂食期间无节幼体密度</li>
	</ol>
	</li>
</ol>
4. 珊瑚幼虫采集
<ol>
	<li>制作幼虫收集容器（图1E）
	<ol>
		<li>选择一个6 L的塑料水瓶，将瓶底完全切除。 
		注意：此开口将用于将珊瑚群体移入和移出幼虫收集容器。</li>
		<li>在瓶子的两侧各切出一个约15 cm × 20 cm的矩形窗口。 
		注意：6 L塑料水瓶适用于直径约15 cm的珊瑚；可根据所研究珊瑚的大小调整瓶子尺寸。</li>
		<li>先使用热熔胶枪，再用环氧树脂将100 µm的浮游生物网固定在每个窗口上。</li>
		<li>在瓶底两侧各钻两个小孔（直径约0.5 cm）。</li>
		<li>将一根绳子穿过两个小孔，并将两端打结，形成一个把手，用于将幼虫收集容器挂在悬挂杆上。</li>
		<li>首次使用前，将瓶子放入流水槽（不放珊瑚）中至少24小时，以去除任何胶水残留物。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>准备收集珊瑚
	<ol>
		<li>将幼虫收集容器完全浸入培养缸中。</li>
		<li>在保持珊瑚群体和收集容器均处于水下的情况下，将群体放入幼虫收集容器中。</li>
		<li>将幼虫收集容器的把手挂在悬挂杆上。 
		注意：悬挂后，确保收集容器顶部高出水面约3 cm。</li>
		<li>重复步骤4.2.1–4.2.3，直到所有珊瑚群体均放入各自的幼虫收集容器中。</li>
	</ol>
	</li>
	<li>收集并计数珊瑚幼虫
	<ol>
		<li>准备一个3 L量杯、一个碗、一支3 mL移液器和若干50 mL离心管。</li>
		<li>将鱼线从悬挂杆上取下，从幼虫收集容器中取出一个珊瑚群体，并立即将该群体放回培养缸中。 
		注意：确保暴露在空气中的时间尽可能短。</li>
		<li>一只手扶住幼虫收集容器的瓶盖端。 
		注意：当幼虫收集容器充满水时可能较重。若缺乏适当支撑，在将其从水中取出时容器可能破裂。</li>
		<li>将幼虫收集容器&#34;把手&#34;从悬挂杆上取下。</li>
		<li>缓慢地将幼虫收集容器从水中提起。</li>
		<li>将收集容器倾斜约45°角，置于培养缸上方数秒钟，使多余的水通过容器侧面的窗口流回缸内via。 
		注意：倾斜角度不得超过45°，以减少幼虫从容器顶部倾倒出的风险。</li>
		<li>将幼虫收集容器移出水槽，并放置在量杯上方。</li>
		<li>在拧开瓶盖前，先用一根手指对瓶盖施加适度压力，然后缓慢拧开瓶盖。 
		注意：若未先用手指支撑，移除瓶盖时容器内的水可能迅速喷出（可能导致幼虫损失）。</li>
		<li>将量杯中部分水倒入碗中。</li>
		<li>使用3 mL移液器将碗中的幼虫转移至50 mL离心管中，手动计数幼虫数量。 
		注意：请注意部分幼虫可能卡在移液器内部。若发生此情况，吸入少量海水，用手指封住移液器口并轻轻摇晃，使幼虫松脱。</li>
		<li>重复步骤4.3.9和步骤4.3.10，直至所有幼虫均完成计数。此时，幼虫可用于后续实验。</li>
		<li>对所有其他珊瑚群体重复步骤4.3.2–4.3.10。 
		注意：每次更换珊瑚群体之间，应清洗量杯和碗。</li>
		<li>计数完成后，用清水彻底冲洗每个收集容器，尤其是窗口部分。</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

Ex Situ Culture of Pocillopora acuta and Effective Feeding Techniques

作者无竞争性财务利益或其他利益冲突。

温度和投喂对珊瑚繁殖影响的初步评估揭示了在不同处理条件下培养的珊瑚群体间繁殖产出和繁殖时间存在差异。此外，研究发现投喂 卤虫 无节幼体对珊瑚群体的投喂在相对较低（24°C）和较高温度（28°C）下均表现出有效性。这些综合结果凸显了这些简单技术在饲养和培育繁殖性石珊瑚（使用 P. acuta 例如）在 原位以外 水产养殖系统。
在繁殖产出方面，摄食的影响因珊瑚群体培养时的温度处理条件不同而有所差异，其中仅在24 °C处理组中，摄食似乎对繁殖产出具有积极影响。这一结果在一定程度上令人意外，因为在其他海洋生物中，高温条件下食物供给受限已被证明会对繁殖产生负面影响（例如，雀鲷的产卵量减少42），并常伴随早期生活阶段发育不良（例如，变态期间蟹类死亡率升高和生长减缓43）。在珊瑚研究中，关于摄食与温度交互效应的具体评估主要集中于珊瑚共生藻类的光化学性能44,<sup class...

全球许多珊瑚礁生态系统正因气候变化引发的高温胁迫而不断丧失和退化1,2珊瑚白化（即珊瑚与藻类共生关系的瓦解）3过去被认为相对罕见4 但目前发生频率越来越高5，预计许多地区将每年发生白化现象&#160;世纪中后期6,7这种白化事件之间间隔期的缩短可能会限制珊瑚礁恢复力的提升8高温胁迫对珊瑚群体的直接影响（如组织损伤）9；能量耗竭10与珊瑚礁尺度上的间接影响密切相关，其中繁殖和补充能力的下降尤为令人关注11。这推动了一系列应用研究，例如对活性成分的探索 原位 增强招募（例如，珊瑚礁播种）12），用于扩大珊瑚修复规模的新技术13，以及模拟生殖信号以诱导繁殖 离体 系统14与这些主动干预措施相辅相成的是，近年来人们逐渐认识到，在高温胁迫条件下，异养摄食对珊瑚具有优势15 以及探索食物供给可能在繁殖中所起的作用16.
异养摄食已知会影响珊瑚的表现17，并被明确与珊瑚生长加快18,19以及耐热性和恢复力增强20,21相关联。然而，异养摄食的益处并非在所有珊瑚物种中普遍存在22，其效果可能因所摄取食物的类型23以及光照强度的不同而有所差异24。在珊瑚繁殖方面，异养摄食的影响结果不一，已有研究报道异养摄食后繁殖能力升高25和降低26的现象。异养摄食在不同温度梯度下对珊瑚繁殖的影响极少被评估，但在温带珊瑚Cladocora caespitosa中发现，较低温度条件下异养摄食对繁殖更为重要27。要判断特定珊瑚礁（例如与高食物可利用性相关的珊瑚礁28）是否在气候变化下具有更强的补充能力，可能需要更深入地理解温度和摄食对繁殖产出的作用。
与繁殖产出类似，温度和摄食对珊瑚繁殖时间的影响仍相对缺乏研究，尽管在海洋变暖背景下，繁殖与非生物/生物条件的同步性对于补充成功率而言是一个重要的考量因素29. 实验室中进行的珊瑚热适应研究表明，较高的温度会导致珊瑚更早地进行繁殖30，这一现象也在从自然珊瑚礁在不同季节采集的珊瑚样本中被观察到31然而，有趣的是，最近在为期1年的饲养珊瑚培养实验中观察到了相反的趋势 离体 流通式系统（即在较冷的冬季温度下，繁殖发生在月相周期的较早阶段，而在较暖的夏季温度下，繁殖发生在月相周期的较晚阶段）32这一对比结果表明，在能量资源丰富的条件下，生殖时机可能会偏离典型模式。
在不同温度情景下开展长期受控实验，有助于深入理解异养作用对石珊瑚繁殖的影响。维持珊瑚群体在繁殖期间的培养条件 离体 多次繁殖周期的条件可能具有挑战性（但参见先前研究）32,33）。本文介绍了用于主动摄食（食物来源： 卤虫 无节幼体）以及一种孵育型珊瑚的长期培养Pocillopora acuta在流水式水产养殖系统中描述了这些技术；但应注意，所描述的所有技术也可用于循环水产养殖系统。为展示这些技术，对在24 °C和28 °C条件下养殖的珊瑚群体的繁殖产出和繁殖时间进行了初步比较 &#34;喂养&#34; 和 &#34;未进食的&#34; 处理在选定的温度下进行，这些温度分别用于近似中国台湾南部冬季和夏季的海水温度30,34；未选择更高温度，因为会促进长期 离体 培养珊瑚而非测试其对热应激的反应是本实验的主要目标。此外，珊瑚密度的 卤虫 摄食前后无节幼体的数量被量化&#160;比较两种温度处理下异养摄食的可行性。
具体而言，24个菌落 P. acuta （平均总线性延伸长度 ± 标准差：21.3 cm ± 2.8 cm）来自国家海洋生物博物馆研究设施的流水式水箱 &amp;#38; 中国台湾南部水族馆 Pocillopora acuta 是一种常见的珊瑚物种，具有广布性产卵特征，但&#160;典型的育雏型繁殖策略35,36这些珊瑚的亲本群体最初于约2年前从Outlet礁（21.931°E，120.745°N）采集，用于另一项实验。32因此，本实验所用的珊瑚群体在其整个生命周期中均在以下条件下培育 离体 培养条件；具体而言，将菌落置于室温环境及光暗循环为12小时光照：12小时黑暗、光照强度为250 µmol quanta m⁻²s⁻¹的条件下培养−2·s−1 并被喂食 卤虫 每周两次投放无节幼体。我们认识到，这种长期 离体 培养条件可能影响了珊瑚群体对本实验中处理条件的响应。因此，我们希望强调，本研究的主要目的是展示所描述的技术如何被有效用于珊瑚的培养 离体 通过一个应用实例，评估了温度和摄食对珊瑚繁殖的影响。
珊瑚群体均匀分布于六个流水式培养系统水箱中（水箱内部尺寸：长 × 宽 × 高 = 175 cm × 62 cm × 72 cm；水箱光照条件：12小时光照:12小时黑暗循环，光照强度为250 µmol quanta m−2·s−1）（图1A）。其中三个水箱的温度设定为28 °C，另外三个水箱的温度设定为24 °C；每个水箱均配备记录仪，每10分钟记录一次温度（见材料表）。各水箱的温度通过冷水机和加热器独立控制，并使用循环泵维持水体流动（见材料表）。每个水箱中一半的珊瑚群体（n = 2 个群体/水箱）每周喂食两次卤虫（Artemia）无节幼体，其余群体则不喂食。每次喂食持续4小时，在两个独立的、温度特定的喂食水箱中进行。喂食期间，所有珊瑚群体（包括未喂食组）均被转移至喂食水箱，以标准化因转移操作可能带来的应激影响。在温度特定的喂食水箱内，通过带网隔框将喂食组与未喂食组的珊瑚群体分隔开，确保仅喂食组群体获得食物。每天上午09:00通过统计前一晚释放到幼体收集容器中的幼虫数量，评估每个珊瑚群体的繁殖产出量及繁殖时间。

<table><tbody><tr><td>卤虫卵囊&amp;nbsp;</td><td>Supreme plus</td><td>NA</td><td>食物来源&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>冷水机</td><td>Resun</td><td>CL650</td><td>必要时用于降低水温</td></tr><tr><td>便携式电导率仪</td><td>WTW</td><td>Cond 3110</td><td>用于测量盐度</td></tr><tr><td>营养强化饲料</td><td>Omega</td><td>NA</td><td>用于卤虫培养</td></tr><tr><td>钓鱼线</td><td>Super</td><td>尼龙单丝</td><td>用于悬挂珊瑚群体</td></tr><tr><td>造流泵</td><td>Maxspect</td><td>GP03</td><td>用于产生水流</td></tr><tr><td>350 W 加热棒</td><td>ISTA</td><td>NA</td><td>水族箱中使用的加热器</td></tr><tr><td>HOBO 便携式温度记录仪</td><td>Onset Computer</td><td>UA-002-08</td><td>用于记录水温</td></tr><tr><td>LED 灯</td><td>Mean Well</td><td>FTS: HLG-185H-36B</td><td>NA</td></tr><tr><td>便携式光照强度计</td><td>LI-COR</td><td>LI-250A</td><td>与光传感器配合使用，测量光合有效辐射（PAR）强度</td></tr><tr><td>光传感器</td><td>LI-COR</td><td>LI-193SA</td><td>NA</td></tr><tr><td>100 &amp;micro;m 网孔的浮游生物网</td><td>Omega</td><td>NA</td><td>用于收集幼虫和卤虫&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>主水泵 6000 L/H</td><td>Mr. Aqua</td><td>BP6000</td><td>将水从水族箱抽入冷水机</td></tr><tr><td>叶轮式流速仪</td><td>KENEK</td><td>GR20</td><td>与叶轮式探测器配合使用，测量流速</td></tr><tr><td>叶轮式探测器</td><td>KENEK</td><td>GR3T-2-20N</td><td>NA</td></tr><tr><td>体视显微镜</td><td>Zeiss</td><td>Stemi 2000-C&amp;nbsp;</td><td>用于计数卤虫数量&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>1000 W 温度控制器</td><td>Rep Park</td><td>O-RP-SDP-1</td><td>用于设定并维持水温</td></tr></tbody></table>

有效的喂养与 离体 一种孵育型石珊瑚的培养 pocillopora acuta

Effective Techniques for the Feeding and Ex Situ Culture of a Brooding Scleractinian Coral, Pocillopora acuta

气候变化正在影响全球珊瑚的存活、生长和补充，预计在接下来的几十年中，珊瑚礁生态系统将出现大规模的丰度变化和群落组成转变。认识到珊瑚礁退化问题后，已催生了一系列基于研究和恢复的新型主动干预措施。ex situ（异地）养殖可通过建立稳健的珊瑚培养方案（例如，提高长期实验中的健康状况和繁殖能力）以及提供稳定的亲本种群供应（例如，用于恢复项目）发挥支持作用。本文以常见且研究充分的珊瑚Pocillopora acuta为例，概述了对内胚层孵化型石珊瑚进行投喂和ex situ养殖的简单技术。为展示该方法，将珊瑚群体暴露于不同温度（24 °C 与 28 °C）和投喂处理（投喂 vs. 不投喂）条件下，比较其繁殖产出与繁殖时间，以及在两种温度下投喂卤虫（Artemia）无节幼体的可行性。不同珊瑚群体间的繁殖产出表现出高度变异性，且在不同温度处理组中呈现不同的趋势：在24 °C条件下，投喂组产生的幼体多于未投喂组；但在28 °C培养的群体中则呈现相反结果。所有群体均在满月前完成繁殖，仅在28 °C未投喂组与24 °C投喂组之间观察到繁殖时间的显著差异（平均繁殖月相日数 ± 标准差：分别为6.5 ± 2.5 和 11.1 ± 2.6）。在两种处理温度下，珊瑚群体均能高效摄食Artemia无节幼体。这些提出的投喂与培养技术注重以低成本、可定制的方式减少珊瑚应激并促进其繁殖寿命延长，适用于流水式和循环式水产养殖系统，具有广泛的适用性。

所述方案实现了：（1）在不同喂养和温度处理条件下，对单个珊瑚群体的繁殖产出和繁殖时间进行比较；（2）评估在不同温度下投喂卤虫（Artemia）无节幼体的可行性。本文简要概述了研究结果，但由于本实验为短期性质（即仅一个繁殖周期），且所用珊瑚群体已适应异地（ex situ）培养条件，因此在广泛解释温度和喂养对珊瑚繁殖影响时应谨慎对待。
在监测期间（2022年农历9月），每个菌落均进行了繁殖，各菌落的月总繁殖输出量表现出较大差异。菌落释放的幼体总数范围为6至319，但有一个菌落（在24 °C未喂食处理组）产生了528个幼体；所有菌落的数据均显示在图2中，但在数据分析中未包含该高产出的离群菌落。繁殖输出量受温度（广义线性混合效应模型；z = 5.35，p &lt; 0.001）和喂食条件（z = 3.01，p &lt; 0.003）的影响，且温度与喂食处理之间存在显著交互作用（z = 12.22，p &lt; 0.001）。在28 °C培养的...

气候变化正在全球范围内影响珊瑚礁生态系统。来自 离体 水产养殖系统有助于支持生态恢复与科研工作。本文介绍了可用于促进内育型石珊瑚长期养护的投喂与珊瑚培养技术 离体 已概述。

有效的喂养与 离体 一种孵育型石珊瑚的培养 Pocillopora acuta

气候变化正在影响全球珊瑚的存活、生长和补充，导致其丰度和群落组成发生大规模变化……

我们的实验室致力于研究珊瑚在气候变化中的耐受性与恢复力，并探索异地水产养殖的作用。具体而言，我们的目标是在实验室中培育可用于生态修复和科学研究的珊瑚。在过去几年中，珊瑚异地水产养殖取得了重大进展，包括能够在广幅产卵型和孵育型珊瑚中诱导其繁殖，并完成整个珊瑚生命周期。在实验室中维持孵育型珊瑚的长期繁殖通常非常具有挑战性，其繁殖通常在数月后便会停止。然而，我们发现，如果将珊瑚置于定制的米索培养箱中共同培养，并为其提供补充食物，它们便能够每月持续产生幼体。总体而言，我们对摄食和温度各自如何影响珊瑚繁殖已有较好的理解，但二者之间的交互作用仍相对缺乏研究。例如，异养作用在较高温度下可能表现出与较低温度下不同的益处或局限性。利用我们所描述的实验方案，可以在异地养殖系统中对珊瑚群体进行长期的有效喂养和培养，并最终在群体水平上追踪其繁殖情况，从而有助于推断在海洋变暖背景下异养作用对繁殖和补充过程的影响。首先，在培养箱中横置一根带凹槽的杆（也称为悬挂杆），用于固定悬挂珊瑚群体。将珊瑚群体置于两个较大的环之间，确保这两个环牢固地固定在群体周围，以保证其在水中悬挂时的稳定性。将鱼线顶部较小的环钩入悬挂杆的凹槽中。从一个独立的喂养水箱中采集两升海水，倒入卤虫孵化容器中。接着，将气泵连接到与孵化容器底部相连的管路上，在加入卤虫卵囊之前让其运行约10分钟。等待期间，使用天平称取八克卤虫卵囊。10 分钟后，将量取的卤虫卵倒入孵化容器中。接着，将喂养容器放入喂养水箱中以准备喂养水箱，确保其顶部保持在水面以上。将喂养容器角落管的外端连接至气泵，由气泵向气石供气，以保证喂养期间水体的充分循环。为了强化卤虫无节幼体的营养，在预定投喂时间前两小时，向孵化容器中加入1.5 mL的营养强化剂。两小时后，关闭向孵化容器供气的阀门。将光源置于孵化容器底部后，用纸板箱将其覆盖，以隔绝环境光。让光线照射容器底部五分钟，使卤虫无节幼体被吸引至底部，从而将活的卤虫无节幼体与空卵壳分离。五分钟后，移去盒子和光源，在孵化容器下方放置一个三升的量筒。将管路从孵化容器上拆下，使卤虫无节幼虫和海水溶液流入量杯中，收集一升该溶液。在靠近饲喂水箱的位置，将卤虫无节幼虫和海水溶液通过孔径为100微米的筛网过滤，以分离卤虫无节幼虫与海水。随后，用饲喂水箱中的水在筛网内将卤虫无节幼虫冲洗两次。将过滤器放入喂养槽中，以释放卤虫无节幼体。接着，搅拌槽内水体，使无节幼体均匀分布于整个槽内。将带有附着珊瑚群体的每个悬挂杆从培养槽转移至喂养槽。确保悬挂杆牢固地横置于饲喂槽顶部。饲喂四小时后，将悬挂杆从饲喂槽中取出，移除珊瑚群体。用各自培养槽中的海水彻底冲洗每株珊瑚，以去除残留的卤虫无节幼体。将带有附着珊瑚的悬挂杆放回各自培养缸中。为了定量用于珊瑚喂养实验的卤虫无节幼体，在两个时间点采集样品。每个时间点使用三支注射器，分别从喂养容器的表层、中层和底层各采集 20 mL 水样。将采集的水样转移至各个500 mL烧杯中。随后，向烧杯中加入180 mL约60摄氏度的热水，以实现1:10的稀释比例。从烧杯中取2 mL水样，分别加入六孔板的每个孔中。接下来，在体视显微镜下将放大倍数设为6.5倍，统计每个孔中卤虫无节幼体的数量。在珊瑚摄食实验前后对卤虫无节幼体进行密度测定，结果显示，在初始时间点（T零）的评估中，两种温度处理组之间无显著差异。经过两周和四周的培养后，两种温度处理组在摄食后的卤虫无节幼体密度均有所降低。在三个评估时间点中的任何一个时间点，不同温度处理组之间的摄食前密度或摄食后密度均无差异。将幼虫收集容器完全浸入培养罐中。接着，将珊瑚群体浸入幼虫容器中，确保两者均保持在水面以下。然后将幼虫收集容器的把手钩在悬挂杆上。次日早晨，将鱼线从悬挂杆上取下，小心地将一个种群从其幼虫收集容器中取出，并立即放回培养缸中。接下来，将幼虫收集容器从水箱中取出，放置在量杯上方。用一根手指轻轻按压瓶盖，然后将其拧开。将量杯中的水倒入碗中。使用3 mL移液器将幼虫转移到50 mL离心管中，并手动计数培养皿中的幼虫。该方法可用于评估鹿角杯形珊瑚（Pocillopora acuta）群体在不同温度和喂养处理条件下的繁殖产出。在28摄氏度下培养的群体，未喂食时释放的幼虫数量多于喂食时；而在24摄氏度下培养的群体则呈现相反趋势，即喂食群体产生的幼虫数量多于未喂食群体。所有群体的繁殖均发生在满月之前。幼虫释放的平均月相日数范围为农历第6.5天至第11.1天。然而，不同处理组之间仅在未投喂28摄氏度组与投喂24摄氏度组之间观察到显著差异：前者在月相周期较早时繁殖，后者则在月相周期较晚时繁殖。

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Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

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